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问一个lentivirus的问题

问一个lentivirus的问题# Biology - 生物学

a*o2011-11-01 07:11

1 楼

３月４号电话面完(Skype video)。４月２１号接到校园面试通知。５月１号面试。需
要准备１小时研究报告（ＲＥＳＥＡＲＣＨ　ＳＥＭＩＮＡＲ）。没提教书。显准备Ｐ
ＰＴ中。有一下问题需大牛相告：
１。ＰＰＴ　格式清新点（比如空白）还是花哨点（有图案）。
２。能出现现在单位的ＬＯＧＯ吗？
３。要用面试学校的ＬＯＧＯ吗？（只是首页，还是每页都要？）
４。感谢页是第二页还是最后一页。
５。大约多少页比较合适（１小时，估计１０-１５分钟提问）。

L*e2011-11-01 07:11

2 楼

I am testing transduction of lentivirus (vsv-g) in primary hippocampal
neurons.
I have tried 5ug/ml polybrene for over night, however I have observed
tremendous cell death. : ( Any suggestion for a better way to infect primary
neurons?
Thanks ahead!

X*S2011-11-01 07:11

3 楼

看个人风格，不过我个人偏向于清新点，总之我的原则是如果你不准备讲某个图或者表
，那么最好就不要放在ppt里
可以的
好像比较少见
最后一页，尤其是如果你有合作，放在最后一页比较方便说刚才讲过的某某工作是跟某
某合作的
30-40页，我老板跟我说提问环节更能体现一个人的水平，所以一定要留足够多时间给
听众提问。

【在 a*******o 的大作中提到】

: ３月４号电话面完(Skype video)。４月２１号接到校园面试通知。５月１号面试。需
: 要准备１小时研究报告（ＲＥＳＥＡＲＣＨ　ＳＥＭＩＮＡＲ）。没提教书。显准备Ｐ
: ＰＴ中。有一下问题需大牛相告：
: １。ＰＰＴ　格式清新点（比如空白）还是花哨点（有图案）。
: ２。能出现现在单位的ＬＯＧＯ吗？
: ３。要用面试学校的ＬＯＧＯ吗？（只是首页，还是每页都要？）
: ４。感谢页是第二页还是最后一页。
: ５。大约多少页比较合适（１小时，估计１０-１５分钟提问）。

j*x2011-11-01 07:11

4 楼

有对照吗？
尝试降低vsvg包膜蛋白质粒在转染时的配比，vsvg的毒性对很多细胞比较强。另外就是
尽量提高包装效率，用尽量少的病毒上清感染

primary

【在 L*******e 的大作中提到】

: I am testing transduction of lentivirus (vsv-g) in primary hippocampal
: neurons.
: I have tried 5ug/ml polybrene for over night, however I have observed
: tremendous cell death. : ( Any suggestion for a better way to infect primary
: neurons?
: Thanks ahead!

a*o2011-11-01 07:11

5 楼

Thanks!

【在 X****S 的大作中提到】

:
: 看个人风格，不过我个人偏向于清新点，总之我的原则是如果你不准备讲某个图或者表
: ，那么最好就不要放在ppt里
: 可以的
: 好像比较少见
: 最后一页，尤其是如果你有合作，放在最后一页比较方便说刚才讲过的某某工作是跟某
: 某合作的
: 30-40页，我老板跟我说提问环节更能体现一个人的水平，所以一定要留足够多时间给
: 听众提问。

L*e2011-11-01 07:11

6 楼

The virus I used is high efficient, it has been tested previously by other
labs on multiple cell lines and stem cells, but not primary rat neuronal
culture. I had a control with polybrene alone, it was toxic. I also
increased the quantity of virus I used, which helped a little bit. The only
thing I haven't tried is to adjust the ratio between virus and polybrene. So
frustrated.....
PS: love your profile photo : )

【在 j****x 的大作中提到】

: 有对照吗？
: 尝试降低vsvg包膜蛋白质粒在转染时的配比，vsvg的毒性对很多细胞比较强。另外就是
: 尽量提高包装效率，用尽量少的病毒上清感染
:
: primary

A*y2011-11-01 07:11

7 楼

Polybrene warns not to used on primary neurons. Do spin transduction maybe?

