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gateway克隆的问题
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gateway克隆的问题# Biology - 生物学
s*d
1 楼
PD: 10/30/2007
RD: 11/14/2011
FP: done on 12/15/2011
EAD: 1/23/2012
Center: TSC
Finally,
Card/ Document Production
On February 11, 2012, we ordered production of your new card. Please allow
30 days for your card to be mailed to you.
散尽包子，今天先发50个，等收到卡再发剩下的。祝大家周末愉快，革命早日成功！
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L*h
2 楼
有特色 有气质
有颜值 有身材
气质很文艺很欧洲，
身材非常feminine,
最近几年看惯了肌肉女，突然换成这个觉得好清新，线条不太肌肉不太瘦不太肥，有曲
线又不夸张很自然
rogue nation那个瑞典女就白瞎了欧洲背景了，练成了一个打女，没气质了
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r*y
3 楼
先是克隆到pENTR里面，有两个觉得对 可是测序后发现给插反了，是不是还得重新来过
，这样克隆到destination里面就不成了吧？或者说根本无法克隆到destination
vertor里面？我的片断3.5 kb。前几天的2 kb的没反差问题。。。
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u*e
4 楼
chi
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u*a
5 楼
别人是有气质的打女...

【在 L*********h 的大作中提到】
: 有特色 有气质
: 有颜值 有身材
: 气质很文艺很欧洲，
: 身材非常feminine,
: 最近几年看惯了肌肉女，突然换成这个觉得好清新，线条不太肌肉不太瘦不太肥，有曲
: 线又不夸张很自然
: rogue nation那个瑞典女就白瞎了欧洲背景了，练成了一个打女，没气质了
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c*g
6 楼
1. use pENTR/D vector, it has direction preference.
2. wrong direction can still be cloned into destination vector, however,
your gene of interest would be expressed 3' to 5'.
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G*r
7 楼
恭喜
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k*r
8 楼
据说在Blue Is the Warmest Color有裸戏，u r 维尔康姆。
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z*h
9 楼
try this new technology -- Simple Cloning.
You, C., X.-Z. Zhang, and Y.-H. P. Zhang. 2012. Simple Cloning: direct
transformation of PCR product (DNA multimer) to Escherichia coli and
Bacillus subtilis. Appl. Environ. Microbiol.:doi:10.1128/AEM.07105-07111.
Abstract
We developed a general restriction enzyme-free and ligase-free method for
subcloning up to three DNA fragments into any location of a plasmid. The DNA
multimer generated by prolonged overlap extension PCR was directly
transformed in Escherichia coli [e.g., TOP10, DH5α, JM109, BL21(DE3)] and
Bacillus subtilis for obtaining chimeric plasmids.
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c*d
10 楼
gx
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r*e
11 楼
顶多就一girl next door，谈不上美女。
007上的大妈，年轻时可是个美女。

【在 L*********h 的大作中提到】
: 有特色 有气质
: 有颜值 有身材
: 气质很文艺很欧洲，
: 身材非常feminine,
: 最近几年看惯了肌肉女，突然换成这个觉得好清新，线条不太肌肉不太瘦不太肥，有曲
: 线又不夸张很自然
: rogue nation那个瑞典女就白瞎了欧洲背景了，练成了一个打女，没气质了
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g*5
12 楼
would you pls give me a copy? uc system can't open it.
pls mail to g*******[email protected], thx a lot.

DNA

【在 z*h 的大作中提到】
: try this new technology -- Simple Cloning.
: You, C., X.-Z. Zhang, and Y.-H. P. Zhang. 2012. Simple Cloning: direct
: transformation of PCR product (DNA multimer) to Escherichia coli and
: Bacillus subtilis. Appl. Environ. Microbiol.:doi:10.1128/AEM.07105-07111.
: Abstract
: We developed a general restriction enzyme-free and ligase-free method for
: subcloning up to three DNA fragments into any location of a plasmid. The DNA
: multimer generated by prolonged overlap extension PCR was directly
: transformed in Escherichia coli [e.g., TOP10, DH5α, JM109, BL21(DE3)] and
: Bacillus subtilis for obtaining chimeric plasmids.
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E*n
13 楼
chi
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L*h
14 楼
胜在年轻
是Daniel Craig上任以来最嫩的邦女郎吧，其她的各个前女友都是至少35+的样子或者
很显老。
最后抱着美人踏红尘离去的样子真是老牛吃嫩草啊，看来男人还是喜欢年轻的 -__-

