【求教达人】转基因果蝇转染率低是什么原因 - 未名空间MITBBS历史存档

【求教达人】转基因果蝇转染率低是什么原因# Biology - 生物学

k*r2011-06-08 07:06

1 楼

查金刚狼的showtime发现从明天起就没有3D PR了，踌躇是不是今晚去再看一遍，唉，
小地方没Imax，命苦啊...
另，现在180M+全球票房，还有中国日本都没上映，续集看来是有戏了，俺一人也贡献
了30多刀了。
导演谈了谈续集可能的发展方向，说有可能出现kaiju + jaeger的hybrid，听起来很有
潜力。
这一部的动作已经10/10了，唯一的遗憾就是没有jaeger之间的配合作战，crimson
typhoon抓起一个kaiju的尾巴360度转体扔出，俄罗斯的跳起空中一个双肘击力压落地
摁死。 gypsy danger和澳洲高达一头一尾抓住一个kaiju，同时发力撕作两半, 希望续
集里会这么拍，呵呵。

t*z2011-06-08 07:06

2 楼

我最近做的一批转基因果蝇，使用一个我们以前都用得好好的载体，有white基因，有
attB位点，定点转到attP2果蝇株系中，然后和yw果蝇杂交后挑红眼睛的后代。以前我
通常20瓶里就能挑到3、4瓶的。但是这次，我挑了几百瓶才挑出一两瓶长红眼睛的，更
有几个重要的系一瓶都没有挑到。所以这下郁闷了。
反复检讨，觉得没有什么地方做错的，唯一和以前的区别在于这回的整个质粒稍微大了
些。以前做过的最大的有14kb，这次的有15-17kb。但是人家上百kb的BAC都能转进去，
我想我们十几kb的不算什么吧。
特此沐浴更衣焚香祝祷上站发贴求救。要是这个技术难关不搞定，我的整个课题就做不
下去了。请问做转基因果蝇有什么需要注意的东西，有什么好的教学网站，特别是有什
么可以提高转染率的窍门吗？祝大家夏日愉快！

B*a2011-06-08 07:06

3 楼

赞！
我看了下我家附近的AMC，本周末安排Pacific Rim的场次似乎比上周有所增加啊。

【在 k***r 的大作中提到】

: 查金刚狼的showtime发现从明天起就没有3D PR了，踌躇是不是今晚去再看一遍，唉，
: 小地方没Imax，命苦啊...
: 另，现在180M+全球票房，还有中国日本都没上映，续集看来是有戏了，俺一人也贡献
: 了30多刀了。
: 导演谈了谈续集可能的发展方向，说有可能出现kaiju + jaeger的hybrid，听起来很有
: 潜力。
: 这一部的动作已经10/10了，唯一的遗憾就是没有jaeger之间的配合作战，crimson
: typhoon抓起一个kaiju的尾巴360度转体扔出，俄罗斯的跳起空中一个双肘击力压落地
: 摁死。 gypsy danger和澳洲高达一头一尾抓住一个kaiju，同时发力撕作两半, 希望续
: 集里会这么拍，呵呵。

n*82011-06-08 07:06

4 楼

这个载体应该很成熟了。
我猜可能还是技术细节吧， DNA quality啊，关键是egg collection，microinjection
的操作要快。
我以前自己inject，拿到transgenic的概率跟你这个差不多，后来送公司做，>10%的转
基因效率。现在公司做一个只要300$左右。

P*e2011-06-08 07:06

5 楼

好成这样？

【在 k***r 的大作中提到】

: 查金刚狼的showtime发现从明天起就没有3D PR了，踌躇是不是今晚去再看一遍，唉，
: 小地方没Imax，命苦啊...
: 另，现在180M+全球票房，还有中国日本都没上映，续集看来是有戏了，俺一人也贡献
: 了30多刀了。
: 导演谈了谈续集可能的发展方向，说有可能出现kaiju + jaeger的hybrid，听起来很有
: 潜力。
: 这一部的动作已经10/10了，唯一的遗憾就是没有jaeger之间的配合作战，crimson
: typhoon抓起一个kaiju的尾巴360度转体扔出，俄罗斯的跳起空中一个双肘击力压落地
: 摁死。 gypsy danger和澳洲高达一头一尾抓住一个kaiju，同时发力撕作两半, 希望续
: 集里会这么拍，呵呵。

