o*4
2 楼
一般情况下，我用293T做病毒的时候，效率很高的，
这次，大部分细胞都没有荧光，不知道是转染的问题，还是病毒不能包装不能反复感染
细胞？
这次，大部分细胞都没有荧光，不知道是转染的问题，还是病毒不能包装不能反复感染
细胞？
R*y
3 楼
等.
s*r
4 楼
怎么知道你293时候病毒效率很高？
一般情况下，我用293T做病毒的时候，效率很高的，
这次，大部分细胞都没有荧光，不知道是转染的问题，还是病毒不能包装不能反复感染
细胞？
【在 o**4 的大作中提到】
: 一般情况下，我用293T做病毒的时候，效率很高的，
: 这次，大部分细胞都没有荧光，不知道是转染的问题，还是病毒不能包装不能反复感染
: 细胞？
一般情况下，我用293T做病毒的时候，效率很高的，
这次，大部分细胞都没有荧光，不知道是转染的问题，还是病毒不能包装不能反复感染
细胞？
【在 o**4 的大作中提到】
: 一般情况下，我用293T做病毒的时候，效率很高的，
: 这次，大部分细胞都没有荧光，不知道是转染的问题，还是病毒不能包装不能反复感染
: 细胞？
S*e
5 楼
250kD 估计到了lentivirus 的极限了， 我曾经考虑做更大的蛋白，
但看了说明好像lentivirus 包装有个极限，所以就没做，
若之后你发现250kD可以表达很好，吱一声，我下次也试试。
但看了说明好像lentivirus 包装有个极限，所以就没做，
若之后你发现250kD可以表达很好，吱一声，我下次也试试。
o*4
6 楼
用293T做病毒一直都很好用啊，这次很不正常
【在 s******r 的大作中提到】
: 怎么知道你293时候病毒效率很高？
:
: 一般情况下，我用293T做病毒的时候，效率很高的，
: 这次，大部分细胞都没有荧光，不知道是转染的问题，还是病毒不能包装不能反复感染
: 细胞？
【在 s******r 的大作中提到】
: 怎么知道你293时候病毒效率很高？
:
: 一般情况下，我用293T做病毒的时候，效率很高的，
: 这次，大部分细胞都没有荧光，不知道是转染的问题，还是病毒不能包装不能反复感染
: 细胞？
C*h
7 楼
lentivirus的包装极限是~10kb，另外，virus产量与size成反比，
一般来说，size增加1kb，virus产量减少十倍。
你的蛋白太大，编码序列本身就有>6kb，再加上virus自己的序列，可能超过10kb了。
【在 o**4 的大作中提到】
: 一般情况下，我用293T做病毒的时候，效率很高的，
: 这次，大部分细胞都没有荧光，不知道是转染的问题，还是病毒不能包装不能反复感染
: 细胞？
一般来说，size增加1kb，virus产量减少十倍。
你的蛋白太大，编码序列本身就有>6kb，再加上virus自己的序列，可能超过10kb了。
【在 o**4 的大作中提到】
: 一般情况下，我用293T做病毒的时候，效率很高的，
: 这次，大部分细胞都没有荧光，不知道是转染的问题，还是病毒不能包装不能反复感染
: 细胞？
o*4
8 楼
lentivirus包装的是蛋白吧？怎么会跟DNA大小有关系呢？
【在 C*****h 的大作中提到】
: lentivirus的包装极限是~10kb，另外，virus产量与size成反比，
: 一般来说，size增加1kb，virus产量减少十倍。
: 你的蛋白太大，编码序列本身就有>6kb，再加上virus自己的序列，可能超过10kb了。
【在 C*****h 的大作中提到】
: lentivirus的包装极限是~10kb，另外，virus产量与size成反比，
: 一般来说，size增加1kb，virus产量减少十倍。
: 你的蛋白太大，编码序列本身就有>6kb，再加上virus自己的序列，可能超过10kb了。
j*x
9 楼
这种低级错误也会犯？
【在 o**4 的大作中提到】
: lentivirus包装的是蛋白吧？怎么会跟DNA大小有关系呢？
【在 o**4 的大作中提到】
: lentivirus包装的是蛋白吧？怎么会跟DNA大小有关系呢？
o*4
10 楼
不记得了，
lentivirus是RNA还是DNA病毒？
【在 j****x 的大作中提到】
: 这种低级错误也会犯？
lentivirus是RNA还是DNA病毒？
【在 j****x 的大作中提到】
: 这种低级错误也会犯？
C*h
11 楼
lentivirus包装RNA
【在 o**4 的大作中提到】
: lentivirus包装的是蛋白吧？怎么会跟DNA大小有关系呢？
【在 o**4 的大作中提到】
: lentivirus包装的是蛋白吧？怎么会跟DNA大小有关系呢？
j*x
12 楼
不管是什么病毒，作为载体，都是用来介导gene delivery，把目标gene靶向靶细胞，
包装的显然是核酸不是蛋白。
慢病毒作为载体，你的目的基因整合到靶细胞的基因组然后再表达，stable
expression.