【在 r*********e 的大作中提到】
: 顶多就一girl next door，谈不上美女。
: 007上的大妈，年轻时可是个美女。
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s*s
15 楼
谁有这个paper？我连不上
不过好像是VT的，不敢学啊

DNA

【在 z*h 的大作中提到】
: try this new technology -- Simple Cloning.
: You, C., X.-Z. Zhang, and Y.-H. P. Zhang. 2012. Simple Cloning: direct
: transformation of PCR product (DNA multimer) to Escherichia coli and
: Bacillus subtilis. Appl. Environ. Microbiol.:doi:10.1128/AEM.07105-07111.
: Abstract
: We developed a general restriction enzyme-free and ligase-free method for
: subcloning up to three DNA fragments into any location of a plasmid. The DNA
: multimer generated by prolonged overlap extension PCR was directly
: transformed in Escherichia coli [e.g., TOP10, DH5α, JM109, BL21(DE3)] and
: Bacillus subtilis for obtaining chimeric plasmids.
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B*k
16 楼
恭喜

【在 s*******d 的大作中提到】
: PD: 10/30/2007
: RD: 11/14/2011
: FP: done on 12/15/2011
: EAD: 1/23/2012
: Center: TSC
: Finally,
: Card/ Document Production
: On February 11, 2012, we ordered production of your new card. Please allow
: 30 days for your card to be mailed to you.
: 散尽包子，今天先发50个，等收到卡再发剩下的。祝大家周末愉快，革命早日成功！
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k*r
17 楼
都30了，看上去嫩而已，皇家赌场的eva green当时才26，量子里那个应该也比这一部
的要年轻。

【在 L*********h 的大作中提到】
: 胜在年轻
: 是Daniel Craig上任以来最嫩的邦女郎吧，其她的各个前女友都是至少35+的样子或者
: 很显老。
: 最后抱着美人踏红尘离去的样子真是老牛吃嫩草啊，看来男人还是喜欢年轻的 -__-
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s*a
18 楼
VT 是什么？

【在 s******s 的大作中提到】
: 谁有这个paper？我连不上
: 不过好像是VT的，不敢学啊
:
: DNA
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D*6
19 楼
cong
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e*i
20 楼

不好看。下半身好。上半身不行

【在 L*********h 的大作中提到】
: 有特色 有气质
: 有颜值 有身材
: 气质很文艺很欧洲，
: 身材非常feminine,
: 最近几年看惯了肌肉女，突然换成这个觉得好清新，线条不太肌肉不太瘦不太肥，有曲
: 线又不夸张很自然
: rogue nation那个瑞典女就白瞎了欧洲背景了，练成了一个打女，没气质了
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A*e
21 楼
zan
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m*y
22 楼
Léa Seydoux这种大过double D的上半身都不行你要求太高了。。。

【在 e****i 的大作中提到】
:
: 不好看。下半身好。上半身不行
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p*u
23 楼
恭喜恭喜
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l*z
24 楼
长的还行吧, 但觉得算不上大美女吧. 我觉得Famke(年轻时)就比她好看阿.

【在 m*******y 的大作中提到】
: Léa Seydoux这种大过double D的上半身都不行你要求太高了。。。
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M*U
25 楼
GXGX
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e*e
26 楼
看片的时候没觉得很美，看完也忘了长什么样了，完全没留下任何印象
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l*o
27 楼
gx
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S*i
28 楼
好看，尤其是那双兰眼睛
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d*e
29 楼
祝贺

