d*6
2 楼
犹豫中。。。
b*r
3 楼
请大家推荐一下protocol或者哪个公司的kit吧，我已经被折腾了几个星期了还是扩不.我不是做
realtime，所以kit里不能含有sybrgreen
出来
网上搜到beckman coutler有个AmpliGrid Single Cell One-Step RT-PCR System，有
人用过吗？
还有invitrogen有个RNA UltraSense™ One-Step Quantitative RT-PCR System
realtime，所以kit里不能含有sybrgreen
出来
网上搜到beckman coutler有个AmpliGrid Single Cell One-Step RT-PCR System，有
人用过吗？
还有invitrogen有个RNA UltraSense™ One-Step Quantitative RT-PCR System
p*e
4 楼
check一下过去几个月你都用了多少流量喽
如果close to 2g，那就加点儿
如果离2g还远那就没必要浪费钱了：D
【在 d****6 的大作中提到】
: 犹豫中。。。
如果close to 2g，那就加点儿
如果离2g还远那就没必要浪费钱了：D
【在 d****6 的大作中提到】
: 犹豫中。。。
r*y
5 楼
这里好像有人用qiagen的
不.我不是做
System
【在 b****r 的大作中提到】
: 请大家推荐一下protocol或者哪个公司的kit吧，我已经被折腾了几个星期了还是扩不.我不是做
: realtime，所以kit里不能含有sybrgreen
: 出来
: 网上搜到beckman coutler有个AmpliGrid Single Cell One-Step RT-PCR System，有
: 人用过吗？
: 还有invitrogen有个RNA UltraSense™ One-Step Quantitative RT-PCR System
不.我不是做
System
【在 b****r 的大作中提到】
: 请大家推荐一下protocol或者哪个公司的kit吧，我已经被折腾了几个星期了还是扩不.我不是做
: realtime，所以kit里不能含有sybrgreen
: 出来
: 网上搜到beckman coutler有个AmpliGrid Single Cell One-Step RT-PCR System，有
: 人用过吗？
: 还有invitrogen有个RNA UltraSense™ One-Step Quantitative RT-PCR System
l*u
6 楼
如果现在2gb的data有corporate discount就绝对不要上3gb的，因为现在的3gb data不
打折
【在 d****6 的大作中提到】
: 犹豫中。。。
打折
【在 d****6 的大作中提到】
: 犹豫中。。。
M*a
7 楼
俺们实验室用Zymo microRNA kit.
不管是细菌还是动物细胞，做RT-PCR成功率是100%。
不.我不是做
System
【在 b****r 的大作中提到】
: 请大家推荐一下protocol或者哪个公司的kit吧，我已经被折腾了几个星期了还是扩不.我不是做
: realtime，所以kit里不能含有sybrgreen
: 出来
: 网上搜到beckman coutler有个AmpliGrid Single Cell One-Step RT-PCR System，有
: 人用过吗？
: 还有invitrogen有个RNA UltraSense™ One-Step Quantitative RT-PCR System
不管是细菌还是动物细胞，做RT-PCR成功率是100%。
不.我不是做
System
【在 b****r 的大作中提到】
: 请大家推荐一下protocol或者哪个公司的kit吧，我已经被折腾了几个星期了还是扩不.我不是做
: realtime，所以kit里不能含有sybrgreen
: 出来
: 网上搜到beckman coutler有个AmpliGrid Single Cell One-Step RT-PCR System，有
: 人用过吗？
: 还有invitrogen有个RNA UltraSense™ One-Step Quantitative RT-PCR System
w*t
8 楼
楼主，要听熊猫的。
【在 p*********e 的大作中提到】
: check一下过去几个月你都用了多少流量喽
: 如果close to 2g，那就加点儿
: 如果离2g还远那就没必要浪费钱了：D
【在 p*********e 的大作中提到】
: check一下过去几个月你都用了多少流量喽
: 如果close to 2g，那就加点儿
: 如果离2g还远那就没必要浪费钱了：D
M*a
9 楼
sorry,I talked about the single cell level.
c*d
10 楼
打折的啊
3GB for iPhone on 4G LTE $30.00
Service Discount -$5.70
【在 l******u 的大作中提到】
: 如果现在2gb的data有corporate discount就绝对不要上3gb的，因为现在的3gb data不
: 打折
3GB for iPhone on 4G LTE $30.00
Service Discount -$5.70
【在 l******u 的大作中提到】
: 如果现在2gb的data有corporate discount就绝对不要上3gb的，因为现在的3gb data不
: 打折
b*r
11 楼
我就是说少量细胞，包括单个或者数个细胞
你用了这个kit提了RNA后进一步怎么做RT呢
【在 M**a 的大作中提到】
: sorry,I talked about the single cell level.
