问个关于细胞培养问题--别嫌弱# Biology - 生物学b*g2011-10-21 07:101 楼如果拧紧细胞培养瓶瓶盖,不让里面空气与培养箱中的空气交换24 hours,这种状态给细胞造成的是哪种stress??缺氧?积聚的碱性pH? (因为二氧化碳进不去)细胞自己代谢过程中产生的有害气体?
h*r2011-10-21 07:103 楼积聚的碱性pH? 这个可能性不大。CO2在大气中0.03%吧,主要是自己能产CO2出不去。我觉得变酸的可能性大点。另外是厌氧下的有机酸的积累。可以在瓶子里悬挂一块儿KOH,让它吸收CO2,但不和培养基接触。也可以考虑用buffer陪培养基,例如大肠用TB培养基。
b*g2011-10-21 07:104 楼谢谢回答,可是培养箱中的CO2是5%啊,它的作用不就是维持培养基的酸性吗?我自己空想,也觉得应该是无氧条件对细胞造成的伤害。【在 h**********r 的大作中提到】: 积聚的碱性pH? 这个可能性不大。CO2在大气中0.03%吧,主要是自己能产CO2出不去。: 我觉得变酸的可能性大点。另外是厌氧下的有机酸的积累。: 可以在瓶子里悬挂一块儿KOH,让它吸收CO2,但不和培养基接触。: 也可以考虑用buffer陪培养基,例如大肠用TB培养基。
b*h2011-10-21 07:105 楼Co2是为了维持酸性环境吗?应该是缓冲作用维持ph7.4的稳定吧?【在 b*********g 的大作中提到】: 谢谢回答,可是培养箱中的CO2是5%啊,它的作用不就是维持培养基的酸性吗?: 我自己空想,也觉得应该是无氧条件对细胞造成的伤害。
b*g2011-10-21 07:106 楼对对!!是维持培养基的pH!!我是想说在空气中CO2含量少,所以培养基放久了就会变粉红,变碱性,可是放在高CO2环境中就是为了中和这种变化,起到的是酸性的作用【在 b********h 的大作中提到】: Co2是为了维持酸性环境吗?应该是缓冲作用维持ph7.4的稳定吧?
b*g2011-10-21 07:108 楼如果拧紧细胞培养瓶瓶盖,不让里面空气与培养箱中的空气交换24 hours,这种状态给细胞造成的是哪种stress??缺氧?积聚的碱性pH? (因为二氧化碳进不去)细胞自己代谢过程中产生的有害气体?
h*r2011-10-21 07:1010 楼积聚的碱性pH? 这个可能性不大。CO2在大气中0.03%吧,主要是自己能产CO2出不去。我觉得变酸的可能性大点。另外是厌氧下的有机酸的积累。可以在瓶子里悬挂一块儿KOH,让它吸收CO2,但不和培养基接触。也可以考虑用buffer陪培养基,例如大肠用TB培养基。
b*g2011-10-21 07:1011 楼谢谢回答,可是培养箱中的CO2是5%啊,它的作用不就是维持培养基的酸性吗?我自己空想,也觉得应该是无氧条件对细胞造成的伤害。【在 h**********r 的大作中提到】: 积聚的碱性pH? 这个可能性不大。CO2在大气中0.03%吧,主要是自己能产CO2出不去。: 我觉得变酸的可能性大点。另外是厌氧下的有机酸的积累。: 可以在瓶子里悬挂一块儿KOH,让它吸收CO2,但不和培养基接触。: 也可以考虑用buffer陪培养基,例如大肠用TB培养基。
b*h2011-10-21 07:1012 楼Co2是为了维持酸性环境吗?应该是缓冲作用维持ph7.4的稳定吧?【在 b*********g 的大作中提到】: 谢谢回答,可是培养箱中的CO2是5%啊,它的作用不就是维持培养基的酸性吗?: 我自己空想,也觉得应该是无氧条件对细胞造成的伤害。
b*g2011-10-21 07:1013 楼对对!!是维持培养基的pH!!我是想说在空气中CO2含量少,所以培养基放久了就会变粉红,变碱性,可是放在高CO2环境中就是为了中和这种变化,起到的是酸性的作用【在 b********h 的大作中提到】: Co2是为了维持酸性环境吗?应该是缓冲作用维持ph7.4的稳定吧?
L*S2011-10-21 07:1015 楼可能主要会是缺氧。CO2 是维持培养液PH (7.4),但是一般培养液都会加入NaHCO3 和HEPES,而且HEPES对酸碱度的调节作用受CO2 浓度影响小。细胞自己代谢过程中产生的有害气体?我觉得要看觉体细胞的数目 (细胞数/ml培养液或者细胞数/cm2)还有细胞的耐受程度。
j*x2011-10-21 07:1016 楼关于这个问题,刚读研无聊的时候做过不是很严谨的比较,“结论”是和缺氧无关当时的培养瓶盖还是老式的,不带filter需要自己拧开一个角度的那种,同时养的三种细胞293/Huh7/Hela,用的invitrogen的普通DMEM培养基,不含hepes。有一次传细胞的时候没留神盖子全部拧紧,结果第二天发现所有培养基全部变碱,293/Huh7贴壁出现严重问题,漂浮大量“死细胞”,活细胞形态也非常差。但是Hela没有任何问题,一切正常。拧开瓶盖之后不到24小时,多数“死细胞”重新贴壁,细胞形态恢复正常,培养基颜色也回到正常pH范围。这时候我又把瓶盖拧紧,继续培养差不多48小时,所有细胞生长一切如常,这时候由于细胞已经生长一段时间自然产酸,即便拧紧瓶盖,培养基也不会变碱的过分。我的“结论”是,某些细胞(293/Huh7)对培养基pH比较敏感,尤其是在悬浮后等待贴壁的时候,而有些糙的比如Hela就不敏感,而缺不缺氧,大部分细胞不在乎,尤其是在短时间内【在 L****S 的大作中提到】: 可能主要会是缺氧。: CO2 是维持培养液PH (7.4),但是一般培养液都会加入NaHCO3 和HEPES,而且HEPES对酸: 碱度的调节作用受CO2 浓度影响小。: 细胞自己代谢过程中产生的有害气体?我觉得要看觉体细胞的数目 (细胞数/ml培养液: 或者细胞数/cm2)还有细胞的耐受程度。
c*t2011-10-21 07:1017 楼Warburg effect?肿瘤细胞的能量来源主要是无氧糖酵解而不是氧化磷酸化.【在 j****x 的大作中提到】: 关于这个问题,刚读研无聊的时候做过不是很严谨的比较,“结论”是和缺氧无关: 当时的培养瓶盖还是老式的,不带filter需要自己拧开一个角度的那种,同时养的三种: 细胞293/Huh7/Hela,用的invitrogen的普通DMEM培养基,不含hepes。有一次传细胞的: 时候没留神盖子全部拧紧,结果第二天发现所有培养基全部变碱,293/Huh7贴壁出现严: 重问题,漂浮大量“死细胞”,活细胞形态也非常差。但是Hela没有任何问题,一切正: 常。拧开瓶盖之后不到24小时,多数“死细胞”重新贴壁,细胞形态恢复正常,培养基: 颜色也回到正常pH范围。这时候我又把瓶盖拧紧,继续培养差不多48小时,所有细胞生: 长一切如常,这时候由于细胞已经生长一段时间自然产酸,即便拧紧瓶盖,培养基也不: 会变碱的过分。: 我的“结论”是,某些细胞(293/Huh7)对培养基pH比较敏感,尤其是在悬浮后等待贴