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有人用过碱性urea PAGE么？

有人用过碱性urea PAGE么？# Biology - 生物学

B*y2011-05-16 07:05

1 楼

牛蒡莲子鸡汤
1.材料：牛蒡1/2根，莲子1把（15颗左右），蜜枣2个，姜2片，煲汤老鸡半只。
2.煲汤老鸡砍三大块，用热水烫过。牛蒡削皮切大片。所有材料放入沙锅中，加适量水
，大火煮开后，小火煮1-1.5小时.最后放盐调味.
沙姜鸡(适合party带菜)
1.原材料:土鸡1只2-2.5磅
腌制材料:沙姜粉2汤匙,姜粉1汤匙,白胡椒粉1汤匙,五香粉1汤匙,海盐3-4汤匙,麻油
适量.
2.把所有腌制材料中的粉料,按照比例放在大碗中,拌匀后,戴上手套,把所有粉料将鸡内腔和外面摸个均匀.最后摸一层麻油.盖上锡箔纸,放入冰箱过夜.
也可提早3,4小时腌制.
3.烤箱375F预热后,把鸡盖着锡箔纸,放入烤箱,烤大约2小时.
烤熟后,鸡肉嫩,多汁而咸香.可以砍块上碟,或者做手撕鸡.
鸡肉咖喱角
1.馅料:鸡肉绞肉1/4磅,洋葱1个,切小粒,咖喱粉
2.酥皮:现买成品,puff pastry一盒
3.操作:锅里一茶匙牛油化开,放洋葱粒,炒香,放鸡肉碎,加适量咖喱粉(根据个人口味),盐.
馅料炒熟后,放凉.(剩下放冷藏,可留下次使用)
4.烤箱375f预热(puff pastry说明书上要求400f),puff pastry放在室温30分钟左右解冻.铺在干净平整的地方,切大约3X3英寸大小.放入少量鸡肉咖喱陷,对角合起来,放在烤盘上,扫一层蛋黄液.
烤20左右,咖喱角呈金黄状即可.

a*e2011-05-16 07:05

2 楼

Comerica Bank is offering a $100 cash bonus for opening any new personal
checking account. Direct deposit isn't required. However, it does require
some work. This offer is called Welcome Rewards and is listed on Comerica's
front page and in this bank's promotion page as of 2/10/2011.
http://campaign.comerica.com/personal-banking/rewards?utm_sourc
The required steps to qualify for the $100 bonus are shown below:
•Be a new Comerica personal checking account customer. All personal
checking account types are eligible.
•Register online for the program within 30 days of opening your new
checking account
•Establish a recurring direct deposit of at least $150 per month OR
recurring ACH payments that total at least $150 per month (within 90 days of
opening account)
•Make at least 10 check card purchases totaling $250 within 90 days OR
sign up for Comerica Web Bill Pay and conduct at least 10 transactions
totaling $250 (within 90 days of opening account)
The main issue with Comerica's checking accounts is that they all have
potential monthly fees. The checking account that is easiest to have the
fees waived is the Access Checking. Fees can be waived if you maintain a $
750 minimum balance, or have direct deposit, or if you are a full time
college student. There's also a quarterly inactivity fee that you have to
watch out for.
When I called Comerica last year about a similar promotion, I was told you
could apply and qualify for the bonus even if you don't live near a branch.
Their toll-free number is 800.979.0850.

s*y2011-05-16 07:05

3 楼

我们只有acetic acid urea PAGE 的配方，但是现在要跑一个酸性蛋白
所以不能用acetic acid urea PAGE。我觉得应该也有碱性urea PAGE吧？
但是很少听说过。不知道这种配方是否存在？
有人有经验么？
求指点。

F*t2011-05-16 07:05

4 楼

把图贴上来吧

y*i2011-05-16 07:05

5 楼

source:
http://www.depositaccounts.com/blog/2011/02/checking-account-10

s

【在 a*******e 的大作中提到】

: Comerica Bank is offering a $100 cash bonus for opening any new personal
: checking account. Direct deposit isn't required. However, it does require
: some work. This offer is called Welcome Rewards and is listed on Comerica's
: front page and in this bank's promotion page as of 2/10/2011.
: http://campaign.comerica.com/personal-banking/rewards?utm_sourc
: The required steps to qualify for the $100 bonus are shown below:
: •Be a new Comerica personal checking account customer. All personal
: checking account types are eligible.
: •Register online for the program within 30 days of opening your new
: checking account

