g*j
2 楼
电转和普通转化都不行
有啥指导？
有啥指导？
m*i
3 楼
出租的话关键是地点和租金便宜
m*z
4 楼
B subtilis? it can be natually competent in some specialized medium when it
reaches certain OD. we routinely transform it with plasmid, PCR product or
chromosomal DNA
【在 g***j 的大作中提到】
: 电转和普通转化都不行
: 有啥指导？
reaches certain OD. we routinely transform it with plasmid, PCR product or
chromosomal DNA
【在 g***j 的大作中提到】
: 电转和普通转化都不行
: 有啥指导？
g*j
5 楼
yes,it is B.S 168
Can you send me a protocol？
it
【在 m**z 的大作中提到】
: B subtilis? it can be natually competent in some specialized medium when it
: reaches certain OD. we routinely transform it with plasmid, PCR product or
: chromosomal DNA
Can you send me a protocol？
it
【在 m**z 的大作中提到】
: B subtilis? it can be natually competent in some specialized medium when it
: reaches certain OD. we routinely transform it with plasmid, PCR product or
: chromosomal DNA
m*z
6 楼
i have a scanned copy of the protocol. I can send you an email if you give
me your email address
【在 g***j 的大作中提到】
: yes,it is B.S 168
: Can you send me a protocol？
:
: it
me your email address
【在 g***j 的大作中提到】
: yes,it is B.S 168
: Can you send me a protocol？
:
: it
g*j
7 楼
Thanks a lot.
please send to s*****[email protected]
【在 m**z 的大作中提到】
: i have a scanned copy of the protocol. I can send you an email if you give
: me your email address
please send to s*****[email protected]
【在 m**z 的大作中提到】
: i have a scanned copy of the protocol. I can send you an email if you give
: me your email address
m*z
8 楼
sent
【在 g***j 的大作中提到】
: Thanks a lot.
: please send to s*****[email protected]
【在 g***j 的大作中提到】
: Thanks a lot.
: please send to s*****[email protected]
l*1
9 楼
Just curiously,
it looks your avoided Oct 01 (your born date) as your mail address,
so used below mail address even that 09 31 is just a metaphysical date,
what happened when you applied your gmail address?
szy1001(at)gamil.com already be took by other stuff?
【在 g***j 的大作中提到】
: Thanks a lot.
: please send to s*****[email protected]
it looks your avoided Oct 01 (your born date) as your mail address,
so used below mail address even that 09 31 is just a metaphysical date,
what happened when you applied your gmail address?
szy1001(at)gamil.com already be took by other stuff?
【在 g***j 的大作中提到】
: Thanks a lot.
: please send to s*****[email protected]
g*j
10 楼
why do you think my birthday is 1001?
【在 l**********1 的大作中提到】
: Just curiously,
: it looks your avoided Oct 01 (your born date) as your mail address,
: so used below mail address even that 09 31 is just a metaphysical date,
: what happened when you applied your gmail address?
: szy1001(at)gamil.com already be took by other stuff?
【在 l**********1 的大作中提到】
: Just curiously,
: it looks your avoided Oct 01 (your born date) as your mail address,
: so used below mail address even that 09 31 is just a metaphysical date,
: what happened when you applied your gmail address?
: szy1001(at)gamil.com already be took by other stuff?
l*1
11 楼
just 6th Cognitive feelings
from your that mail address and some similar my friends their same style
address.
【在 g***j 的大作中提到】
: why do you think my birthday is 1001?
from your that mail address and some similar my friends their same style
address.
【在 g***j 的大作中提到】
: why do you think my birthday is 1001?
n*t
12 楼
FYI:
http://www.bacillusbbs.com/
Bacillus subtilis strain with inducible super-competence.
Zhang, X. Z. and Y. H. Zhang. 2011. Simple, fast and high-efficiency
transformation system for directed evolution of cellulase in Bacillus
subtilis. Microb. Biotechnol. 4:98-105. PMID: 21255377 read online
枯草杆菌感受态细胞的制备及转化
1) 将菌种接种在LB平板上37 ℃培养过夜。
2) 用接种环接一环菌苔于5mL GM I 溶液，在30 ℃慢摇床（125 r/min）振荡培养
过夜。
3) 次日取2 mL转接到18 mL GM I 中，37 ℃快摇床（250 r/min）培养3.5 h。
4) 再取10 mL上一步骤的培养液转接到90 mL GM II 中，37 ℃慢摇床培养90 min后
5,000 g，10 min离心收集菌体。
5) 用10 mL原培养液上清液轻轻悬浮菌体，悬浮后的菌体即为感受态细胞可以直接
用来转化。
6) 感受态细胞的保存：加30%的灭菌甘油至终浓度为10%，混匀后分装到离心管中（
0.5 mL/tube），随即放到-70 ℃保存。
7) 转化时取出离心管，放在45 ℃水浴中溶化，然后在0.5 mL菌液中加入适量DNA（
～1 ug/ml）。
8) 于37 ℃振荡（200 r/min）保温30 min后涂布相应抗性平板，再在37 ℃培养过
夜，次日检查和验证转化子。
枯草杆菌普通化学感受态细胞制备用试剂
[1] 10×最低盐溶液：K2HPO4 70 g，KH2PO4 30 g，（NH4）2SO4 10 g，（
Na3C6H5O7•2H2O）5 g，MgSO4•7H2O 1 g，在蒸馏水中依次溶解，加水至
500 mL。
[2] 氨基酸溶液（根据不同菌株的基因缺陷型准备）：10 mg/mL，贮于棕色瓶内，
113℃灭菌30 min，用黑纸包裹。
[3] GM I溶液：1×最低盐溶液95.6 mL，20%葡萄糖2.5 mL，5%水解酪蛋白0.4 mL，
10%酵母汁1 mL，10 mg/mL氨基酸溶液0.5 mL（50 μg/mL）。
[4] GM I溶液：1×最低盐溶液96.98 mL，20%葡萄糖2.5 mL，5%水解酪蛋白0.08 mL
，10%酵母汁0.04 mL，1 M MgCl2 0.25 mL（2.5 mM），1 M CaCl2 0.05 mL（0.5 mM）
，10 mg/mL氨基酸溶液0.1 mL（5 μg/mL）。
【在 g***j 的大作中提到】
: 电转和普通转化都不行
: 有啥指导？
http://www.bacillusbbs.com/
Bacillus subtilis strain with inducible super-competence.
