d*g
2 楼
我每天几乎要12个小时要对着电脑，这不是对着电脑就是要对着手机，除了睡觉，
吃饭，当然拉撒也要时刻把手机带上。我想这就是时时刻刻，手机不离手。
但是这么多个小时，眼睛一直对着电脑，难受怎么办呢，别人就总说没事，过一会
起来走动走动，看一下远处的绿植就好了，我去，这是谁想的，我这里望去外面全部都
是高楼大厦，哪里来的绿植，那些高楼大厦完全挡住了视线，这种土渣的办法还是不要
用了。
还有的人说那就滴眼药水吧，但是对于我这种带着隐形眼镜，而且眼睛敏感的人来
说，眼药水也不用想了，我想这眼睛特别敏感的人一定知道那种感觉吧。有时我画个眼
线妆，每次回家卸妆时，眼睛就疼得实在是没办法，后来我再也不敢把我的眼睛随意折
腾了。
后来我自己自创了一个让眼睛稍微舒适的法子了，那就是打哈欠，打哈欠的时候，眼睛
就会挤出那种雾水，这样可以滋润眼睛，所以我眼睛一不舒服我就打个哈欠，当然这种
方法也是傻到家了。反正我每天对着电脑最多的事就是打哈欠，身边同事就会问我，你
有这么累吗，你想睡觉了吗，你昨天又熬到了几点。哼，我才不告诉你原因。
吃饭，当然拉撒也要时刻把手机带上。我想这就是时时刻刻，手机不离手。
但是这么多个小时，眼睛一直对着电脑，难受怎么办呢，别人就总说没事，过一会
起来走动走动，看一下远处的绿植就好了，我去，这是谁想的，我这里望去外面全部都
是高楼大厦，哪里来的绿植，那些高楼大厦完全挡住了视线，这种土渣的办法还是不要
用了。
还有的人说那就滴眼药水吧，但是对于我这种带着隐形眼镜，而且眼睛敏感的人来
说，眼药水也不用想了，我想这眼睛特别敏感的人一定知道那种感觉吧。有时我画个眼
线妆，每次回家卸妆时，眼睛就疼得实在是没办法，后来我再也不敢把我的眼睛随意折
腾了。
后来我自己自创了一个让眼睛稍微舒适的法子了，那就是打哈欠，打哈欠的时候，眼睛
就会挤出那种雾水，这样可以滋润眼睛，所以我眼睛一不舒服我就打个哈欠，当然这种
方法也是傻到家了。反正我每天对着电脑最多的事就是打哈欠，身边同事就会问我，你
有这么累吗，你想睡觉了吗，你昨天又熬到了几点。哼，我才不告诉你原因。
f*8
3 楼
我家老大昨天才照相打指纹，今天就绿卡批了。这也太快了哈
都是10月交表，这下家里都绿了，另加一个小公民
都是10月交表，这下家里都绿了，另加一个小公民
y*n
4 楼
Ron Howard说这是他最性感的一部电影
我们只知道上一次执掌体育题材，他给我们带来了《铁拳男人》
rt 96%!
我想你如果喜欢关于体育的电影，那这部赛车电影你一定不能错过
我们只知道上一次执掌体育题材，他给我们带来了《铁拳男人》
rt 96%!