【在 s*******d 的大作中提到】
: PD: 10/30/2007
: RD: 11/14/2011
: FP: done on 12/15/2011
: EAD: 1/23/2012
: Center: TSC
: Finally,
: Card/ Document Production
: On February 11, 2012, we ordered production of your new card. Please allow
: 30 days for your card to be mailed to you.
: 散尽包子，今天先发50个，等收到卡再发剩下的。祝大家周末愉快，革命早日成功！
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e*i
30 楼

你看电影了没啊？那能有dd 吗？我刚查了32b
下次记着看电影带眼镜

【在 m*******y 的大作中提到】
: Léa Seydoux这种大过double D的上半身都不行你要求太高了。。。
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h*7
31 楼
恭喜恭喜，吃包子！
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e*i
32 楼

脸的线条很硬，明显的多边形
版上有人说dd.不知道怎么看的，是32b
这是邦德女郎里比较丑的一个

【在 L*********h 的大作中提到】
: 有特色 有气质
: 有颜值 有身材
: 气质很文艺很欧洲，
: 身材非常feminine,
: 最近几年看惯了肌肉女，突然换成这个觉得好清新，线条不太肌肉不太瘦不太肥，有曲
: 线又不夸张很自然
: rogue nation那个瑞典女就白瞎了欧洲背景了，练成了一个打女，没气质了
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p*a
33 楼
恭喜!
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L*h
34 楼
准确的说是这个电影里拍的很美，
看导演和摄影的功力，
色彩和光很柔和很唯美
其他的Craig bond girls不一定年龄老，都是长相显老，当然bond girls一般都熟女
贝鲁奇被007盯了几眼就nm干柴烈火被上了，堪比bbs 军版wsn YY出来的上床速度 LOL
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m*l
35 楼
gxgx!
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l*d
36 楼
还是苏菲玛索好看
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m*y
37 楼
恭喜恭喜，吃包子！
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L*h
38 楼

这绝对是一代女神
都快忘了

【在 l*****d 的大作中提到】
: 还是苏菲玛索好看
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n*0
39 楼
恭喜恭喜，吃包子！
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t*t
40 楼
不能近看
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w*q
41 楼
恭喜

【在 s*******d 的大作中提到】
: PD: 10/30/2007
: RD: 11/14/2011
: FP: done on 12/15/2011
: EAD: 1/23/2012
: Center: TSC
: Finally,
: Card/ Document Production
: On February 11, 2012, we ordered production of your new card. Please allow
: 30 days for your card to be mailed to you.
: 散尽包子，今天先发50个，等收到卡再发剩下的。祝大家周末愉快，革命早日成功！
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l*d
42 楼
此女演员神态总是一副很鸟的样子，给人感觉其家庭条件很好，家里挺有钱的样子。
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J*y
43 楼
gxgx!
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i*e
44 楼
hehe, indeed, she is from Schlumberger family.

【在 l******d 的大作中提到】
: 此女演员神态总是一副很鸟的样子，给人感觉其家庭条件很好，家里挺有钱的样子。
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c*h
45 楼
gxgx!
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z*a
46 楼
不好看，长相太路人了，根本留不下什么印象
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c*4
47 楼
Gxgx

★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器

【在 s*******d 的大作中提到】
: PD: 10/30/2007
: RD: 11/14/2011
: FP: done on 12/15/2011
: EAD: 1/23/2012
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: Finally,
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m*y
48 楼
blue is the warmest color里目测至少是C+，dd确实夸张了点，B太不可能了，但是躺
着形状也很好实际效果是达到dd的吧。
（或许练打戏缩水了呢最近）

【在 e****i 的大作中提到】
:
: 脸的线条很硬，明显的多边形
: 版上有人说dd.不知道怎么看的，是32b
: 这是邦德女郎里比较丑的一个
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l*o
49 楼
big cong

【在 s*******d 的大作中提到】
: PD: 10/30/2007
: RD: 11/14/2011
: FP: done on 12/15/2011
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m*w
50 楼
一般而且有硬伤，门牙不好看
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B*n
51 楼
re
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m*y
52 楼
Famke确实也好看但不知为何除了golden eye里之外大多不是我的type

【在 l****z 的大作中提到】
: 长的还行吧, 但觉得算不上大美女吧. 我觉得Famke(年轻时)就比她好看阿.
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d*g
53 楼
Congratulations.