病毒不是无限大，自然也不可能无限大，就有一个包装能力的问题，天然HIV 9kb多吧
，作为载体包装极限也就是10kb的样子，再大病毒capsid里就放不下了，前面那个哥们
已经说的很清楚了，序列越长，包装效率越差，病毒产量越低。
你这里的基本概念，很混乱啊
【在 o**4 的大作中提到】
: 不记得了，
: lentivirus是RNA还是DNA病毒？
包装的显然是核酸不是蛋白。
慢病毒作为载体，你的目的基因整合到靶细胞的基因组然后再表达，stable
expression.
病毒不是无限大，自然也不可能无限大，就有一个包装能力的问题，天然HIV 9kb多吧
，作为载体包装极限也就是10kb的样子，再大病毒capsid里就放不下了，前面那个哥们
已经说的很清楚了，序列越长，包装效率越差，病毒产量越低。
你这里的基本概念，很混乱啊
【在 o**4 的大作中提到】
: 不记得了，
: lentivirus是RNA还是DNA病毒？
o*4
13 楼
不好意思对病毒确实不太了解，
10kb是我的整个质粒大小，RNA应该比10kb小，包装应该没问题么？
【在 j****x 的大作中提到】
: 不管是什么病毒，作为载体，都是用来介导gene delivery，把目标gene靶向靶细胞，
: 包装的显然是核酸不是蛋白。
: 慢病毒作为载体，你的目的基因整合到靶细胞的基因组然后再表达，stable
: expression.
: 病毒不是无限大，自然也不可能无限大，就有一个包装能力的问题，天然HIV 9kb多吧
: ，作为载体包装极限也就是10kb的样子，再大病毒capsid里就放不下了，前面那个哥们
: 已经说的很清楚了，序列越长，包装效率越差，病毒产量越低。
: 你这里的基本概念，很混乱啊
10kb是我的整个质粒大小，RNA应该比10kb小，包装应该没问题么？
【在 j****x 的大作中提到】
: 不管是什么病毒，作为载体，都是用来介导gene delivery，把目标gene靶向靶细胞，
: 包装的显然是核酸不是蛋白。
: 慢病毒作为载体，你的目的基因整合到靶细胞的基因组然后再表达，stable
: expression.
: 病毒不是无限大，自然也不可能无限大，就有一个包装能力的问题，天然HIV 9kb多吧
: ，作为载体包装极限也就是10kb的样子，再大病毒capsid里就放不下了，前面那个哥们
: 已经说的很清楚了，序列越长，包装效率越差，病毒产量越低。
: 你这里的基本概念，很混乱啊
i*i
14 楼
包装入病毒的是3LTR和5LTR之间，含有packaging sequence的那一段，除此之外的序列
是不会包进病毒的，例如神马氨苄抗性基因，puc ori等东西。所以计算的时候要扣除
这些东西。整个质粒10kb，包装的RNA估计8K左右（去掉2k的零碎）。所以应该没有什
么问题。Open biosystem的pTripz shRNA的质粒有13K，照样包装。
是不会包进病毒的，例如神马氨苄抗性基因，puc ori等东西。所以计算的时候要扣除
这些东西。整个质粒10kb，包装的RNA估计8K左右（去掉2k的零碎）。所以应该没有什
么问题。Open biosystem的pTripz shRNA的质粒有13K，照样包装。
B*o
15 楼
你这个vector基本已经到lenvirus packaging的极限了。效率那是相当相当相当的低，
呵呵
【在 o**4 的大作中提到】
: 一般情况下，我用293T做病毒的时候，效率很高的，
: 这次，大部分细胞都没有荧光，不知道是转染的问题，还是病毒不能包装不能反复感染
: 细胞？
呵呵
【在 o**4 的大作中提到】
: 一般情况下，我用293T做病毒的时候，效率很高的，
: 这次，大部分细胞都没有荧光，不知道是转染的问题，还是病毒不能包装不能反复感染
: 细胞？
相关阅读
在美国找博士后职位的网站？看看人家Caltech,啧啧 (转载)AXEL最好的3个学生是谁？phd+postdoc系统生物学是不是一个大忽悠Nature Medicine presubmission inquiry这才是招聘者的角度看法马来酸在southern blot里是干什么用的？peer pressure...请问有人用Dynal beads做IP么Senior research fellow 是不是千老啊？请问一个简单的英文请教个fellowship和visa的问题，谢谢指点当请人过来做seminar遇到环保主义者。。。fresh Phd 直接讀MBA 難嗎 ?博后面试之后隔多久follow up？北京户口值多少？nature communications seems good!求一篇paper，10伪币相送。关于Western的蛋白定量。TCA cycle song