我想你如果喜欢关于体育的电影，那这部赛车电影你一定不能错过
Q*n
5 楼
想纯化一些tRNA，看到的文献里用的都不是我们平常用的pET或类似的质粒，不知道
tRNA的克隆跟蛋白基因的克隆是不是不大一样，请有经验的说几句
tRNA的克隆跟蛋白基因的克隆是不是不大一样，请有经验的说几句
d*y
6 楼
加油，购小件物品，付bill
【在 n******l 的大作中提到】
: 大家都怎么用？
: 想开利息高的账号，大都有这个变态的要求
: 哎
【在 n******l 的大作中提到】
: 大家都怎么用？
: 想开利息高的账号，大都有这个变态的要求
: 哎
g*y
7 楼
有道理，准备试试
【在 d*****g 的大作中提到】
: 我每天几乎要12个小时要对着电脑，这不是对着电脑就是要对着手机，除了睡觉，
: 吃饭，当然拉撒也要时刻把手机带上。我想这就是时时刻刻，手机不离手。
: 但是这么多个小时，眼睛一直对着电脑，难受怎么办呢，别人就总说没事，过一会
: 起来走动走动，看一下远处的绿植就好了，我去，这是谁想的，我这里望去外面全部都
: 是高楼大厦，哪里来的绿植，那些高楼大厦完全挡住了视线，这种土渣的办法还是不要
: 用了。
: 还有的人说那就滴眼药水吧，但是对于我这种带着隐形眼镜，而且眼睛敏感的人来
: 说，眼药水也不用想了，我想这眼睛特别敏感的人一定知道那种感觉吧。有时我画个眼
: 线妆，每次回家卸妆时，眼睛就疼得实在是没办法，后来我再也不敢把我的眼睛随意折
: 腾了。
【在 d*****g 的大作中提到】
: 我每天几乎要12个小时要对着电脑，这不是对着电脑就是要对着手机，除了睡觉，
: 吃饭，当然拉撒也要时刻把手机带上。我想这就是时时刻刻，手机不离手。
: 但是这么多个小时，眼睛一直对着电脑，难受怎么办呢，别人就总说没事，过一会
: 起来走动走动，看一下远处的绿植就好了，我去，这是谁想的，我这里望去外面全部都
: 是高楼大厦，哪里来的绿植，那些高楼大厦完全挡住了视线，这种土渣的办法还是不要
: 用了。
: 还有的人说那就滴眼药水吧，但是对于我这种带着隐形眼镜，而且眼睛敏感的人来
: 说，眼药水也不用想了，我想这眼睛特别敏感的人一定知道那种感觉吧。有时我画个眼
: 线妆，每次回家卸妆时，眼睛就疼得实在是没办法，后来我再也不敢把我的眼睛随意折
: 腾了。
o*h
8 楼
"en...no history to review... application granted!"
孩子的都批了，家长很快就来了。
求包子！
【在 f*****8 的大作中提到】
: 我家老大昨天才照相打指纹，今天就绿卡批了。这也太快了哈
: 都是10月交表，这下家里都绿了，另加一个小公民
孩子的都批了，家长很快就来了。
求包子！
【在 f*****8 的大作中提到】
: 我家老大昨天才照相打指纹，今天就绿卡批了。这也太快了哈
: 都是10月交表，这下家里都绿了，另加一个小公民
M*t
9 楼
ron howard拍商业流水片的老手，beautiful mind算是最好的作品。
【在 y****n 的大作中提到】
: Ron Howard说这是他最性感的一部电影
: 我们只知道上一次执掌体育题材，他给我们带来了《铁拳男人》
: rt 96%!
: 我想你如果喜欢关于体育的电影，那这部赛车电影你一定不能错过
【在 y****n 的大作中提到】
: Ron Howard说这是他最性感的一部电影
: 我们只知道上一次执掌体育题材，他给我们带来了《铁拳男人》
: rt 96%!
: 我想你如果喜欢关于体育的电影，那这部赛车电影你一定不能错过
l*g
10 楼
不行的，tRNA和mRNA用不一样的polymerase
【在 Q*****n 的大作中提到】
: 想纯化一些tRNA，看到的文献里用的都不是我们平常用的pET或类似的质粒，不知道
: tRNA的克隆跟蛋白基因的克隆是不是不大一样，请有经验的说几句
【在 Q*****n 的大作中提到】
: 想纯化一些tRNA，看到的文献里用的都不是我们平常用的pET或类似的质粒，不知道
: tRNA的克隆跟蛋白基因的克隆是不是不大一样，请有经验的说几句
f*8
11 楼
刚补充了一下，我们大人都先批了。
本来上次小孩跟他爸爸一起批的，但一直没有收到卡，后来一看又倒回去了，估计是没
照相。昨天刚照，以为至少一周呢。
【在 o*******h 的大作中提到】
: "en...no history to review... application granted!"