L*e2011-11-01 07:11

8 楼

what is spin transduction? SORRY, I AM SO DUMB.

maybe?

【在 A******y 的大作中提到】

: Polybrene warns not to used on primary neurons. Do spin transduction maybe?

j*x2011-11-01 07:11

9 楼

如果是这种情况，那自然没啥好说的，降低polybrene的比例甚至完全不加，很多情况
下一样可以感染只是效率降低，我对primary neuro cell不熟，但是在primary
hepatocyte上，spin infection效果还不错

only
So

【在 L*******e 的大作中提到】

: The virus I used is high efficient, it has been tested previously by other
: labs on multiple cell lines and stem cells, but not primary rat neuronal
: culture. I had a control with polybrene alone, it was toxic. I also
: increased the quantity of virus I used, which helped a little bit. The only
: thing I haven't tried is to adjust the ratio between virus and polybrene. So
: frustrated.....
: PS: love your profile photo : )

a*d2011-11-01 07:11

10 楼

You don't have to use polybrene for lentivirus transduction in primary
neuronal culture. If you concentrate the lentivirus, make sure to spin down
the undissolved pellet after re-suspending the viral particle. The
undissolved pellet could be toxic for cells too.

L*e2011-11-01 07:11

11 楼

Do you mean that I should add the virus directly?

down

【在 a****d 的大作中提到】

: You don't have to use polybrene for lentivirus transduction in primary
: neuronal culture. If you concentrate the lentivirus, make sure to spin down
: the undissolved pellet after re-suspending the viral particle. The
: undissolved pellet could be toxic for cells too.

L*e2011-11-01 07:11

12 楼

what is spin infection? Do you mind sending me your protocol? Thanks!

【在 j****x 的大作中提到】

: 如果是这种情况，那自然没啥好说的，降低polybrene的比例甚至完全不加，很多情况
: 下一样可以感染只是效率降低，我对primary neuro cell不熟，但是在primary
: hepatocyte上，spin infection效果还不错
:
: only
: So

j*x2011-11-01 07:11

13 楼

很简单，就是染毒后细胞培养板在2000rpm（800g？）32度/37度下离心1-2小时，具体
的条件参数根据不用的细胞可能需要调整

【在 L*******e 的大作中提到】

: what is spin infection? Do you mind sending me your protocol? Thanks!

L*e2011-11-01 07:11

14 楼

with polybrene? or without? I checked some websites, most people still use
polybrene. Do you use it in your case? I guess 1 or 2 hrs incubation of
polybrene is not as toxic as overnight?

【在 j****x 的大作中提到】

: 很简单，就是染毒后细胞培养板在2000rpm（800g？）32度/37度下离心1-2小时，具体
: 的条件参数根据不用的细胞可能需要调整

j*x2011-11-01 07:11

15 楼

without，因为之后并不换液啊。对你的情况先尝试不加polybrene吧，效率可能会降低
，但因为毒性问题也不得不这么尝试一下，没准运气好。假如效率显著降低没法用，就
再试试spin infection with polybrene，然后孵育4-6小时再换液，这样比过夜强点

【在 L*******e 的大作中提到】

: with polybrene? or without? I checked some websites, most people still use
: polybrene. Do you use it in your case? I guess 1 or 2 hrs incubation of
: polybrene is not as toxic as overnight?

L*e2011-11-01 07:11

16 楼

Thanks SO MUCH. You have been very helpful. Good luck with your experiments/
career. I will update you later. : )

【在 j****x 的大作中提到】

: without，因为之后并不换液啊。对你的情况先尝试不加polybrene吧，效率可能会降低
: ，但因为毒性问题也不得不这么尝试一下，没准运气好。假如效率显著降低没法用，就
: 再试试spin infection with polybrene，然后孵育4-6小时再换液，这样比过夜强点

a*d2011-11-01 07:11

17 楼

That's what I normally do with primary neuronal cells (10 MOI).

【在 L*******e 的大作中提到】

: Do you mean that I should add the virus directly?
:
: down