【在 s*******d 的大作中提到】
: PD: 10/30/2007
: RD: 11/14/2011
: FP: done on 12/15/2011
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s*n
54 楼
Bond女郎还是早期的那种纯花瓶的好看，90年代后拍的好看的都不多

【在 e****i 的大作中提到】
:
: 脸的线条很硬，明显的多边形
: 版上有人说dd.不知道怎么看的，是32b
: 这是邦德女郎里比较丑的一个
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m*o
55 楼
CONG

【在 s*******d 的大作中提到】
: PD: 10/30/2007
: RD: 11/14/2011
: FP: done on 12/15/2011
: EAD: 1/23/2012
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P*r
56 楼
说这位好看的是不是每怎么看过美女啊，就那个眼开开+大牙缝（sorry，不是攻击生理
缺陷，只是陈述事实），这也和美女的标准差了十万八千里吧。只是感叹Monica
Belluci那完美的肉体也有老去的这一天。
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P*Y
57 楼
cons! baozi

【在 s*******d 的大作中提到】
: PD: 10/30/2007
: RD: 11/14/2011
: FP: done on 12/15/2011
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g*5
58 楼
虽然牙齿有点不齐，最丑的一代帮女，
但是有邻家女的feel，还行
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k*e
59 楼
cong
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l*z
60 楼
打扮的问题.
她打扮的比较妖冶的时候很好看.
但她演的几个电影里面(象deep rising) 都不是那么打扮.

【在 m*******y 的大作中提到】
: Famke确实也好看但不知为何除了golden eye里之外大多不是我的type
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w*b
61 楼
BIG CONG

【在 s*******d 的大作中提到】
: PD: 10/30/2007
: RD: 11/14/2011
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: On February 11, 2012, we ordered production of your new card. Please allow
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z*a
62 楼
多少人心目中的女神啊，就停留在她最美的时刻不好吗，为啥要来接这片，戏份不多还
颠覆了女神的形象

【在 P*****r 的大作中提到】
: 说这位好看的是不是每怎么看过美女啊，就那个眼开开+大牙缝（sorry，不是攻击生理
: 缺陷，只是陈述事实），这也和美女的标准差了十万八千里吧。只是感叹Monica
: Belluci那完美的肉体也有老去的这一天。
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b*i
63 楼
GXGX!
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Z*o
65 楼
con
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a*g
66 楼
good

【在 L*********h 的大作中提到】
: 有特色 有气质
: 有颜值 有身材
: 气质很文艺很欧洲，
: 身材非常feminine,
: 最近几年看惯了肌肉女，突然换成这个觉得好清新，线条不太肌肉不太瘦不太肥，有曲
: 线又不夸张很自然
: rogue nation那个瑞典女就白瞎了欧洲背景了，练成了一个打女，没气质了
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s*3
67 楼
cong
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a*n
68 楼
这姑娘最近几年长相气质有点发展歪了。记得在Inglourious Basterds里演农夫的女儿
的时候，还是很清纯可爱的。虽然那时候只是个出场不到一分钟的小花瓶。这点有点象
今年MI4里片头那个小美女特工。
这集007里大反派对小美女有句台词，说他去看她父亲的时候见过她小时候。当时一听
就想这不说的就是Inglourious Basterds里那段经典表演么。
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x*1
69 楼
恭喜！！

【在 s*******d 的大作中提到】
: PD: 10/30/2007
: RD: 11/14/2011
: FP: done on 12/15/2011
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: Center: TSC
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k*r
70 楼
就一个花瓶。本来剧本设计得会开枪，结果除了乱开机枪，就没发展了，又成了个007
中的纯花瓶。丫到底有啥用？完全是可有可无的角色。
要说惊艳，还不如她在碟中谍扮演的俄国杀手惊艳。
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a*h
71 楼
gxgx
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x*u
72 楼
恭喜！

★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器

【在 s*******d 的大作中提到】
: PD: 10/30/2007
: RD: 11/14/2011
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N*L
73 楼
con
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f*u
74 楼
恭喜
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f*u
75 楼
恭喜
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q*1
76 楼
cong