Zhang, X. Z. and Y. H. Zhang. 2011. Simple, fast and high-efficiency
transformation system for directed evolution of cellulase in Bacillus
subtilis. Microb. Biotechnol. 4:98-105. PMID: 21255377 read online
枯草杆菌感受态细胞的制备及转化
1) 将菌种接种在LB平板上37 ℃培养过夜。
2) 用接种环接一环菌苔于5mL GM I 溶液，在30 ℃慢摇床（125 r/min）振荡培养
过夜。
3) 次日取2 mL转接到18 mL GM I 中，37 ℃快摇床（250 r/min）培养3.5 h。
4) 再取10 mL上一步骤的培养液转接到90 mL GM II 中，37 ℃慢摇床培养90 min后
5,000 g，10 min离心收集菌体。
5) 用10 mL原培养液上清液轻轻悬浮菌体，悬浮后的菌体即为感受态细胞可以直接
用来转化。
6) 感受态细胞的保存：加30%的灭菌甘油至终浓度为10%，混匀后分装到离心管中（
0.5 mL/tube），随即放到-70 ℃保存。
7) 转化时取出离心管，放在45 ℃水浴中溶化，然后在0.5 mL菌液中加入适量DNA（
～1 ug/ml）。
8) 于37 ℃振荡（200 r/min）保温30 min后涂布相应抗性平板，再在37 ℃培养过
夜，次日检查和验证转化子。
枯草杆菌普通化学感受态细胞制备用试剂
[1] 10×最低盐溶液：K2HPO4 70 g，KH2PO4 30 g，（NH4）2SO4 10 g，（
Na3C6H5O7•2H2O）5 g，MgSO4•7H2O 1 g，在蒸馏水中依次溶解，加水至
500 mL。
[2] 氨基酸溶液（根据不同菌株的基因缺陷型准备）：10 mg/mL，贮于棕色瓶内，
113℃灭菌30 min，用黑纸包裹。
[3] GM I溶液：1×最低盐溶液95.6 mL，20%葡萄糖2.5 mL，5%水解酪蛋白0.4 mL，
10%酵母汁1 mL，10 mg/mL氨基酸溶液0.5 mL（50 μg/mL）。
[4] GM I溶液：1×最低盐溶液96.98 mL，20%葡萄糖2.5 mL，5%水解酪蛋白0.08 mL
，10%酵母汁0.04 mL，1 M MgCl2 0.25 mL（2.5 mM），1 M CaCl2 0.05 mL（0.5 mM）
，10 mg/mL氨基酸溶液0.1 mL（5 μg/mL）。
【在 g***j 的大作中提到】
: 电转和普通转化都不行
: 有啥指导？
相关阅读
nyouyou好自负啊求助学长学姐帮忙简略的读读这篇cytoskeleton 的paper~紧急求助，下周Skype面试干燥后的质粒常温下能保存多久？求助， 请问哪位战友有 pcDNA dest40 （gateway) ，可以寄我一点吗？求助个qPCR 问题：载体有扩增, 基因组DNA上没扩增要审稿的可以先在这里登记很有趣的招人广告北大教授饶毅：舆论压力下转基因若在中国死掉将成笑话爱在受精前这活真不是人干的看大家8的这么高兴 那有没有人有这个人的8卦？Does anyone has access to paper: J Neurosci Methods. 1991 Mar;37(1):15-26.美股生物医药板块消息早报（01-03-13）寻找有Bioinformatics和编程经验的同学 编写软件 有报酬Review之后还要editorial discussion是什么意思搅屎棍看来还是有用的美国人内斗比老中厉害多了请问在in vitro里有啥好方法测量肿瘤细胞的fatty acid metabolism和fatty acid oxidation?50%溶液如何配置