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做 gene knock in，哪些情况下用外源的poly A，哪些情况下不另外加polyA而利用内源的？

做 gene knock in，哪些情况下用外源的poly A，哪些情况下不另外加polyA而利用内源的？# Biology - 生物学

w*32011-08-23 07:08

1 楼

【以下文字转载自 Biology 讨论区】
发信人: wang1983 (无), 信区: Biology
标题: 求审稿机会，细胞和分子生物学，神经生物学，先谢谢了！
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Dec 28 23:38:35 2013, 美东)
准备用1-2年时间准备eb1a申请，求大牛推荐审稿机会。我博士期间主要研究神经细胞
内蛋白质运输和细胞骨架，现在是博士后第三年开始，博士后期间主要研究帕金森症和
老年痴呆症的分子生物学机理。已经有过2次审稿经验，求大牛推荐审稿，在这里先谢
谢了！

j*n2011-08-23 07:08

2 楼

【以下文字转载自 virgo 俱乐部】
发信人: jnyn (小是小白的小，8是八卦的8), 信区: virgo
标题: 献给所有处女座的人from最懂你的处女座 ZT
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Dec 12 02:58:49 2011, 美东)
处女座的飞蛾扑火
大部分星座书上都会说，处女座的人冷漠。其实，他们只不过是难以和人在情感上建立
较为亲密的关系罢了。哪怕那个人是他的父母。他们，有着比常人更加纤细柔软的心。
2011-03-25 12:18:26 来自: lemon(我只爱外婆)
白天理性。夜晚感性。
白天坚强。夜晚脆弱。
为一句话而落泪。
为一句话而不爱。
前一分钟牵手。
后一分钟却分手。
想很多矛盾体。
试图在爱中寻找
自以为完美的爱情
却最终受尽伤害。
爱上时，飞蛾扑火。
不爱时，寡言冷漠。
有时我无法忍受这种情绪
但我可以怎么样
我就是爱上这么一个
无畏于心
无悔于情的处女座。
from：最懂你的处女座
百变多面却真实可人的处女座
2011-03-25 12:18:26 来自: lemon(我只爱外婆)
如果你还在认为处处就是个老气横秋，罗嗦，老实的乖宝宝，那你就太OUT。这是十二
星座里最多面体的星座，只是隐藏的过深，一般人都不知道。处处内心是个万花筒，其
它十一星座的性格处处都有，只是连自己都不承认，怕别人会认为自己不定性，故隐藏
很深，表现出来的只有老实的一面。（深得只有长期跟处处接触的人才知道）
在夏末秋初景色炫烂而又充满成熟味道的时节，上帝创造了一类善良而又特殊的人们，
他们有着如同狮子座的热情、骄傲以及豪迈的义气，但又被自己莫名的不满而有着小小
的自悲；他们又很像天秤座，爱美，爱交朋友，爱独自哀怜却又在内心的调解下信心倍
增，时不时也会有一些小犹豫、但决不会拖拖拉拉；他们有着白羊座般的孩子气和天真
纯洁，也有着双子般的精灵古怪（怀疑没有？恐怕是你们交情不深，若是关系密切，你
肯定会发现处处们却是如此，心里搞怪点子一堆，苦于不敢实行）；他们有着金牛座般
的沉稳淡定，踏实上进，却也会打破樊篱勇于求新创新；他们也会有如双鱼般的浪漫又
富于幻想，和熟悉的朋友能够无话不谈（处处们的浪漫一面或许只对好朋友或陌生人展
示）；但有时也有如天蝎般的冷漠神秘，让人琢磨不透；同时也会像巨蟹般温馨爱家，
打理清楚你的生活；又会和射手般喜爱自由，富有正义感，乐观霍达；又如水瓶般思想
活跃，总有想不完的问题，但真的很聪慧；又如摩羯般的爱工作，并有强烈的责任感和
自知之明；他们会为所爱的人唠叨，会挑惕，会为了你的离开或没有音信而焦灼不安，
会为了所爱的人飞蛾扑火，也会为了心中的ta放下高姿态过平凡安定的生活 ……这就
是处女座，处处是第一患难见真情的星座，可惜这样的机会并不多. 如果你身边有这么
几位可爱、善良、美丽的人们，不论是朋友、恋人、同学抑或是同事，亲爱的们、请好
好珍惜他们，因为他们会让你懂得什么是幸福…！

s*y2011-08-23 07:08

3 楼

霍建华林心如520公开恋情之后，一群人跑去胡歌的微博下面安慰，却不知道原来再这
段感情之中还有一个人，那就是言承旭。
霍林的恋情始于年初林心如生日的时候，那天言承旭也有在并有准备礼物，只不过最后
有事提前离开了，言离开后霍赶到，不知道是不是因为被灌了酒而壮胆，终于向林表白
成功。
不过在这之前言承旭和林心如的绯闻也是炒过一阵子，15年年底的时候两人还被拍到在
聚会上互动亲密，一起敬酒，一起回家，没想到这段感情还没进一步发展的时候，就被
霍建华截胡了。
不过霍建华和林心如也是听般配的，至于言承旭，反正还有志玲姐姐在。

t*s2011-08-23 07:08

4 楼

相机上的都传不了，说什么超过了1.oo M，只有传一点手机上随便照的了。

y*u2011-08-23 07:08

5 楼

想走火了，上来问问

j*j2011-08-23 07:08

6 楼

赞

。

【在 j**n 的大作中提到】

: 【以下文字转载自 virgo 俱乐部】
: 发信人: jnyn (小是小白的小，8是八卦的8), 信区: virgo
: 标题: 献给所有处女座的人from最懂你的处女座 ZT
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Dec 12 02:58:49 2011, 美东)
: 处女座的飞蛾扑火
: 大部分星座书上都会说，处女座的人冷漠。其实，他们只不过是难以和人在情感上建立
: 较为亲密的关系罢了。哪怕那个人是他的父母。他们，有着比常人更加纤细柔软的心。
: 2011-03-25 12:18:26 来自: lemon(我只爱外婆)
: 白天理性。夜晚感性。
: 白天坚强。夜晚脆弱。

s*y2011-08-23 07:08

7 楼

我猜的啊，一般都是用外源的，因为用内源的话比较难于保证剪切的时候会不会
搞错。
但是假如3'-UTR有一些functional site 的话（比方说miRNA site, protein binding
site)那就只好用内源的了。

【在 y*********u 的大作中提到】

: 想走火了，上来问问

R*y2011-08-23 07:08

8 楼

well said.
性格很好，和任何人都可以和谐地相处，给予轻松的快乐。

处处内心是个万花筒，其它十一星座的性格处处都有，只是连自己都不承认，怕别人会
认为自己不定性，故隐藏很深，表现出来的只有老实的一面。（深得只有长期跟处处接
触的人才知道）

【在 j**n 的大作中提到】

y*u2011-08-23 07:08

9 楼

that is also how I figured it, I designed such a knock in animal by
replacing the whole exon1 and exon2 (keep some flanking sequence as splicing
context) without additional polyA signal. I am hoping it would work

binding

【在 s******y 的大作中提到】

: 我猜的啊，一般都是用外源的，因为用内源的话比较难于保证剪切的时候会不会
: 搞错。
: 但是假如3'-UTR有一些functional site 的话（比方说miRNA site, protein binding
: site)那就只好用内源的了。

y*u2011-08-23 07:08

10 楼

/i am waiting for feedback from people who did this!!!!