a*o2011-06-08 07:06

6 楼

att系统得到一个和得到一堆没啥区别啊。15-17kb的并不大，重新提一下DNA吧。

【在 t*****z 的大作中提到】

: 我最近做的一批转基因果蝇，使用一个我们以前都用得好好的载体，有white基因，有
: attB位点，定点转到attP2果蝇株系中，然后和yw果蝇杂交后挑红眼睛的后代。以前我
: 通常20瓶里就能挑到3、4瓶的。但是这次，我挑了几百瓶才挑出一两瓶长红眼睛的，更
: 有几个重要的系一瓶都没有挑到。所以这下郁闷了。
: 反复检讨，觉得没有什么地方做错的，唯一和以前的区别在于这回的整个质粒稍微大了
: 些。以前做过的最大的有14kb，这次的有15-17kb。但是人家上百kb的BAC都能转进去，
: 我想我们十几kb的不算什么吧。
: 特此沐浴更衣焚香祝祷上站发贴求救。要是这个技术难关不搞定，我的整个课题就做不
: 下去了。请问做转基因果蝇有什么需要注意的东西，有什么好的教学网站，特别是有什
: 么可以提高转染率的窍门吗？祝大家夏日愉快！

k*r2011-06-08 07:06

7 楼

你还没看？绝对的暑假大片啊，引用一句youtube上看到的评论，
If you indifferent to this movie, take it as a sign your inner child has
officially flat-lined.

【在 P*******e 的大作中提到】

: 好成这样？

s*s2011-06-08 07:06

8 楼

没做个att的，只作过puast/p，你这个是不是injection水平太次了？

【在 t*****z 的大作中提到】

: 我最近做的一批转基因果蝇，使用一个我们以前都用得好好的载体，有white基因，有
: attB位点，定点转到attP2果蝇株系中，然后和yw果蝇杂交后挑红眼睛的后代。以前我
: 通常20瓶里就能挑到3、4瓶的。但是这次，我挑了几百瓶才挑出一两瓶长红眼睛的，更
: 有几个重要的系一瓶都没有挑到。所以这下郁闷了。
: 反复检讨，觉得没有什么地方做错的，唯一和以前的区别在于这回的整个质粒稍微大了
: 些。以前做过的最大的有14kb，这次的有15-17kb。但是人家上百kb的BAC都能转进去，
: 我想我们十几kb的不算什么吧。
: 特此沐浴更衣焚香祝祷上站发贴求救。要是这个技术难关不搞定，我的整个课题就做不
: 下去了。请问做转基因果蝇有什么需要注意的东西，有什么好的教学网站，特别是有什
: 么可以提高转染率的窍门吗？祝大家夏日愉快！

b*z2011-06-08 07:06

9 楼

今晚准备先重看imax3d PR，再看wolverine rpx 3D.

【在 k***r 的大作中提到】

: 查金刚狼的showtime发现从明天起就没有3D PR了，踌躇是不是今晚去再看一遍，唉，
: 小地方没Imax，命苦啊...
: 另，现在180M+全球票房，还有中国日本都没上映，续集看来是有戏了，俺一人也贡献
: 了30多刀了。
: 导演谈了谈续集可能的发展方向，说有可能出现kaiju + jaeger的hybrid，听起来很有
: 潜力。
: 这一部的动作已经10/10了，唯一的遗憾就是没有jaeger之间的配合作战，crimson
: typhoon抓起一个kaiju的尾巴360度转体扔出，俄罗斯的跳起空中一个双肘击力压落地
: 摁死。 gypsy danger和澳洲高达一头一尾抓住一个kaiju，同时发力撕作两半, 希望续
: 集里会这么拍，呵呵。

s*s2011-06-08 07:06

10 楼

我们实验室小韩手工injection，死亡率<10%, 转基因率60%,
那个时候我一直叫着要和他开公司帮别人打果蝇

microinjection

【在 n**8 的大作中提到】

: 这个载体应该很成熟了。
: 我猜可能还是技术细节吧， DNA quality啊，关键是egg collection，microinjection
: 的操作要快。
: 我以前自己inject，拿到transgenic的概率跟你这个差不多，后来送公司做，>10%的转
: 基因效率。现在公司做一个只要300$左右。

z*a2011-06-08 07:06

11 楼

180M 是budget,票房好像还不到70M

【在 k***r 的大作中提到】

: 查金刚狼的showtime发现从明天起就没有3D PR了，踌躇是不是今晚去再看一遍，唉，
: 小地方没Imax，命苦啊...
: 另，现在180M+全球票房，还有中国日本都没上映，续集看来是有戏了，俺一人也贡献
: 了30多刀了。
: 导演谈了谈续集可能的发展方向，说有可能出现kaiju + jaeger的hybrid，听起来很有
: 潜力。
: 这一部的动作已经10/10了，唯一的遗憾就是没有jaeger之间的配合作战，crimson
: typhoon抓起一个kaiju的尾巴360度转体扔出，俄罗斯的跳起空中一个双肘击力压落地
: 摁死。 gypsy danger和澳洲高达一头一尾抓住一个kaiju，同时发力撕作两半, 希望续
: 集里会这么拍，呵呵。