: 孩子的都批了，家长很快就来了。
: 求包子！
本来上次小孩跟他爸爸一起批的，但一直没有收到卡，后来一看又倒回去了，估计是没
照相。昨天刚照，以为至少一周呢。
【在 o*******h 的大作中提到】
: "en...no history to review... application granted!"
: 孩子的都批了，家长很快就来了。
: 求包子！
y*n
12 楼
Rush这周要上了
可能是Ron Howard最好的电影之一
目前imdb 8.4 (9000+)
RT 82% (80+ reviews)
MC 72% (27 reviews)
【在 y****n 的大作中提到】
: Ron Howard说这是他最性感的一部电影
: 我们只知道上一次执掌体育题材，他给我们带来了《铁拳男人》
: rt 96%!
: 我想你如果喜欢关于体育的电影，那这部赛车电影你一定不能错过
可能是Ron Howard最好的电影之一
目前imdb 8.4 (9000+)
RT 82% (80+ reviews)
MC 72% (27 reviews)
【在 y****n 的大作中提到】
: Ron Howard说这是他最性感的一部电影
: 我们只知道上一次执掌体育题材，他给我们带来了《铁拳男人》
: rt 96%!
: 我想你如果喜欢关于体育的电影，那这部赛车电影你一定不能错过
s*s
13 楼
没做过。不过显然不行
【在 Q*****n 的大作中提到】
: 想纯化一些tRNA，看到的文献里用的都不是我们平常用的pET或类似的质粒，不知道
: tRNA的克隆跟蛋白基因的克隆是不是不大一样，请有经验的说几句
【在 Q*****n 的大作中提到】
: 想纯化一些tRNA，看到的文献里用的都不是我们平常用的pET或类似的质粒，不知道
: tRNA的克隆跟蛋白基因的克隆是不是不大一样，请有经验的说几句
t*n
14 楼
Cong!
【在 f*****8 的大作中提到】
: 我家老大昨天才照相打指纹，今天就绿卡批了。这也太快了哈
: 都是10月交表，这下家里都绿了，另加一个小公民
【在 f*****8 的大作中提到】
: 我家老大昨天才照相打指纹，今天就绿卡批了。这也太快了哈
: 都是10月交表，这下家里都绿了，另加一个小公民
P*e
15 楼
我一直搞不清ron howard到底是个啥型的导演
从驾驭的题材上不如fincher广泛 但是好像也没特别统一的风格
这个确实可以考虑看看
【在 y****n 的大作中提到】
: Ron Howard说这是他最性感的一部电影
: 我们只知道上一次执掌体育题材，他给我们带来了《铁拳男人》
: rt 96%!
: 我想你如果喜欢关于体育的电影，那这部赛车电影你一定不能错过
从驾驭的题材上不如fincher广泛 但是好像也没特别统一的风格
这个确实可以考虑看看
【在 y****n 的大作中提到】
: Ron Howard说这是他最性感的一部电影
: 我们只知道上一次执掌体育题材，他给我们带来了《铁拳男人》
: rt 96%!
: 我想你如果喜欢关于体育的电影，那这部赛车电影你一定不能错过
z*8
16 楼
刚刚做过点。需要先用invitrogen的small RNA kit提总的小RNA,大概好像是250nt一下
的，然后你可以用biotinylated oligo pull down的方法。yield还可以，可以到几个
ug.
的，然后你可以用biotinylated oligo pull down的方法。yield还可以，可以到几个
ug.