你用了这个kit提了RNA后进一步怎么做RT呢
【在 M**a 的大作中提到】
: sorry,I talked about the single cell level.
d*6
12 楼
有道理，不过我转眼一想，我多出来的一个G可以用来大胆tether我的ipad了，还是上
3GB吧，而且我查了，3GB也有discount,其实每个月也就多了3块5
【在 p*********e 的大作中提到】
: check一下过去几个月你都用了多少流量喽
: 如果close to 2g，那就加点儿
: 如果离2g还远那就没必要浪费钱了：D
3GB吧，而且我查了，3GB也有discount,其实每个月也就多了3块5
【在 p*********e 的大作中提到】
: check一下过去几个月你都用了多少流量喽
: 如果close to 2g，那就加点儿
: 如果离2g还远那就没必要浪费钱了：D
O*U
13 楼
ambion的cells to cDNA还行
不过不如直接用水+RNaseOUT把细胞破了来得快
反正我从来都是直接加水破细胞，用clonetech的EcoDRY逆转录，简单快捷
10个细胞以下很稳定
不.我不是做
System
【在 b****r 的大作中提到】
: 请大家推荐一下protocol或者哪个公司的kit吧，我已经被折腾了几个星期了还是扩不.我不是做
: realtime，所以kit里不能含有sybrgreen
: 出来
: 网上搜到beckman coutler有个AmpliGrid Single Cell One-Step RT-PCR System，有
: 人用过吗？
: 还有invitrogen有个RNA UltraSense™ One-Step Quantitative RT-PCR System
不过不如直接用水+RNaseOUT把细胞破了来得快
反正我从来都是直接加水破细胞，用clonetech的EcoDRY逆转录，简单快捷
10个细胞以下很稳定
不.我不是做
System
【在 b****r 的大作中提到】
: 请大家推荐一下protocol或者哪个公司的kit吧，我已经被折腾了几个星期了还是扩不.我不是做
: realtime，所以kit里不能含有sybrgreen
: 出来
: 网上搜到beckman coutler有个AmpliGrid Single Cell One-Step RT-PCR System，有
: 人用过吗？
: 还有invitrogen有个RNA UltraSense™ One-Step Quantitative RT-PCR System
x*g
14 楼
每个公司的discount plan都不一样。
我们公司现在就是3G不打折，5G才有折扣。
但以前2G的都grandfather in了。还可以26%。
我们公司现在就是3G不打折，5G才有折扣。
但以前2G的都grandfather in了。还可以26%。
b*r
15 楼
你这个做了逆转录后用什么酶做PCR？ 大概多少个循环才行？要不要做nesting PCR呢？
【在 O**U 的大作中提到】
: ambion的cells to cDNA还行
: 不过不如直接用水+RNaseOUT把细胞破了来得快
: 反正我从来都是直接加水破细胞，用clonetech的EcoDRY逆转录，简单快捷
: 10个细胞以下很稳定
:
: 不.我不是做
: System
【在 O**U 的大作中提到】
: ambion的cells to cDNA还行
: 不过不如直接用水+RNaseOUT把细胞破了来得快
: 反正我从来都是直接加水破细胞，用clonetech的EcoDRY逆转录，简单快捷
: 10个细胞以下很稳定
:
: 不.我不是做
: System
G*C
16 楼
unlimited data的飘过~~~
s*s
17 楼
加dnase?
【在 O**U 的大作中提到】
: ambion的cells to cDNA还行
: 不过不如直接用水+RNaseOUT把细胞破了来得快
: 反正我从来都是直接加水破细胞，用clonetech的EcoDRY逆转录，简单快捷
: 10个细胞以下很稳定
:
: 不.我不是做
: System
【在 O**U 的大作中提到】
: ambion的cells to cDNA还行
: 不过不如直接用水+RNaseOUT把细胞破了来得快
: 反正我从来都是直接加水破细胞，用clonetech的EcoDRY逆转录，简单快捷
: 10个细胞以下很稳定
:
: 不.我不是做
: System
l*u
18 楼
原来还可以打折啊，我从macrumors上看的不准啊
【在 c*****d 的大作中提到】
: 打折的啊
: 3GB for iPhone on 4G LTE $30.00
: Service Discount -$5.70
【在 c*****d 的大作中提到】
: 打折的啊
: 3GB for iPhone on 4G LTE $30.00
: Service Discount -$5.70
b*r
19 楼
楼上说的对啊，你这个不加DNAse吗？不加对后续有影响的可能，加了也可能影响接下
来的PCR，DNAse又不容易去掉吧
【在 O**U 的大作中提到】