【在 s*******d 的大作中提到】
: PD: 10/30/2007
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77 楼
恭喜
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a*1
78 楼
恭喜恭喜
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b*1
79 楼
恭喜恭喜

【在 s*******d 的大作中提到】
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B*s
80 楼
恭喜恭喜
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s*b
81 楼
Gx gx
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k*e
82 楼
gongxi!
Baozi!
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l*u
83 楼
恭喜恭喜
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b*1
84 楼
gxgx!
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z*q
85 楼
祝贺

【在 s*******d 的大作中提到】
: PD: 10/30/2007
: RD: 11/14/2011
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t*t
86 楼
re

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n*e
87 楼
cong!baozi!
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l*t
88 楼
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a*8
89 楼
恭喜

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S*a
90 楼
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l*k
91 楼
chi

【在 s*******d 的大作中提到】
: PD: 10/30/2007
: RD: 11/14/2011
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: 散尽包子，今天先发50个，等收到卡再发剩下的。祝大家周末愉快，革命早日成功！
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92 楼
恭喜

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Z*i
93 楼
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【在 s*******d 的大作中提到】
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: Finally,
: Card/ Document Production
: On February 11, 2012, we ordered production of your new card. Please allow
: 30 days for your card to be mailed to you.
: 散尽包子，今天先发50个，等收到卡再发剩下的。祝大家周末愉快，革命早日成功！
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r*a
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chi

【在 s*******d 的大作中提到】
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: 散尽包子，今天先发50个，等收到卡再发剩下的。祝大家周末愉快，革命早日成功！
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C*X
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gxgx
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C*X
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gxgx
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y*n
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Congratulations!
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s*d
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Congratulations
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c*d
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cong
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gongxi

【在 s*******d 的大作中提到】
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Cong!
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恭喜
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cong
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恭喜

【在 c*h 的大作中提到】
: gxgx!
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r*s
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gx
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h*a
106 楼
cong, wish all the others, including mine, will be coming soon.
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z*o
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gxgx!!!
pai
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V*y
108 楼
Re
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H*O
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gxgx!
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恭喜
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恭喜
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恭喜
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B*I
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cong
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p*o
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GX
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恭喜
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cong
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祝贺
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S*8
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GX!

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恭喜
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cong!

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congrats!

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cong
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Cong!
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cong

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gxgx!
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GXGX!

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o*e
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恭喜
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Congrats!
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Cong!

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gx
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Big cong!

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恭喜恭喜!!

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恭喜!
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F*a
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l*e
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con
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i*1
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包子
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c*1
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re
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138 楼
gx

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gx
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s*g
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GX!
Baozi!

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Cong

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142 楼
gx
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q*y
143 楼
恭喜~
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f*3
144 楼

gxgx

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n*e
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恭喜

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gxgx
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x*g
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pai baozi.

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gx
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s*7
149 楼
恭喜
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i*e
150 楼
COOL.
Congrats and enjoy your new life...
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f*e
151 楼
con

【在 i*********e 的大作中提到】
: COOL.
: Congrats and enjoy your new life...
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m*l
152 楼
gxgx chi

【在 i*********e 的大作中提到】
: COOL.
: Congrats and enjoy your new life...
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E*H
153 楼
con
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E*H
154 楼
con
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c*n
155 楼
conga~祝福
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b*i
156 楼
GXGX
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f*g
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cong
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h*7
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gx
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s*k
159 楼
cong

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big congs! so fast
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a*n
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gx
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b*A
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gxgx
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a*i
163 楼
Chi

50个包子已发，谢谢大家！----------PD: 10/30/2007RD: 11/14/2011FP: done on 12
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cong!

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Congs! Pai baozi,xiexie!

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gxgx

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A*r
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gx!
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x*i
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: 散尽包子，今天先发50个，等收到卡再发剩下的。祝大家周末愉快，革命早日成功！
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s*d
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50个包子已发，谢谢大家！
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散尽包子，今天先发50个，等收到卡再发剩下的。祝大家周末愉快，革命早日成功！
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