T*t2011-05-16 07:05

6 楼

木有经验。。。
只用Urea Gel跑过核酸，记得好像都不加acetic acid的，就是用的TBE，TBE是偏碱性
的，所以应该用碱性buffer也没啥问题吧。
这个文献不知道有没有帮助：
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7536962
我没去下来看，所以不知道细节。

s*i2011-05-16 07:05

7 楼

y*c2011-05-16 07:05

8 楼

这种非本地local小银行就算了，半年前那两家非本地local小银行还记忆犹新
第一次开checking被拒，对方还玩了点小花招

s*y2011-05-16 07:05

9 楼

谢谢！这个文章很有用，至少它告诉了我这个胶该怎么配。
不知道有没有人用过这个技术。我现在担心的就是不知道我的蛋白该跑多久，
比方说怎么估计这个跑胶的时间。因为这个似乎就和loading dye 没有关系了。

【在 T**********t 的大作中提到】

: 木有经验。。。
: 只用Urea Gel跑过核酸，记得好像都不加acetic acid的，就是用的TBE，TBE是偏碱性
: 的，所以应该用碱性buffer也没啥问题吧。
: 这个文献不知道有没有帮助：
: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7536962
: 我没去下来看，所以不知道细节。

B*y2011-05-16 07:05

10 楼

忘了用flick怎么贴图了.

【在 F*******t 的大作中提到】

: 把图贴上来吧

a*g2011-05-16 07:05

11 楼

可以试试

T*t2011-05-16 07:05

12 楼

为什么一定要用urea PAGE呢？普通的SDS-PAGE不行么？
我没跑过urea page的蛋白胶，不知道这个方法的好处在哪里，还请指教。

s*i2011-05-16 07:05

13 楼

你需要找到图片地址，以.jpg结尾的。
鼠标移到大图上，点右键，看属性，弹出框里有图片地址。

【在 s*******i 的大作中提到】

y*r2011-05-16 07:05

14 楼

曾经申请过一回，寄了很多材料过去，结果被莫名其妙的拒了

s*y2011-05-16 07:05

15 楼

普通的胶有些事情做不了
urea 胶可以由于电性的不同来区分不同的蛋白修饰，比方说如果是磷酸化的话
就会跑得和主带不一样了。
这个其实是比较传统的实验。现在有了质谱这个这个实验都快失传了。
但是质谱的坏处是很难定量，而且也不是那么的consistant，看到了就说有，
没看到则不能说有没有，

【在 T**********t 的大作中提到】

: 为什么一定要用urea PAGE呢？普通的SDS-PAGE不行么？
: 我没跑过urea page的蛋白胶，不知道这个方法的好处在哪里，还请指教。

B*y2011-05-16 07:05

16 楼

谢~~

【在 s*******i 的大作中提到】

: 你需要找到图片地址，以.jpg结尾的。
: 鼠标移到大图上，点右键，看属性，弹出框里有图片地址。

T*t2011-05-16 07:05

17 楼

哦，又学习了。：）

【在 s******y 的大作中提到】

: 普通的胶有些事情做不了
: urea 胶可以由于电性的不同来区分不同的蛋白修饰，比方说如果是磷酸化的话
: 就会跑得和主带不一样了。
: 这个其实是比较传统的实验。现在有了质谱这个这个实验都快失传了。
: 但是质谱的坏处是很难定量，而且也不是那么的consistant，看到了就说有，
: 没看到则不能说有没有，

d*22011-05-16 07:05

18 楼

nice

s*s2011-05-16 07:05

19 楼

去查一下histone的文章或者lab, 这个应该都是你说的那种

【在 s******y 的大作中提到】

: 我们只有acetic acid urea PAGE 的配方，但是现在要跑一个酸性蛋白
: 所以不能用acetic acid urea PAGE。我觉得应该也有碱性urea PAGE吧？
: 但是很少听说过。不知道这种配方是否存在？
: 有人有经验么？
: 求指点。

