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问几个关于转染的问题,请大家指教
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问几个关于转染的问题,请大家指教# Biology - 生物学
z*r
1
【 以下文字转载自 EB23 讨论区 】
发信人: zqmaster (battlefield), 信区: EB23
标 题: h1b 6年延期问题
发信站: BBS 未名空间站 (Fri May 8 19:19:44 2015, 美东)
最近刚跳到新东家,绿卡办的特别慢,很可能在h1b过期365天前提交不了perm。今天公
司移民Hr说我在前公司批准的140也能用来延我的h1b,想问下hr 说的对吗?我知道ac21
有提到140可以用来延,不过不是一个雇主提交的140可以用吗?
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k*a
2
是有人想趁机牟利么?
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b*8
3
如题,最近做dual luciferase reporter assay,主要是想看在癌细胞中敲除某一基因
A后,对另一基因B启动子活性的影响。(已经证实敲除A后能下调B的mRNA转录和翻译表
达)。我尝试过两种不同的转染顺序,如下:
1)24 well plate铺板,第二天转染A的siRNA,第三天转染B的启动子报告基因质粒,第
四天收细胞assay,发现siControl和siA的renilla的读数相差很大,有时能达到10倍左
右,出来的ratio也经常是千奇百怪,忽高忽低,难以解释,
2)考虑到可能是先转染siRNA会影响后续质粒的转染效率。于是换方案,先在6孔板中
铺板,第二天转染质粒,过夜后换液,转染24小时候胰酶消化,将细胞铺到24孔板中,
24小时后再分别转染siControl和siA,出来的结果漂亮多了,至少data不像前一种方案
那么难看了。
我想问一下,第二种方法是否合理,虽然两种方法我都在文献上看到过,但是私以为第
1中方案似乎更为合理,但是在我们的实验中,它对renilla的影响实在太大。
另外,想问一个lipofectamine2000的转染问题,以6孔板为例,mannual上建议的
volume of plating medium是2ml,volume of diluting medium 为250*2=500ul,那么
最后转染的培养基总体积到底应该是2ml,还是2.5ml,我一直是用2ml,可是经常发现
毒性太大,即使在质粒和lipo减半的情况下。今天师姐告诉我她一直用的是2.5ml,各
位,你们是怎么弄的,最近试验不顺利,弄得自己都怀疑自己的每一步是不是都有问题
了。
谢谢
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c*n
4
APPLE想趁机牟利结果中了人家计中计, 被活逮。

【在 k****a 的大作中提到】
: 是有人想趁机牟利么?
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A*d
5
lipofectamine2000的转染,我用2毫升,没有问题。
可能和细胞还有plasmid有关系,你光lipofectamine2000的no DNA control也有毒性?
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k*a
6
谁先用ipad这个名字啊?苹果以自己的骚和gay,先起个别名有啥不利?

【在 c********n 的大作中提到】
: APPLE想趁机牟利结果中了人家计中计, 被活逮。
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b*8
7
谢谢楼上的回复
有人回答我的第一个问题么?
多谢各位
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c*n
8
当然是唯冠。 天王老子也无所谓, 苹果在乎过谁? 苹果要的名字别人只有双手奉上
, 可惜碰上个难缠的主。

【在 k****a 的大作中提到】
: 谁先用ipad这个名字啊?苹果以自己的骚和gay,先起个别名有啥不利?
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