t*1
17 楼
cong! 排包子
y*n
18 楼
随便不负责任说两句活跃在美国的作者导演(auteur director)
我的理解，作者导演的大部分作品都强烈的折射出导演独特的风格，甚至即使在你不预
知某部电影的导演，在观影的过程中，通过影片的立意，视觉风格，镜头运用，也大概
能猜测到导演是谁。（当然，作者导演的理论近年屡受质疑，因为如今拍摄一部电影的
成本越来越高，参与电影的人员越来越多，要在一部电影中集中体现导演一人的意志越
来越难。）
目前仍活跃在美国影坛的作者导演里，大卫林奇，吉姆贾木许必其一生，专注独立电影
，值得所有影迷的尊重。
另一方面，越来越多的作者导演游走在艺术和商业之间。我比较喜欢的几位作者导演里
，伍迪艾伦的电影永远浓郁的折射出知识分子的小资情调，斯科塞斯几乎每一部电影都
渗出浓笔重彩的黑帮史诗味道，大卫芬奇一贯的冷峻肃杀，不带感情色彩的从犯罪剖析
到亿万富翁，昆丁塔伦蒂诺一直絮絮叨叨话痨着解构各种类型片，PTA的电影永远皱着
眉头，沉重拷问人性，Terry Gilliam天马行空，可惜近几年淡出（新作零点理论不知
如何），维斯安德森电影中的人物从来都疏离孤寂，格格不入
其余而论，奥利弗斯通以作者导演闻名，近几年商业化越发严重；山姆门德斯以描画中
产生活入木三分起家，去年毅然投身商业大片；你说少年派能不能看出李安文艺电影时
期的影子，对我来讲很难;盖里奇倒是能在福尔摩斯里面透出些许两杆老烟枪时代小痞
子混混的黑色幽默味道。
作者导演能够掌控各种题材和类型的影片，商业文艺全不落下是不是好事，我觉得当然
是。不过在大制作的商业片blockbuster中能多大程度的注入自己的个人风格，只能自
求多福。而电影作为艺术存在的那一部分，或多或少因为商业化而丧失，确实令人惋惜。
回头说说几个商业片的大拿，Ridley Scott爵爷（奉献出异形，银翼杀手，末路狂花，
角斗士，黑鹰坠落，居然一次奥斯卡也没有拿过，真是让人很想骂粗话），Ron Howard
（阿波罗13，美丽心灵，铁拳男人），这俩导演没啥特别浓重的个人风格,如果硬要说
，Ridley Scott比较重视视觉效果，也颇有恶趣味;Howard的作品一贯非常精美，该煽
情该拔高该抑扬顿挫完全是好莱坞一贯的路子，你挑不出毛病，也确实好看，但是少惊
喜少异数，少了点让你看了之后一拍大腿叫声“我擦，原来电影还可以这么拍”的东西。
年轻一点的Peter Jackson和诺兰，其实也都是从有浓郁个人风格的cult片起家（当然
memento可能不太算cult哈哈）,Jackson在指环王里还残存有从前怪力乱神的精神，诺
兰作为当世商业片第一高手，则是商业的足够彻底，也算各有各精彩了。
【在 P*******e 的大作中提到】
: 我一直搞不清ron howard到底是个啥型的导演
: 从驾驭的题材上不如fincher广泛 但是好像也没特别统一的风格
: 这个确实可以考虑看看
我的理解，作者导演的大部分作品都强烈的折射出导演独特的风格，甚至即使在你不预
知某部电影的导演，在观影的过程中，通过影片的立意，视觉风格，镜头运用，也大概
能猜测到导演是谁。（当然，作者导演的理论近年屡受质疑，因为如今拍摄一部电影的
成本越来越高，参与电影的人员越来越多，要在一部电影中集中体现导演一人的意志越
来越难。）
目前仍活跃在美国影坛的作者导演里，大卫林奇，吉姆贾木许必其一生，专注独立电影
，值得所有影迷的尊重。
另一方面，越来越多的作者导演游走在艺术和商业之间。我比较喜欢的几位作者导演里
，伍迪艾伦的电影永远浓郁的折射出知识分子的小资情调，斯科塞斯几乎每一部电影都
渗出浓笔重彩的黑帮史诗味道，大卫芬奇一贯的冷峻肃杀，不带感情色彩的从犯罪剖析
到亿万富翁，昆丁塔伦蒂诺一直絮絮叨叨话痨着解构各种类型片，PTA的电影永远皱着
眉头，沉重拷问人性，Terry Gilliam天马行空，可惜近几年淡出（新作零点理论不知