t*z2011-06-08 07:06

12 楼

是啊，我们也是让公司做的，以前转染效率很高，就这两批不行。公司是Genetic
Services Inc。DNA我是用QIAGEN的Maxiprep试剂盒提取的，以前都没问题，可不知有
什么地方需要改进的呢？

microinjection

【在 n**8 的大作中提到】

: 这个载体应该很成熟了。
: 我猜可能还是技术细节吧， DNA quality啊，关键是egg collection，microinjection
: 的操作要快。
: 我以前自己inject，拿到transgenic的概率跟你这个差不多，后来送公司做，>10%的转
: 基因效率。现在公司做一个只要300$左右。

s*t2011-06-08 07:06

13 楼

他说的是全球票房
全球180不算多

【在 z*a 的大作中提到】

: 180M 是budget,票房好像还不到70M

t*z2011-06-08 07:06

14 楼

这个太厉害了吧？要不我来做你们的第一个客户吧？

【在 s******s 的大作中提到】

: 我们实验室小韩手工injection，死亡率<10%, 转基因率60%,
: 那个时候我一直叫着要和他开公司帮别人打果蝇
:
: microinjection

l*a2011-06-08 07:06

15 楼

@[email protected]
难道喜欢机器人真的是幼稚的表现么？我还以为正常的geek都喜欢呢。。。

【在 k***r 的大作中提到】

: 你还没看？绝对的暑假大片啊，引用一句youtube上看到的评论，
: If you indifferent to this movie, take it as a sign your inner child has
: officially flat-lined.

t*z2011-06-08 07:06

16 楼

提取DNA可有什么窍门没有？我看来看去就是最后两步：用70％乙醇洗涤，把乙醇晾干
，加水溶解，不大好把握。应该怎么做最好呢？
不到这个时候，我也不会去想要改进工艺啊。人都是逼出来的。

b*z2011-06-08 07:06

17 楼

楼上不是说了吗，这叫童心未泯。另外geek好像给一般人的感觉就是不正常吧，反正是
偏贬义的。

【在 l***a 的大作中提到】

: @[email protected]
: 难道喜欢机器人真的是幼稚的表现么？我还以为正常的geek都喜欢呢。。。

a*o2011-06-08 07:06

18 楼

这个我也行。。。。
每个construct打20～30个egg足够了。

【在 s******s 的大作中提到】

: 我们实验室小韩手工injection，死亡率<10%, 转基因率60%,
: 那个时候我一直叫着要和他开公司帮别人打果蝇
:
: microinjection

B*a2011-06-08 07:06

19 楼

我觉得geek更偏中性，nerd有点偏贬义。

【在 b**z 的大作中提到】

: 楼上不是说了吗，这叫童心未泯。另外geek好像给一般人的感觉就是不正常吧，反正是
: 偏贬义的。

s*s2011-06-08 07:06

20 楼

你们都很牛。我一般要打一排七八十个，大概10%－20%。

【在 a**o 的大作中提到】

: 这个我也行。。。。
: 每个construct打20～30个egg足够了。

l*a2011-06-08 07:06

21 楼

geek是不正常，不过给我的感觉是褒义的很酷的，是愿意为一些事情花大量精力并且很
精通的，如果有一天别人愿意称呼我computer geek我一定是洋洋得意飘飘欲仙的。

【在 b**z 的大作中提到】

: 楼上不是说了吗，这叫童心未泯。另外geek好像给一般人的感觉就是不正常吧，反正是
: 偏贬义的。

s*s2011-06-08 07:06

22 楼

我们用qiagen midi, 好像其他公司的midi做出来的不太好。
溶解用milliQ water，有的实验室还有专门的buffer

【在 t*****z 的大作中提到】

: 提取DNA可有什么窍门没有？我看来看去就是最后两步：用70％乙醇洗涤，把乙醇晾干
: ，加水溶解，不大好把握。应该怎么做最好呢？
: 不到这个时候，我也不会去想要改进工艺啊。人都是逼出来的。