w*a2011-05-16 07:05

20 楼

我一直不知道牛蒡是干嘛的

【在 B**********y 的大作中提到】

: 牛蒡莲子鸡汤
: 1.材料：牛蒡1/2根，莲子1把（15颗左右），蜜枣2个，姜2片，煲汤老鸡半只。
: 2.煲汤老鸡砍三大块，用热水烫过。牛蒡削皮切大片。所有材料放入沙锅中，加适量水
: ，大火煮开后，小火煮1-1.5小时.最后放盐调味.
: 沙姜鸡(适合party带菜)
: 1.原材料:土鸡1只2-2.5磅
: 腌制材料:沙姜粉2汤匙,姜粉1汤匙,白胡椒粉1汤匙,五香粉1汤匙,海盐3-4汤匙,麻油
: 适量.
: 2.把所有腌制材料中的粉料,按照比例放在大碗中,拌匀后,戴上手套,把所有粉料将鸡内腔和外面摸个均匀.最后摸一层麻油.盖上锡箔纸,放入冰箱过夜.
: 也可提早3,4小时腌制.

s*y2011-05-16 07:05

21 楼

Histone 是碱性蛋白，所以可以用比较常用的acetic acid-urea PAGE.
我们的蛋白是酸性的，不能用他们的配方。

【在 s******s 的大作中提到】

: 去查一下histone的文章或者lab, 这个应该都是你说的那种

l*g2011-05-16 07:05

22 楼

同不知道。。。我一直以为那东西是山药。。

【在 w********a 的大作中提到】

: 我一直不知道牛蒡是干嘛的

C*e2011-05-16 07:05

23 楼

你跑变性胶为什么还需要顾忌pH值？
好奇这个酸性urea PAGE是做什么用的？

【在 s******y 的大作中提到】

d*e2011-05-16 07:05

24 楼

###此帖已应当事人要求删除###

s*y2011-05-16 07:05

25 楼

酸性urea 胶用来跑碱性蛋白是为了分析posttranslational modification

【在 C*******e 的大作中提到】

: 你跑变性胶为什么还需要顾忌pH值？
: 好奇这个酸性urea PAGE是做什么用的？

y*o2011-05-16 07:05

26 楼

我喜欢楼主家炖鸡汤的那个钵子，看起来真不错啊！

C*e2011-05-16 07:05

27 楼

学习了
谢谢
一直做原核的蛋白
对于posttranslational modification不熟：）
借问一下
如果一个蛋白怀疑有糖基化修饰
第一步该怎么验证呢？

【在 s******y 的大作中提到】

: 酸性urea 胶用来跑碱性蛋白是为了分析posttranslational modification

l*t2011-05-16 07:05

28 楼

营养~

s*y2011-05-16 07:05

29 楼

糖基化的蛋白跑在一般的SDS-PAGE 里会成一条长长的拖带。
然后用糖水解酶处理之后拖带会消失。

【在 C*******e 的大作中提到】

: 学习了
: 谢谢
: 一直做原核的蛋白
: 对于posttranslational modification不熟：）
: 借问一下
: 如果一个蛋白怀疑有糖基化修饰
: 第一步该怎么验证呢？

s*i2011-05-16 07:05

30 楼

哇，看上去很好

A*d2011-05-16 07:05

31 楼

why not do a 2-D gel? phosphorylation will be very easy to see

【在 s******y 的大作中提到】

h*t2011-05-16 07:05

32 楼

赞
BTW, 沙姜粉, 姜粉是什么？

【在 B**********y 的大作中提到】

s*y2011-05-16 07:05

33 楼

自己没有仪器跑2D。
送到core 太贵（150多美元跑一次，而且跑坏了不管），而且还慢
（至少得一个星期才能给结果，最慢的时候要等一个月，因为人家忙得很。
另外一个考量就是2D每跑一个胶要比较大的上样量，还有不同的样品比较起来
很麻烦。
Urea胶需要的上样量小，而且很容易side by side 跑几条lane,
各种条件处理的结果一目了然。

【在 A******d 的大作中提到】

: why not do a 2-D gel? phosphorylation will be very easy to see

E*A2011-05-16 07:05

34 楼

闻着香味进来了

c*c2011-05-16 07:05

35 楼

分子克隆上就有啊，跑单链核酸用。配方应该在单链探针制备那部分。

【在 s******y 的大作中提到】

w*o2011-05-16 07:05

36 楼

赞啊！！！！

s*y2011-05-16 07:05

37 楼

谢谢，但是那个不是给蛋白设计的，没有stacking gel,
跑出来的带会特别胖

【在 c*c 的大作中提到】

: 分子克隆上就有啊，跑单链核酸用。配方应该在单链探针制备那部分。

H*s2011-05-16 07:05

38 楼

不能不赞哪!