如何），维斯安德森电影中的人物从来都疏离孤寂，格格不入
其余而论，奥利弗斯通以作者导演闻名，近几年商业化越发严重；山姆门德斯以描画中
产生活入木三分起家，去年毅然投身商业大片；你说少年派能不能看出李安文艺电影时
期的影子，对我来讲很难;盖里奇倒是能在福尔摩斯里面透出些许两杆老烟枪时代小痞
子混混的黑色幽默味道。
作者导演能够掌控各种题材和类型的影片，商业文艺全不落下是不是好事，我觉得当然
是。不过在大制作的商业片blockbuster中能多大程度的注入自己的个人风格，只能自
求多福。而电影作为艺术存在的那一部分，或多或少因为商业化而丧失，确实令人惋惜。
回头说说几个商业片的大拿，Ridley Scott爵爷（奉献出异形，银翼杀手，末路狂花，
角斗士，黑鹰坠落，居然一次奥斯卡也没有拿过，真是让人很想骂粗话），Ron Howard
（阿波罗13，美丽心灵，铁拳男人），这俩导演没啥特别浓重的个人风格,如果硬要说
，Ridley Scott比较重视视觉效果，也颇有恶趣味;Howard的作品一贯非常精美，该煽
情该拔高该抑扬顿挫完全是好莱坞一贯的路子，你挑不出毛病，也确实好看，但是少惊
喜少异数，少了点让你看了之后一拍大腿叫声“我擦，原来电影还可以这么拍”的东西。
年轻一点的Peter Jackson和诺兰，其实也都是从有浓郁个人风格的cult片起家（当然
memento可能不太算cult哈哈）,Jackson在指环王里还残存有从前怪力乱神的精神，诺
兰作为当世商业片第一高手，则是商业的足够彻底，也算各有各精彩了。
【在 P*******e 的大作中提到】
: 我一直搞不清ron howard到底是个啥型的导演
: 从驾驭的题材上不如fincher广泛 但是好像也没特别统一的风格
: 这个确实可以考虑看看
z*8
19 楼
BTW,我做的是细菌的tRNA,只有75nt左右，所以肯定在那个Kit的范围里，如果你是什么
别的真核生物的，就不知道了。因为没查过他们的tRNA多大。不知道可以用这个kit不
。但是你说你要over expression tRNA的话，我就不知道了。
别的真核生物的，就不知道了。因为没查过他们的tRNA多大。不知道可以用这个kit不
。但是你说你要over expression tRNA的话，我就不知道了。
D*D
20 楼
cong
P*e
21 楼
这个帖子如果都不m movie版也就没啥值得m的帖子了
yituan兄出手果然非同凡响 而且yituan兄好像对导演格外关注
我是觉得Fincher该拿个最佳了
Ridley爵爷应该还有机会 oscar最近很尊老 爵爷但凡能拿出叫好影片 觉得希望很大
Peter Jackson讲故事拖沓是个很大问题 不过总体上还算精彩
随便不负责任说两句活跃在美国的作者导演(auteur director)
我的理解，作者导演的大部分作品都强烈的折射出导演独特的风格，甚至即使在你不预
知某部电影的导演，在观影的过程中，通过影片的立意，视觉风格，镜头运用，也大概
能猜测到导演是谁。（当然，作者导演的理论近年屡受质疑，因为如今拍摄一部电影的
成本越来越高，参与电影的人员越来越多，要在一部电影中集中体现导演一人的意志越
来越难。）
目前仍活跃在美国影坛的作者导演里，大卫林奇，吉姆贾木许必其一生，专注独立电影
，值得所有影迷的尊重。
另一方面，越来越多的作者导演游走在艺术和商业之间。我比较喜欢的几位作者导演里
，伍迪艾伦的电影永远浓郁的折射出知识分子的小资情调，斯科塞斯几乎每一部电影都
渗出浓笔重彩的黑帮史诗味道，大卫芬奇一贯的冷峻肃杀，不带感情色彩的从犯罪剖析
到亿万富翁，昆丁塔伦蒂诺一直絮絮叨叨话痨着解构各种类型片，PTA的电影永远皱着
眉头，沉重拷问人性，Terry Gilliam天马行空，可惜近几年淡出（新作零点理论不知
如何），维斯安德森电影中的人物从来都疏离孤寂，格格不入
