b*e
2 楼
当初跟他在一起，也是他把我堵在图书馆里，堵在家门口，因为是考试周，我为了让他
不要来再烦我才答应的。可是说实话，我不怎么喜欢他，而且他之前还对我做了很多不
好的事情，他的说辞就是那个做不好事情的人不是他，他是糊涂了，现在他对我是真的
，是好的。
我以前喜欢过他一点点，可是后来就没了，还很讨厌他，尤其是他就像小孩子一样不停
跟你讲道理，让你说你错了，在他看来，他做什么错了，都是小事，只要我闹，那我就
是坏人，我是要承担错误的那一个，即使事情是他先搞出来的。我常常问他，为什么你
错了你的那些说辞我不能用，他说，因为他不一样，他是好的，只是技术上不对，而我
是坏的，因为我不为他考虑。
苍天啊大地啊，我真的没法跟这样的男人过，我跟他在一起也许是因为懒得找别人了，
可是，不喜欢的就是不喜欢，每次跟他说这个，他都自以为是的说我骗自己，我只是找
借口闹，喜欢他却又闹脾气不跟他好好在一起而已。
真的很累。我都不敢回家，不带手机了。
这样的男人，怎么才能让他分手啊？
不要来再烦我才答应的。可是说实话，我不怎么喜欢他，而且他之前还对我做了很多不
好的事情，他的说辞就是那个做不好事情的人不是他，他是糊涂了，现在他对我是真的
，是好的。
我以前喜欢过他一点点，可是后来就没了，还很讨厌他，尤其是他就像小孩子一样不停
跟你讲道理，让你说你错了，在他看来，他做什么错了，都是小事，只要我闹，那我就
是坏人，我是要承担错误的那一个，即使事情是他先搞出来的。我常常问他，为什么你
错了你的那些说辞我不能用，他说，因为他不一样，他是好的，只是技术上不对，而我
是坏的，因为我不为他考虑。
苍天啊大地啊，我真的没法跟这样的男人过，我跟他在一起也许是因为懒得找别人了，
可是，不喜欢的就是不喜欢，每次跟他说这个，他都自以为是的说我骗自己，我只是找
借口闹，喜欢他却又闹脾气不跟他好好在一起而已。
真的很累。我都不敢回家，不带手机了。
这样的男人，怎么才能让他分手啊？
i*i
3 楼
现在手里的一个课题，想继续做一些生化方面的研究。
已知蛋白E可以和我的目的蛋白L结合。基于各种实验中遇到的痛苦经验，以及对蛋白L
的序列结构分析（存在大量磷酸化motif），我认为蛋白E与蛋白L的结合可以稳定蛋白L
。但是随着时间的推移，加诸其他的外界条件，这个L仍然会被磷酸化。
现在我想证明
1）蛋白E与L的结合，增加了L的稳定性（已知E非常稳定）
2）这种稳定性来源于阻止了某些位点的磷酸化
3）如何证明某一个pathway（AKT or ERK or ...)是负责这个蛋白磷酸化的。
请问版上的生化牛人，怎么设计一些实验来证明呢？
已知蛋白E可以和我的目的蛋白L结合。基于各种实验中遇到的痛苦经验，以及对蛋白L
的序列结构分析（存在大量磷酸化motif），我认为蛋白E与蛋白L的结合可以稳定蛋白L
。但是随着时间的推移，加诸其他的外界条件，这个L仍然会被磷酸化。
现在我想证明
1）蛋白E与L的结合，增加了L的稳定性（已知E非常稳定）
2）这种稳定性来源于阻止了某些位点的磷酸化
3）如何证明某一个pathway（AKT or ERK or ...)是负责这个蛋白磷酸化的。
请问版上的生化牛人，怎么设计一些实验来证明呢？
r*e
4 楼
very nice ~~
i*n
5 楼
你先找好备胎，然后他就自动走人了
a*x
6 楼
Just my two cents, not in the field...
1) pulse chase (fluore or isotope) or CHX treatment or SNAP tag with or
without over-expression of E (or knock-down)
2) Phospho versus dephospho mimic mutation; If the sites are not clear, try
to look for phospho change by over-expression of E (or knock-down)
3) specific inhibitors
1) pulse chase (fluore or isotope) or CHX treatment or SNAP tag with or
without over-expression of E (or knock-down)
2) Phospho versus dephospho mimic mutation; If the sites are not clear, try
to look for phospho change by over-expression of E (or knock-down)
3) specific inhibitors
j*9
7 楼
应该是男人站出来承认错误吧。不管女人有没有错，这点男人的气度还是应该有的。
不过LZ也是，当初不喜欢人家干嘛要答应在一起呢?
