h*2
2 楼
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ay
3 楼
要的速度
b*8
4 楼
如题,手上的一个真和表达质粒,据说是当初从Addgene买回来的,DH5alpha的菌液,
前段时间快用完了,用TOP10做了转化,使用invitrogen的midi prep kit提取中抽,产
量超低,几乎看不到沉淀,重复两次都一样,同一批操作的其它质粒都没问题,产量一
般在100ug左右。后来考虑是不是感受态不同导致,找别的组要了DH5alpha回来转化,
再提,还是没有改善,只能看到很少的一点点白色沉淀,现在正在airdry,估计产量也
就在几ug的水平,请问大家有没有遇到这个问题,该怎么解决呢?
前段时间快用完了,用TOP10做了转化,使用invitrogen的midi prep kit提取中抽,产
量超低,几乎看不到沉淀,重复两次都一样,同一批操作的其它质粒都没问题,产量一
般在100ug左右。后来考虑是不是感受态不同导致,找别的组要了DH5alpha回来转化,
再提,还是没有改善,只能看到很少的一点点白色沉淀,现在正在airdry,估计产量也
就在几ug的水平,请问大家有没有遇到这个问题,该怎么解决呢?
m*7
6 楼
我建议你先小提看看。
见过一个很极端的例子,某个质粒小提时没有任何问题,一扩大培养基体积细菌就产不
了多少质粒。那个实验室每次提质粒时就只好上100个试管,再合起来提;或者铺一
大块琼脂培养基,等菌苔长满再刮下来提。
那个实验室的PI和别人讨论觉得可能是插入序列有未知潜在抑制作用,但谁也不知道原
因,只好先这么做了。
另外,很早以前有些老质粒是需要在培养过程中用 IPTG诱导的。你看看质粒信息是否
有这种可能性存在。
见过一个很极端的例子,某个质粒小提时没有任何问题,一扩大培养基体积细菌就产不
了多少质粒。那个实验室每次提质粒时就只好上100个试管,再合起来提;或者铺一
大块琼脂培养基,等菌苔长满再刮下来提。
那个实验室的PI和别人讨论觉得可能是插入序列有未知潜在抑制作用,但谁也不知道原
因,只好先这么做了。
另外,很早以前有些老质粒是需要在培养过程中用 IPTG诱导的。你看看质粒信息是否
有这种可能性存在。
w*n
10 楼
买过一个addgene的质粒,小提提不出来,大提才行。
【在 b**********8 的大作中提到】
: 如题,手上的一个真和表达质粒,据说是当初从Addgene买回来的,DH5alpha的菌液,
: 前段时间快用完了,用TOP10做了转化,使用invitrogen的midi prep kit提取中抽,产
: 量超低,几乎看不到沉淀,重复两次都一样,同一批操作的其它质粒都没问题,产量一
: 般在100ug左右。后来考虑是不是感受态不同导致,找别的组要了DH5alpha回来转化,
: 再提,还是没有改善,只能看到很少的一点点白色沉淀,现在正在airdry,估计产量也
: 就在几ug的水平,请问大家有没有遇到这个问题,该怎么解决呢?
【在 b**********8 的大作中提到】
: 如题,手上的一个真和表达质粒,据说是当初从Addgene买回来的,DH5alpha的菌液,
: 前段时间快用完了,用TOP10做了转化,使用invitrogen的midi prep kit提取中抽,产
: 量超低,几乎看不到沉淀,重复两次都一样,同一批操作的其它质粒都没问题,产量一
: 般在100ug左右。后来考虑是不是感受态不同导致,找别的组要了DH5alpha回来转化,
: 再提,还是没有改善,只能看到很少的一点点白色沉淀,现在正在airdry,估计产量也
: 就在几ug的水平,请问大家有没有遇到这个问题,该怎么解决呢?
S*e
12 楼
我也碰到过这样的问题,挺烦人
其他人也说了,1)试试miniprep; 2)降低培养温度
【在 b**********8 的大作中提到】
: 如题,手上的一个真和表达质粒,据说是当初从Addgene买回来的,DH5alpha的菌液,
: 前段时间快用完了,用TOP10做了转化,使用invitrogen的midi prep kit提取中抽,产
: 量超低,几乎看不到沉淀,重复两次都一样,同一批操作的其它质粒都没问题,产量一
: 般在100ug左右。后来考虑是不是感受态不同导致,找别的组要了DH5alpha回来转化,
: 再提,还是没有改善,只能看到很少的一点点白色沉淀,现在正在airdry,估计产量也
: 就在几ug的水平,请问大家有没有遇到这个问题,该怎么解决呢?