: ambion的cells to cDNA还行
: 不过不如直接用水+RNaseOUT把细胞破了来得快
: 反正我从来都是直接加水破细胞，用clonetech的EcoDRY逆转录，简单快捷
: 10个细胞以下很稳定
:
: 不.我不是做
: System
来的PCR，DNAse又不容易去掉吧
【在 O**U 的大作中提到】
: ambion的cells to cDNA还行
: 不过不如直接用水+RNaseOUT把细胞破了来得快
: 反正我从来都是直接加水破细胞，用clonetech的EcoDRY逆转录，简单快捷
: 10个细胞以下很稳定
:
: 不.我不是做
: System
d*d
20 楼
顺带问一下如何离心回收少量的细胞。
我也是要从少量的细胞中提RNA然后做qPCR。之前要做FACS staining 淋巴细胞, 然后
sort出大约1000个细胞在0.5ml的buffer中。所以提RNA前要将细胞沉淀。但因为细胞太
少，即使全部离心下来也不可见。所以想请问一下大家有什么高招可以确保细胞都离心
下来。
【在 b****r 的大作中提到】
: 我就是说少量细胞，包括单个或者数个细胞
: 你用了这个kit提了RNA后进一步怎么做RT呢
我也是要从少量的细胞中提RNA然后做qPCR。之前要做FACS staining 淋巴细胞, 然后
sort出大约1000个细胞在0.5ml的buffer中。所以提RNA前要将细胞沉淀。但因为细胞太
少，即使全部离心下来也不可见。所以想请问一下大家有什么高招可以确保细胞都离心
下来。
【在 b****r 的大作中提到】
: 我就是说少量细胞，包括单个或者数个细胞
: 你用了这个kit提了RNA后进一步怎么做RT呢
a*a
21 楼
少量细胞是多少？
以前用10个小鼠oocyte抽rna，用专门的微量rna 吸附柱kit
我在国内用天根，那么qiagen应该也有类似的
抽提过程加DNAse消化的,洗下来全部反转录到20ul体系
取1ul做realtime， gapdh ct大概17-18
以前用10个小鼠oocyte抽rna，用专门的微量rna 吸附柱kit
我在国内用天根，那么qiagen应该也有类似的
抽提过程加DNAse消化的,洗下来全部反转录到20ul体系
取1ul做realtime， gapdh ct大概17-18
a*a
22 楼
能不能低温浓缩一下， 直接加lysis buffer。。
【在 d****d 的大作中提到】
: 顺带问一下如何离心回收少量的细胞。
: 我也是要从少量的细胞中提RNA然后做qPCR。之前要做FACS staining 淋巴细胞, 然后
: sort出大约1000个细胞在0.5ml的buffer中。所以提RNA前要将细胞沉淀。但因为细胞太
: 少，即使全部离心下来也不可见。所以想请问一下大家有什么高招可以确保细胞都离心
: 下来。
【在 d****d 的大作中提到】
: 顺带问一下如何离心回收少量的细胞。
: 我也是要从少量的细胞中提RNA然后做qPCR。之前要做FACS staining 淋巴细胞, 然后
: sort出大约1000个细胞在0.5ml的buffer中。所以提RNA前要将细胞沉淀。但因为细胞太
: 少，即使全部离心下来也不可见。所以想请问一下大家有什么高招可以确保细胞都离心
: 下来。
b*r
23 楼
你这个方法似乎超强啊，17，8循环那都比得上普通RT了，难以置信
【在 a*******a 的大作中提到】
: 少量细胞是多少？
: 以前用10个小鼠oocyte抽rna，用专门的微量rna 吸附柱kit
: 我在国内用天根，那么qiagen应该也有类似的
: 抽提过程加DNAse消化的,洗下来全部反转录到20ul体系
: 取1ul做realtime， gapdh ct大概17-18
【在 a*******a 的大作中提到】
: 少量细胞是多少？
: 以前用10个小鼠oocyte抽rna，用专门的微量rna 吸附柱kit
: 我在国内用天根，那么qiagen应该也有类似的
: 抽提过程加DNAse消化的,洗下来全部反转录到20ul体系
: 取1ul做realtime， gapdh ct大概17-18
a*a
24 楼
我们反转录用的是toyobo的kit
一般1ug total RNA反转录到20ul体系里，取0.5ul做realtime
toyobo的realtime kit ct大概15+-0.3
18个cycle就又是10倍的浓度差了
而且我用的是卵细胞， 比较大mRNA也比较多
10个普通细胞肯定不会有这个效率的。
【在 b****r 的大作中提到】
: 你这个方法似乎超强啊，17，8循环那都比得上普通RT了，难以置信
一般1ug total RNA反转录到20ul体系里，取0.5ul做realtime
toyobo的realtime kit ct大概15+-0.3
18个cycle就又是10倍的浓度差了
而且我用的是卵细胞， 比较大mRNA也比较多
10个普通细胞肯定不会有这个效率的。
【在 b****r 的大作中提到】
: 你这个方法似乎超强啊，17，8循环那都比得上普通RT了，难以置信
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