这样弄得越来越不好收拾。
就果断分手吧。告诉他为什么会和他在一起的一切原因。
然后果断点就好了
不过LZ也是，当初不喜欢人家干嘛要答应在一起呢?
这样弄得越来越不好收拾。
就果断分手吧。告诉他为什么会和他在一起的一切原因。
然后果断点就好了
o*d
8 楼
1， 表达E，L ，E＋L，看看有E的情况下L是否更稳定（首先假设E和L在293cell里是能
结合的。而且你需要很多control，来证明这个由于蛋白的稳定性造成的）。也可以用E
的KO 或KD细胞来看L是否更不稳定。
2，突变你认为的L上的磷酸化位点，重复实验1，
3，先查一下有没有人报道L被AKT 或ERK磷酸化。然后看看AKT／ERK KO （KD） cell里
L的磷酸化是否降低（如果有磷酸化抗体的话）。还可以看L是否更稳定。
L
白L
【在 i*****i 的大作中提到】
: 现在手里的一个课题，想继续做一些生化方面的研究。
: 已知蛋白E可以和我的目的蛋白L结合。基于各种实验中遇到的痛苦经验，以及对蛋白L
: 的序列结构分析（存在大量磷酸化motif），我认为蛋白E与蛋白L的结合可以稳定蛋白L
: 。但是随着时间的推移，加诸其他的外界条件，这个L仍然会被磷酸化。
: 现在我想证明
: 1）蛋白E与L的结合，增加了L的稳定性（已知E非常稳定）
: 2）这种稳定性来源于阻止了某些位点的磷酸化
: 3）如何证明某一个pathway（AKT or ERK or ...)是负责这个蛋白磷酸化的。
: 请问版上的生化牛人，怎么设计一些实验来证明呢？
结合的。而且你需要很多control，来证明这个由于蛋白的稳定性造成的）。也可以用E
的KO 或KD细胞来看L是否更不稳定。
2，突变你认为的L上的磷酸化位点，重复实验1，
3，先查一下有没有人报道L被AKT 或ERK磷酸化。然后看看AKT／ERK KO （KD） cell里
L的磷酸化是否降低（如果有磷酸化抗体的话）。还可以看L是否更稳定。
L
白L
【在 i*****i 的大作中提到】
: 现在手里的一个课题，想继续做一些生化方面的研究。
: 已知蛋白E可以和我的目的蛋白L结合。基于各种实验中遇到的痛苦经验，以及对蛋白L
: 的序列结构分析（存在大量磷酸化motif），我认为蛋白E与蛋白L的结合可以稳定蛋白L
: 。但是随着时间的推移，加诸其他的外界条件，这个L仍然会被磷酸化。
: 现在我想证明
: 1）蛋白E与L的结合，增加了L的稳定性（已知E非常稳定）
: 2）这种稳定性来源于阻止了某些位点的磷酸化
: 3）如何证明某一个pathway（AKT or ERK or ...)是负责这个蛋白磷酸化的。
: 请问版上的生化牛人，怎么设计一些实验来证明呢？
I*e
9 楼
Who cares what he says!!! If you are not even planning on being with him,
just leave him. There's no need to reason with him. Why you can't use the
excuses he used, or how he complains that you are at fault....those are
completely irrelevant. COMPLETELY.
【在 b*******e 的大作中提到】
: 当初跟他在一起，也是他把我堵在图书馆里，堵在家门口，因为是考试周，我为了让他
: 不要来再烦我才答应的。可是说实话，我不怎么喜欢他，而且他之前还对我做了很多不
: 好的事情，他的说辞就是那个做不好事情的人不是他，他是糊涂了，现在他对我是真的
: ，是好的。
: 我以前喜欢过他一点点，可是后来就没了，还很讨厌他，尤其是他就像小孩子一样不停
: 跟你讲道理，让你说你错了，在他看来，他做什么错了，都是小事，只要我闹，那我就
: 是坏人，我是要承担错误的那一个，即使事情是他先搞出来的。我常常问他，为什么你
: 错了你的那些说辞我不能用，他说，因为他不一样，他是好的，只是技术上不对，而我
: 是坏的，因为我不为他考虑。
: 苍天啊大地啊，我真的没法跟这样的男人过，我跟他在一起也许是因为懒得找别人了，
just leave him. There's no need to reason with him. Why you can't use the
excuses he used, or how he complains that you are at fault....those are
completely irrelevant. COMPLETELY.