i*g2011-05-16 07:05

39 楼

urea hydrolyzed in basic PH
typical SDS-PAGE may or may not work out this phos-acid protein modification
years ago i learned the multiple-phos of ATR protein generates a smear of up
-bands in the gel.

z*82011-05-16 07:05

40 楼

这个沙姜鸡太赞了，请问楼主在哪买的土鸡？

【在 B**********y 的大作中提到】

c*y2011-05-16 07:05

41 楼

自己灌IEF胶，然后直接把一相转膜western
不过抗体检测，一般都有很多修饰点的

B*y2011-05-16 07:05

42 楼

我在纽约，各大华人超市都有。

【在 z*****8 的大作中提到】

:
: 这个沙姜鸡太赞了，请问楼主在哪买的土鸡？

i*k2011-05-16 07:05

43 楼

读研究生时隔壁实验室经常跑尿素胶看叶绿体膜蛋白
手头正好有《蛋白质技术手册》
见附件，应该很简单的

【在 s******y 的大作中提到】

y*o2011-05-16 07:05

44 楼

请问楼主，你家那个华丽丽的炖鸡汤的钵子哪里买的啊？可以直接放电炉上炖麽？

【在 B**********y 的大作中提到】

: 我在纽约，各大华人超市都有。

X*n2011-05-16 07:05

45 楼

If you want to see phosphorylation, you could try either Mn2+–Phos-tag SDS-
PAGE gel or treat your protein with NTCB.

【在 s******y 的大作中提到】

B*y2011-05-16 07:05

46 楼

装鸡汤那个？那是个大汤碗。
沙姜鸡上菜那个，是个比较浅的砂锅，可以直接放在炉子上烧菜。

【在 y********o 的大作中提到】

: 请问楼主，你家那个华丽丽的炖鸡汤的钵子哪里买的啊？可以直接放电炉上炖麽？

s*y2011-05-16 07:05

47 楼

非常感谢，但是你这个是为了彻底把蛋白变性好跑SDS_PAGE的，
本质上的配方还是SDS_PAGE，蛋白跑起来的速度还是与分子量相关而和本身
电性关系不大。
我需要的是不含SDS 的urea 胶，主要靠电量/分子量的比例来分离蛋白的。

【在 i******k 的大作中提到】

: 读研究生时隔壁实验室经常跑尿素胶看叶绿体膜蛋白
: 手头正好有《蛋白质技术手册》
: 见附件，应该很简单的

l*32011-05-16 07:05

48 楼

顶顶。。。想吃。。

s*y2011-05-16 07:05

49 楼

谢谢！你贴的这个方法很有用。
不过，我能不能问一下什么是NTCB？

SDS-

【在 X******n 的大作中提到】

: If you want to see phosphorylation, you could try either Mn2+–Phos-tag SDS-
: PAGE gel or treat your protein with NTCB.

a*r2011-05-16 07:05

50 楼

那个鸡煲真不错

X*n2011-05-16 07:05

51 楼

http://www.cell.com/molecular-cell/retrieve/pii/S10972765070025
http://www.nature.com/nprot/journal/v4/n10/full/nprot.2009.154.

s*y2011-05-16 07:05

52 楼

Got it!

【在 X******n 的大作中提到】

: http://www.cell.com/molecular-cell/retrieve/pii/S10972765070025
: http://www.nature.com/nprot/journal/v4/n10/full/nprot.2009.154.

i*k2011-05-16 07:05

53 楼

不客气，是我看帖不仔细 :-)
我以前酸性碱性的非变性胶都跑过，碱性的就是通常的laemmli系统不加SDS
不知道你这个urea胶是不是使分辨率更好？
我的印象中urea的本质作用是破坏氢键...