其余而论，奥利弗斯通以作者导演闻名，近几年商业化越发严重；山姆门德斯以描画中
产生活入木三分起家，去年毅然投身商业大片；你说少年派能不能看出李安文艺电影时
期的影子，对我来讲很难;盖里奇倒是能在福尔摩斯里面透出些许两杆老烟枪时代小痞
子混混的黑色幽默味道。
作者导演能够掌控各种题材和类型的影片，商业文艺全不落下是不是好事，我觉得当然
是。不过在大制作的商业片blockbuster中能多大程度的注入自己的个人风格，只能自
求多福。而电影作为艺术存在的那一部分，或多或少因为商业化而丧失，确实令人惋惜。
回头说说几个商业片的大拿，Ridley Scott爵爷（奉献出异形，银翼杀手，末路狂花，
角斗士，黑鹰坠落，居然一次奥斯卡也没有拿过，真是让人很想骂粗话），Ron Howard
（阿波罗13，美丽心灵，铁拳男人），这俩导演没啥特别浓重的个人风格,如果硬要说
，Ridley Scott比较重视视觉效果，也颇有恶趣味;Howard的作品一贯非常精美，该煽
情该拔高该抑扬顿挫完全是好莱坞一贯的路子，你挑不出毛病，也确实好看，但是少惊
喜少异数，少了点让你看了之后一拍大腿叫声“我擦，原来电影还可以这么拍”的东西。
年轻一点的Peter Jackson和诺兰，其实也都是从有浓郁个人风格的cult片起家（当然
memento可能不太算cult哈哈）,Jackson在指环王里还残存有从前怪力乱神的精神，诺
兰作为当世商业片第一高手，则是商业的足够彻底，也算各有各精彩了。
【在 y****n 的大作中提到】
: 随便不负责任说两句活跃在美国的作者导演(auteur director)
: 我的理解，作者导演的大部分作品都强烈的折射出导演独特的风格，甚至即使在你不预
: 知某部电影的导演，在观影的过程中，通过影片的立意，视觉风格，镜头运用，也大概
: 能猜测到导演是谁。（当然，作者导演的理论近年屡受质疑，因为如今拍摄一部电影的
: 成本越来越高，参与电影的人员越来越多，要在一部电影中集中体现导演一人的意志越
: 来越难。）
: 目前仍活跃在美国影坛的作者导演里，大卫林奇，吉姆贾木许必其一生，专注独立电影
: ，值得所有影迷的尊重。
: 另一方面，越来越多的作者导演游走在艺术和商业之间。我比较喜欢的几位作者导演里
: ，伍迪艾伦的电影永远浓郁的折射出知识分子的小资情调，斯科塞斯几乎每一部电影都
yituan兄出手果然非同凡响 而且yituan兄好像对导演格外关注
我是觉得Fincher该拿个最佳了
Ridley爵爷应该还有机会 oscar最近很尊老 爵爷但凡能拿出叫好影片 觉得希望很大
Peter Jackson讲故事拖沓是个很大问题 不过总体上还算精彩
随便不负责任说两句活跃在美国的作者导演(auteur director)
我的理解，作者导演的大部分作品都强烈的折射出导演独特的风格，甚至即使在你不预
知某部电影的导演，在观影的过程中，通过影片的立意，视觉风格，镜头运用，也大概
能猜测到导演是谁。（当然，作者导演的理论近年屡受质疑，因为如今拍摄一部电影的
成本越来越高，参与电影的人员越来越多，要在一部电影中集中体现导演一人的意志越
来越难。）
目前仍活跃在美国影坛的作者导演里，大卫林奇，吉姆贾木许必其一生，专注独立电影
，值得所有影迷的尊重。
另一方面，越来越多的作者导演游走在艺术和商业之间。我比较喜欢的几位作者导演里
，伍迪艾伦的电影永远浓郁的折射出知识分子的小资情调，斯科塞斯几乎每一部电影都
渗出浓笔重彩的黑帮史诗味道，大卫芬奇一贯的冷峻肃杀，不带感情色彩的从犯罪剖析
到亿万富翁，昆丁塔伦蒂诺一直絮絮叨叨话痨着解构各种类型片，PTA的电影永远皱着
眉头，沉重拷问人性，Terry Gilliam天马行空，可惜近几年淡出（新作零点理论不知
如何），维斯安德森电影中的人物从来都疏离孤寂，格格不入
其余而论，奥利弗斯通以作者导演闻名，近几年商业化越发严重；山姆门德斯以描画中