其他人也说了,1)试试miniprep; 2)降低培养温度
【在 b**********8 的大作中提到】
: 如题,手上的一个真和表达质粒,据说是当初从Addgene买回来的,DH5alpha的菌液,
: 前段时间快用完了,用TOP10做了转化,使用invitrogen的midi prep kit提取中抽,产
: 量超低,几乎看不到沉淀,重复两次都一样,同一批操作的其它质粒都没问题,产量一
: 般在100ug左右。后来考虑是不是感受态不同导致,找别的组要了DH5alpha回来转化,
: 再提,还是没有改善,只能看到很少的一点点白色沉淀,现在正在airdry,估计产量也
: 就在几ug的水平,请问大家有没有遇到这个问题,该怎么解决呢?
d*0
13 楼
传说中的亮机卡
b*8
14 楼
多谢楼上各位分享经验。看到有人建议用miniprep,可是我要用这个质粒做转染,
miniprep的产物可以直接转染吗?
另外,降低温度可能有效,这个温度有没有具体的范围呢?室温?30度?我昨天晚上又挑了一个放在室温下摇过夜,今早来看发现培养液清亮,应该是没涨起来,刚才又把温度加到30度了,不知道行不行。
miniprep的产物可以直接转染吗?
另外,降低温度可能有效,这个温度有没有具体的范围呢?室温?30度?我昨天晚上又挑了一个放在室温下摇过夜,今早来看发现培养液清亮,应该是没涨起来,刚才又把温度加到30度了,不知道行不行。
w*n
16 楼
抗生素浓度加倍,培养时间加倍,培养体积10倍,然后大提。
【在 b**********8 的大作中提到】
: 如题,手上的一个真和表达质粒,据说是当初从Addgene买回来的,DH5alpha的菌液,
: 前段时间快用完了,用TOP10做了转化,使用invitrogen的midi prep kit提取中抽,产
: 量超低,几乎看不到沉淀,重复两次都一样,同一批操作的其它质粒都没问题,产量一
: 般在100ug左右。后来考虑是不是感受态不同导致,找别的组要了DH5alpha回来转化,
: 再提,还是没有改善,只能看到很少的一点点白色沉淀,现在正在airdry,估计产量也
: 就在几ug的水平,请问大家有没有遇到这个问题,该怎么解决呢?
【在 b**********8 的大作中提到】
: 如题,手上的一个真和表达质粒,据说是当初从Addgene买回来的,DH5alpha的菌液,
: 前段时间快用完了,用TOP10做了转化,使用invitrogen的midi prep kit提取中抽,产
: 量超低,几乎看不到沉淀,重复两次都一样,同一批操作的其它质粒都没问题,产量一
: 般在100ug左右。后来考虑是不是感受态不同导致,找别的组要了DH5alpha回来转化,
: 再提,还是没有改善,只能看到很少的一点点白色沉淀,现在正在airdry,估计产量也
: 就在几ug的水平,请问大家有没有遇到这个问题,该怎么解决呢?
s*s
21 楼
经典方法是直接摇1L,长到对数期的时候加点氯霉素抑制细胞分裂,
然后过夜。这样菌体可能和200ml的普通生长差不多,适合中大提,但
是质粒会累积很多
又挑了一个放在室温下摇过夜,今早来看发现培养液清亮,应该是没涨起来,刚才又把
温度加到30度了,不知道行不行。
【在 b**********8 的大作中提到】
: 多谢楼上各位分享经验。看到有人建议用miniprep,可是我要用这个质粒做转染,
: miniprep的产物可以直接转染吗?
: 另外,降低温度可能有效,这个温度有没有具体的范围呢?室温?30度?我昨天晚上又挑了一个放在室温下摇过夜,今早来看发现培养液清亮,应该是没涨起来,刚才又把温度加到30度了,不知道行不行。
然后过夜。这样菌体可能和200ml的普通生长差不多,适合中大提,但
是质粒会累积很多
又挑了一个放在室温下摇过夜,今早来看发现培养液清亮,应该是没涨起来,刚才又把
温度加到30度了,不知道行不行。
【在 b**********8 的大作中提到】
: 多谢楼上各位分享经验。看到有人建议用miniprep,可是我要用这个质粒做转染,
: miniprep的产物可以直接转染吗?
: 另外,降低温度可能有效,这个温度有没有具体的范围呢?室温?30度?我昨天晚上又挑了一个放在室温下摇过夜,今早来看发现培养液清亮,应该是没涨起来,刚才又把温度加到30度了,不知道行不行。
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