【在 s******y 的大作中提到】

: 非常感谢，但是你这个是为了彻底把蛋白变性好跑SDS_PAGE的，
: 本质上的配方还是SDS_PAGE，蛋白跑起来的速度还是与分子量相关而和本身
: 电性关系不大。
: 我需要的是不含SDS 的urea 胶，主要靠电量/分子量的比例来分离蛋白的。

s*y2011-05-16 07:05

54 楼

对，是破坏氢键，使得蛋白完全展开，这样蛋白上的修饰（比方说磷酸化和
乙酰化什么的）才能在跑胶的时候体现出差异来。
这个是一个很旧的技术了，好久没有人用了，所以我们一下子找不到protocol,
前面有个同学贴了一个Toxocon 杂志里面的貌似是可用的。就是我不知道有没有
人跑过。
我想请问你一下的是对于一个以前没有跑过的蛋白，怎么大概的根据它的PI value
和分子量估算它在一个胶里要跑多久？跑的时候怎么检查？
我以前用类似的东西跑oligo 的时候可以用紫外检查看看带跑到哪里了，
不知道跑蛋白的时候能不能也来这手？

【在 i******k 的大作中提到】

: 不客气，是我看帖不仔细 :-)
: 我以前酸性碱性的非变性胶都跑过，碱性的就是通常的laemmli系统不加SDS
: 不知道你这个urea胶是不是使分辨率更好？
: 我的印象中urea的本质作用是破坏氢键...

T*t2011-05-16 07:05

55 楼

应该可以吧，蛋白也有紫外吸收的。你把胶放在荧光硅胶板上，用紫外灯照一下，有蛋
白的地方应该就是暗的条带。我只这么看过核酸的胶，但是道理上应该是相通的。不放
心的话，你可以拿块普通的SDS-PAGE胶先照照看。

【在 s******y 的大作中提到】

: 对，是破坏氢键，使得蛋白完全展开，这样蛋白上的修饰（比方说磷酸化和
: 乙酰化什么的）才能在跑胶的时候体现出差异来。
: 这个是一个很旧的技术了，好久没有人用了，所以我们一下子找不到protocol,
: 前面有个同学贴了一个Toxocon 杂志里面的貌似是可用的。就是我不知道有没有
: 人跑过。
: 我想请问你一下的是对于一个以前没有跑过的蛋白，怎么大概的根据它的PI value
: 和分子量估算它在一个胶里要跑多久？跑的时候怎么检查？
: 我以前用类似的东西跑oligo 的时候可以用紫外检查看看带跑到哪里了，
: 不知道跑蛋白的时候能不能也来这手？

i*k2011-05-16 07:05

56 楼

这个我还真没有想过。。。
你的sample是purified protein还是lysate之类protein mixture?
如果不是那么宝贵的话，干脆先跑一次看看，之后心里就有底了

【在 s******y 的大作中提到】

s*y2011-05-16 07:05

57 楼

真正的样品还挺宝贵的。现在是打算先拿一个比较不宝贵的样品先跑跑看
这个胶给不给力

【在 i******k 的大作中提到】

: 这个我还真没有想过。。。
: 你的sample是purified protein还是lysate之类protein mixture?
: 如果不是那么宝贵的话，干脆先跑一次看看，之后心里就有底了

B*e2011-05-16 07:05

58 楼

我知道TAU胶很不给力啊，不过经常用在酸蛋白上。发的文章图都很牛X，实际不太好。

【在 s******y 的大作中提到】

: 真正的样品还挺宝贵的。现在是打算先拿一个比较不宝贵的样品先跑跑看
: 这个胶给不给力

t*u2011-05-16 07:05

59 楼

Native Gel can also be used, like the following paper
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18056630

s*y2011-05-16 07:05

60 楼

什么是TAU胶？Tris acetate Urea ？
能给个连接或者配方么？实际应用上有什么问题？

【在 B*****e 的大作中提到】

: 我知道TAU胶很不给力啊，不过经常用在酸蛋白上。发的文章图都很牛X，实际不太好。

s*y2011-05-16 07:05

61 楼

Native PAGE 跑出来的东西有点看运气。因为和蛋白的构型和聚合状态有关。
磷酸化的带不一定就是高带或者低带，urea PAGE 在原则上来说分析率应该
很高的，电性有什么风吹草动应该都能看出来。
不过，还是谢谢你贴的文章。

【在 t******u 的大作中提到】

: Native Gel can also be used, like the following paper
: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18056630

B*e2011-05-16 07:05

62 楼

就是Tris acetate Urea 啊，我记得nature protocol上有这篇，好象是allis实验室出
来的，手边没这个文章。几年前做过一段时间，实际分辩效果不太好，且重复性也有些
问题。而且这个胶run起来特别麻烦，需要几天的时间。