产生活入木三分起家，去年毅然投身商业大片；你说少年派能不能看出李安文艺电影时
期的影子，对我来讲很难;盖里奇倒是能在福尔摩斯里面透出些许两杆老烟枪时代小痞
子混混的黑色幽默味道。
作者导演能够掌控各种题材和类型的影片，商业文艺全不落下是不是好事，我觉得当然
是。不过在大制作的商业片blockbuster中能多大程度的注入自己的个人风格，只能自
求多福。而电影作为艺术存在的那一部分，或多或少因为商业化而丧失，确实令人惋惜。
回头说说几个商业片的大拿，Ridley Scott爵爷（奉献出异形，银翼杀手，末路狂花，
角斗士，黑鹰坠落，居然一次奥斯卡也没有拿过，真是让人很想骂粗话），Ron Howard
（阿波罗13，美丽心灵，铁拳男人），这俩导演没啥特别浓重的个人风格,如果硬要说
，Ridley Scott比较重视视觉效果，也颇有恶趣味;Howard的作品一贯非常精美，该煽
情该拔高该抑扬顿挫完全是好莱坞一贯的路子，你挑不出毛病，也确实好看，但是少惊
喜少异数，少了点让你看了之后一拍大腿叫声“我擦，原来电影还可以这么拍”的东西。
年轻一点的Peter Jackson和诺兰，其实也都是从有浓郁个人风格的cult片起家（当然
memento可能不太算cult哈哈）,Jackson在指环王里还残存有从前怪力乱神的精神，诺
兰作为当世商业片第一高手，则是商业的足够彻底，也算各有各精彩了。
【在 y****n 的大作中提到】
: 随便不负责任说两句活跃在美国的作者导演(auteur director)
: 我的理解，作者导演的大部分作品都强烈的折射出导演独特的风格，甚至即使在你不预
: 知某部电影的导演，在观影的过程中，通过影片的立意，视觉风格，镜头运用，也大概
: 能猜测到导演是谁。（当然，作者导演的理论近年屡受质疑，因为如今拍摄一部电影的
: 成本越来越高，参与电影的人员越来越多，要在一部电影中集中体现导演一人的意志越
: 来越难。）
: 目前仍活跃在美国影坛的作者导演里，大卫林奇，吉姆贾木许必其一生，专注独立电影
: ，值得所有影迷的尊重。
: 另一方面，越来越多的作者导演游走在艺术和商业之间。我比较喜欢的几位作者导演里
: ，伍迪艾伦的电影永远浓郁的折射出知识分子的小资情调，斯科塞斯几乎每一部电影都
Q*n
22 楼
谢谢回复。我是想提E.coli的tRNA，想先over express，不然产率大概太低了；不过我
也看到有人说overexpress的可能不够均一，因为负责后期加工的酶处理不过来，所以
有点犹豫要不要直接提
【在 z*********8 的大作中提到】
: BTW,我做的是细菌的tRNA,只有75nt左右，所以肯定在那个Kit的范围里，如果你是什么
: 别的真核生物的，就不知道了。因为没查过他们的tRNA多大。不知道可以用这个kit不
: 。但是你说你要over expression tRNA的话，我就不知道了。
也看到有人说overexpress的可能不够均一，因为负责后期加工的酶处理不过来，所以
有点犹豫要不要直接提
【在 z*********8 的大作中提到】
: BTW,我做的是细菌的tRNA,只有75nt左右，所以肯定在那个Kit的范围里，如果你是什么
: 别的真核生物的，就不知道了。因为没查过他们的tRNA多大。不知道可以用这个kit不
: 。但是你说你要over expression tRNA的话，我就不知道了。
p*l
23 楼
gx
Q*n
24 楼
那个biotinylated oligo是针对一个tRNA还是所有tRNA的？另外这个yield是从多少菌液得到的？
【在 z*********8 的大作中提到】
: 刚刚做过点。需要先用invitrogen的small RNA kit提总的小RNA,大概好像是250nt一下
: 的，然后你可以用biotinylated oligo pull down的方法。yield还可以，可以到几个
: ug.