d*u2011-06-08 07:06

23 楼

kaiju其实就是“怪兽”的音读，典型的汉语词
看到kaiju成为流行词作为中国人还是有点淡淡的遗憾

【在 k***r 的大作中提到】

: 查金刚狼的showtime发现从明天起就没有3D PR了，踌躇是不是今晚去再看一遍，唉，
: 小地方没Imax，命苦啊...
: 另，现在180M+全球票房，还有中国日本都没上映，续集看来是有戏了，俺一人也贡献
: 了30多刀了。
: 导演谈了谈续集可能的发展方向，说有可能出现kaiju + jaeger的hybrid，听起来很有
: 潜力。
: 这一部的动作已经10/10了，唯一的遗憾就是没有jaeger之间的配合作战，crimson
: typhoon抓起一个kaiju的尾巴360度转体扔出，俄罗斯的跳起空中一个双肘击力压落地
: 摁死。 gypsy danger和澳洲高达一头一尾抓住一个kaiju，同时发力撕作两半, 希望续
: 集里会这么拍，呵呵。

m*m2011-06-08 07:06

24 楼

我们用同样一个公司注射的，公司操作没有什么问题。质粒大了一定要多给DNA去注射
。别看只大了10-20%，区别非常大，你再注射一次试一试，DNA 总量加一倍。

k*r2011-06-08 07:06

25 楼

PR的创意来自日本动漫EVA，用个日本词很正常，看你回的另一个帖子里提到PR和金刚
狼崇日，其实这两片的日本渊源本来就深。PR就不说了，选香港其实都有点出乎意料，
估计是为了兼顾中国市场。
金刚狼和silver samurai的漫画80年代发行的，一直是金刚狼里很popular的一个系列。

【在 d*****u 的大作中提到】

: kaiju其实就是“怪兽”的音读，典型的汉语词
: 看到kaiju成为流行词作为中国人还是有点淡淡的遗憾

t*z2011-06-08 07:06

26 楼

楼上的都是牛人啊，开眼界了。多谢！

d*u2011-06-08 07:06

27 楼

我知道这是来自动漫，
但说的是现在这电影输出日本文化
对现在的年轻人造成影响

列。

【在 k***r 的大作中提到】

: PR的创意来自日本动漫EVA，用个日本词很正常，看你回的另一个帖子里提到PR和金刚
: 狼崇日，其实这两片的日本渊源本来就深。PR就不说了，选香港其实都有点出乎意料，
: 估计是为了兼顾中国市场。
: 金刚狼和silver samurai的漫画80年代发行的，一直是金刚狼里很popular的一个系列。

t*z2011-06-08 07:06

28 楼

原来是这样啊。按我原来的理解，他们会重新纯化送过去的DNA，弄一部分来注射。你
说的DNA总量指的是用来注射的DNA的浓度吗？

【在 m*****m 的大作中提到】

: 我们用同样一个公司注射的，公司操作没有什么问题。质粒大了一定要多给DNA去注射
: 。别看只大了10-20%，区别非常大，你再注射一次试一试，DNA 总量加一倍。

U*d2011-06-08 07:06

29 楼

日本文化很大程度来自日本动漫的大受欢迎。
中国文化在这方面很是落后，除了当年李小龙还有香港90年代的武侠片，之后就后继无
力了。
不过中国传统文化比较内敛，在娱乐方面想获得巨大吸引力还是比较难的。

【在 d*****u 的大作中提到】

: 我知道这是来自动漫，
: 但说的是现在这电影输出日本文化
: 对现在的年轻人造成影响
:
: 列。

d*u2011-06-08 07:06

30 楼

日本人对西方文化和东方文化都把握得很好
这点确实没有任何一个民族比得上

【在 U*******d 的大作中提到】

: 日本文化很大程度来自日本动漫的大受欢迎。
: 中国文化在这方面很是落后，除了当年李小龙还有香港90年代的武侠片，之后就后继无
: 力了。
: 不过中国传统文化比较内敛，在娱乐方面想获得巨大吸引力还是比较难的。

ay2011-06-08 07:06

31 楼

还看阿，
我老去的imax一个人都没有了，专场

【在 k***r 的大作中提到】

: 查金刚狼的showtime发现从明天起就没有3D PR了，踌躇是不是今晚去再看一遍，唉，
: 小地方没Imax，命苦啊...
: 另，现在180M+全球票房，还有中国日本都没上映，续集看来是有戏了，俺一人也贡献
: 了30多刀了。
: 导演谈了谈续集可能的发展方向，说有可能出现kaiju + jaeger的hybrid，听起来很有
: 潜力。
: 这一部的动作已经10/10了，唯一的遗憾就是没有jaeger之间的配合作战，crimson
: typhoon抓起一个kaiju的尾巴360度转体扔出，俄罗斯的跳起空中一个双肘击力压落地
: 摁死。 gypsy danger和澳洲高达一头一尾抓住一个kaiju，同时发力撕作两半, 希望续
: 集里会这么拍，呵呵。