【在 s******y 的大作中提到】

: 什么是TAU胶？Tris acetate Urea ？
: 能给个连接或者配方么？实际应用上有什么问题？

s*y2011-05-16 07:05

63 楼

谢谢！我去查一下。如果她们的protocol 里面没有放stacking gel 的话
分辨率的确是不会太好，因为每个band都是一个个的方块.
的确是跑起来需要至少24小时。有时候更长。我想问的是当时你怎么估算
跑的时间的？因为这个好像不能看dye为准所以现在心里特别没数。

【在 B*****e 的大作中提到】

: 就是Tris acetate Urea 啊，我记得nature protocol上有这篇，好象是allis实验室出
: 来的，手边没这个文章。几年前做过一段时间，实际分辩效果不太好，且重复性也有些
: 问题。而且这个胶run起来特别麻烦，需要几天的时间。

p*p2011-05-16 07:05

64 楼

啊。找到老师了！
我有一个蛋白8.5左右的pI。用了invitrogen的3-10IEF胶，然后用0.7% 醋酸浸泡并转
膜做western，一直不成功。
你是怎么自己灌胶和转膜的呢？如果能看看你的protocol就太感谢了。

【在 c******y 的大作中提到】

: 自己灌IEF胶，然后直接把一相转膜western
: 不过抗体检测，一般都有很多修饰点的

p*p2011-05-16 07:05

65 楼

跑胶需要那么长时间的话，应该可以降低胶的浓度吧。
用普通Native PAGE加urea有什么问题么？核酸电泳用不用urea的PAGE都是一个配方。

【在 s******y 的大作中提到】

: 谢谢！我去查一下。如果她们的protocol 里面没有放stacking gel 的话
: 分辨率的确是不会太好，因为每个band都是一个个的方块.
: 的确是跑起来需要至少24小时。有时候更长。我想问的是当时你怎么估算
: 跑的时间的？因为这个好像不能看dye为准所以现在心里特别没数。

B*e2011-05-16 07:05

66 楼

刚开始的时候就是低压overnight,以dye跑不了胶为基准，第二天来再跑，这样就可以
算到时间了。如果你跑的是biorad的mini胶的话，好象十多个小时就可以了，但前面的
预跑很麻烦。

【在 s******y 的大作中提到】

s*y2011-05-16 07:05

67 楼

pre-run会有什么麻烦？
在这种情况下你一般预跑多久？
你说的以dye跑不了胶为基准是不是指以dye不会动为基准？还是说dye跑不出胶
的末端为基准？
我对这个没有什么经验，请指教：）

【在 B*****e 的大作中提到】

: 刚开始的时候就是低压overnight,以dye跑不了胶为基准，第二天来再跑，这样就可以
: 算到时间了。如果你跑的是biorad的mini胶的话，好象十多个小时就可以了，但前面的
: 预跑很麻烦。

B*e2011-05-16 07:05

68 楼

真抱歉，很多年前做得，具体的数据都忘记了，只隐约记得哪些步骤比较麻烦，如果让
我再做一次，我肯定很多都能想得起来。
印象中，在pre-run的时候，需要在dye中加一些特别的试剂。在pre-run的时候，我也
把dye给run出胶，我记得buffer好象需要在pre-run后需要更换，因为这种buffer的缓
冲能力不太强。另外，在run的时候特别易产热，需要在cold room中进行。

【在 s******y 的大作中提到】

: pre-run会有什么麻烦？
: 在这种情况下你一般预跑多久？
: 你说的以dye跑不了胶为基准是不是指以dye不会动为基准？还是说dye跑不出胶
: 的末端为基准？
: 我对这个没有什么经验，请指教：）

s*y2011-05-16 07:05

69 楼

Thanks!

【在 B*****e 的大作中提到】

: 真抱歉，很多年前做得，具体的数据都忘记了，只隐约记得哪些步骤比较麻烦，如果让
: 我再做一次，我肯定很多都能想得起来。
: 印象中，在pre-run的时候，需要在dye中加一些特别的试剂。在pre-run的时候，我也
: 把dye给run出胶，我记得buffer好象需要在pre-run后需要更换，因为这种buffer的缓
: 冲能力不太强。另外，在run的时候特别易产热，需要在cold room中进行。