【在 z*********8 的大作中提到】
: 刚刚做过点。需要先用invitrogen的small RNA kit提总的小RNA,大概好像是250nt一下
: 的，然后你可以用biotinylated oligo pull down的方法。yield还可以，可以到几个
: ug.
l*e
25 楼
排包子
z*8
26 楼
oligo是sequence specific，所以纯化出来的是single species tRNA.
我做的菌是mycobacterium，我用了1升。我估计你用ecoli的话1升也应该够了。
我做的菌是mycobacterium，我用了1升。我估计你用ecoli的话1升也应该够了。
c*8
27 楼
gx!!!!!!
z*8
28 楼
谢谢回复。我是想提E.coli的tRNA，想先over express，不然产率大概太低了；不过我
也看到有人说overexpress的可能不够均一，因为负责后期加工的酶处理不过来，所以
有点犹豫要不要直接提.
建议不要这么做，yield很高，因为tRNA很abundant.你提的small RNA里面70%以上都是
tRNA。假若你用1Liter的菌，一个不小心提完了small tRNA就有500ug之类的。然后你
再pull down，少说还是有1-2ug。overexpression我估计不会work.
也看到有人说overexpress的可能不够均一，因为负责后期加工的酶处理不过来，所以
有点犹豫要不要直接提.
建议不要这么做，yield很高，因为tRNA很abundant.你提的small RNA里面70%以上都是
tRNA。假若你用1Liter的菌，一个不小心提完了small tRNA就有500ug之类的。然后你
再pull down，少说还是有1-2ug。overexpression我估计不会work.
H*o
29 楼
gxgx :)
z*8
30 楼
最后需要提醒的是纯化完了的tRNA最好跑bioanalyzer.最少看看质量，和大小符合不。
因为做一次需要的工还不少。所以最好有quality check。
因为做一次需要的工还不少。所以最好有quality check。
k*o
31 楼
cong
h*r
32 楼
这个真不知道。不过BL21(DE)3的rossetta系列都有额外的tRNA,在一个p15 ori的低拷
贝质粒里，名字一般为pRARE或者pRARE2.
贝质粒里，名字一般为pRARE或者pRARE2.
h*n
33 楼
标题偶看成了 小绿卡賊。。。
【在 f*****8 的大作中提到】
: 我家老大昨天才照相打指纹，今天就绿卡批了。这也太快了哈
: 都是10月交表，这下家里都绿了，另加一个小公民
【在 f*****8 的大作中提到】
: 我家老大昨天才照相打指纹，今天就绿卡批了。这也太快了哈
: 都是10月交表，这下家里都绿了，另加一个小公民
Q*n
34 楼
我还有一个疑问，你用biotinylated oligo pull down，是不是要用到高温退火，那然
后tRNA还会回到它天然的结构吗？
【在 z*********8 的大作中提到】
: 最后需要提醒的是纯化完了的tRNA最好跑bioanalyzer.最少看看质量，和大小符合不。
: 因为做一次需要的工还不少。所以最好有quality check。
后tRNA还会回到它天然的结构吗？
【在 z*********8 的大作中提到】
: 最后需要提醒的是纯化完了的tRNA最好跑bioanalyzer.最少看看质量，和大小符合不。
: 因为做一次需要的工还不少。所以最好有quality check。
z*8
35 楼
具体退火温度要具体计算.回不回到天然结构我不知道。因为我当时的目的只是看一个
identity 和有没有amino-acylated。这个问题你需要问下tRNA expert
identity 和有没有amino-acylated。这个问题你需要问下tRNA expert
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