【在 b*******e 的大作中提到】
: 当初跟他在一起，也是他把我堵在图书馆里，堵在家门口，因为是考试周，我为了让他
: 不要来再烦我才答应的。可是说实话，我不怎么喜欢他，而且他之前还对我做了很多不
: 好的事情，他的说辞就是那个做不好事情的人不是他，他是糊涂了，现在他对我是真的
: ，是好的。
: 我以前喜欢过他一点点，可是后来就没了，还很讨厌他，尤其是他就像小孩子一样不停
: 跟你讲道理，让你说你错了，在他看来，他做什么错了，都是小事，只要我闹，那我就
: 是坏人，我是要承担错误的那一个，即使事情是他先搞出来的。我常常问他，为什么你
: 错了你的那些说辞我不能用，他说，因为他不一样，他是好的，只是技术上不对，而我
: 是坏的，因为我不为他考虑。
: 苍天啊大地啊，我真的没法跟这样的男人过，我跟他在一起也许是因为懒得找别人了，
g*5
10 楼
1.大量磷酸化motif..
你先比较下同源蛋白，做个clustalw
先研究保守的。
2.L truncate form，看那一段和E结合。磷酸化位点应该在结合的那段上
pulse chase (fluore or isotope)， fluore如何做？谢谢。
你先比较下同源蛋白，做个clustalw
先研究保守的。
2.L truncate form，看那一段和E结合。磷酸化位点应该在结合的那段上
pulse chase (fluore or isotope)， fluore如何做？谢谢。
l*h
11 楼
你到处跟别人说，跟他好了以后才发现他是GAY。
【在 b*******e 的大作中提到】
: 当初跟他在一起，也是他把我堵在图书馆里，堵在家门口，因为是考试周，我为了让他
: 不要来再烦我才答应的。可是说实话，我不怎么喜欢他，而且他之前还对我做了很多不
: 好的事情，他的说辞就是那个做不好事情的人不是他，他是糊涂了，现在他对我是真的
: ，是好的。
: 我以前喜欢过他一点点，可是后来就没了，还很讨厌他，尤其是他就像小孩子一样不停
: 跟你讲道理，让你说你错了，在他看来，他做什么错了，都是小事，只要我闹，那我就
: 是坏人，我是要承担错误的那一个，即使事情是他先搞出来的。我常常问他，为什么你
: 错了你的那些说辞我不能用，他说，因为他不一样，他是好的，只是技术上不对，而我
: 是坏的，因为我不为他考虑。
: 苍天啊大地啊，我真的没法跟这样的男人过，我跟他在一起也许是因为懒得找别人了，
【在 b*******e 的大作中提到】
: 当初跟他在一起，也是他把我堵在图书馆里，堵在家门口，因为是考试周，我为了让他
: 不要来再烦我才答应的。可是说实话，我不怎么喜欢他，而且他之前还对我做了很多不
: 好的事情，他的说辞就是那个做不好事情的人不是他，他是糊涂了，现在他对我是真的
: ，是好的。
: 我以前喜欢过他一点点，可是后来就没了，还很讨厌他，尤其是他就像小孩子一样不停
: 跟你讲道理，让你说你错了，在他看来，他做什么错了，都是小事，只要我闹，那我就
: 是坏人，我是要承担错误的那一个，即使事情是他先搞出来的。我常常问他，为什么你
: 错了你的那些说辞我不能用，他说，因为他不一样，他是好的，只是技术上不对，而我
: 是坏的，因为我不为他考虑。
: 苍天啊大地啊，我真的没法跟这样的男人过，我跟他在一起也许是因为懒得找别人了，
p*g
12 楼
lol
【在 l****h 的大作中提到】
: 你到处跟别人说，跟他好了以后才发现他是GAY。
【在 l****h 的大作中提到】
: 你到处跟别人说，跟他好了以后才发现他是GAY。
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