r*5
2 楼
乞力马扎罗
乞力马扎罗山
乞力马扎罗山上
乞力马扎罗山上的雪
乞力马扎罗山上的雪化了
乞力马扎罗山上的雪化了水
乞力马扎罗山上的雪化了水留下来
乞力马扎罗山上的雪化了水留下来形成小溪
乞力马扎罗山上的雪化了水留下来形成小溪里面有鱼
乞力马扎罗山上的雪化了水留下来形成小溪里面有鱼和鱼生小鱼
乞力马扎罗山上的雪化了水留下来形成小溪里面有鱼和鱼生小鱼一家人
乞力马扎罗山上的雪化了水留下来形成小溪里面有鱼和鱼生小鱼一家人顺流而下
乞力马扎罗山上的雪化了水留下来形成小溪里面有鱼和鱼生小鱼一家人顺流而下到了撒
哈拉
乞力马扎罗山上的雪化了水留下来形成小溪里面有鱼和鱼生小鱼一家人顺流而下到了撒
哈拉看见斑马
乞力马扎罗山上的雪化了水留下来形成小溪里面有鱼和鱼生小鱼一家人顺流而下到了撒
哈拉看见斑马一家
乞力马扎罗山上的雪化了水留下来形成小溪里面有鱼和鱼生小鱼一家人顺流而下到了撒
哈拉看见斑马一家吃树叶
乞力马扎罗山上的雪化了水留下来形成小溪里面有鱼和鱼生小鱼一家人顺流而下到了撒
哈拉看见斑马一家吃树叶觉得奇怪
乞力马扎罗山
乞力马扎罗山上
乞力马扎罗山上的雪
乞力马扎罗山上的雪化了
乞力马扎罗山上的雪化了水
乞力马扎罗山上的雪化了水留下来
乞力马扎罗山上的雪化了水留下来形成小溪
乞力马扎罗山上的雪化了水留下来形成小溪里面有鱼
乞力马扎罗山上的雪化了水留下来形成小溪里面有鱼和鱼生小鱼
乞力马扎罗山上的雪化了水留下来形成小溪里面有鱼和鱼生小鱼一家人
乞力马扎罗山上的雪化了水留下来形成小溪里面有鱼和鱼生小鱼一家人顺流而下
乞力马扎罗山上的雪化了水留下来形成小溪里面有鱼和鱼生小鱼一家人顺流而下到了撒
哈拉
乞力马扎罗山上的雪化了水留下来形成小溪里面有鱼和鱼生小鱼一家人顺流而下到了撒
哈拉看见斑马
乞力马扎罗山上的雪化了水留下来形成小溪里面有鱼和鱼生小鱼一家人顺流而下到了撒
哈拉看见斑马一家
乞力马扎罗山上的雪化了水留下来形成小溪里面有鱼和鱼生小鱼一家人顺流而下到了撒
哈拉看见斑马一家吃树叶
乞力马扎罗山上的雪化了水留下来形成小溪里面有鱼和鱼生小鱼一家人顺流而下到了撒
哈拉看见斑马一家吃树叶觉得奇怪
W*D
3 楼
那天是个周四，本来约了上午一起去我们小区打网球的。不过前一天的时候，她打电话
过来，说中午要见客户。我早就已经把公司的事挪到了中午以后了，接到电话，多少有
些失落，但也无奈的答应了。过了一会儿，她一定是敏感的觉到了我的惋惜，又打了电
话过来，犹豫的说，其实也能打，不过要借我们家的浴室洗个澡，午饭时可以直接见客
户。咚咚，咚咚，我几乎可以听到自己的心跳声。我几乎可以想到，如果去dreamer发
帖询问她是什么意思，dreamer的回答一定是让我不要禽兽不如。
球，飞来飞去，可我的心思却根本不在了。。。。。。
水，哗哗的响，可我的心思却根本不在了。。。。。。
浴室的门开了
她穿了黑色的露肩裙
正式中透着无比的性感
湿漉漉的长发，垂在一边
她轻轻地搓弄着头发。。。。。。。
我轻轻的走到她身后，伸出手。。。
打开了壁柜，拿出吹风机给她。
吹风机，呜呜呜的响，可我的心思却根本不在了。。。。。。
“谢谢你”她笑吟吟的看着我，眼里充满了温柔的诱惑。
“我要赶紧走了，有点晚了”她紧接着说道，言语里充满了没有诱惑。
该死的梦版，我心里喃喃道。
后来没过几天，版里就开始了一轮关于agent的大战。我想都没想的，也加入了其中。
过来，说中午要见客户。我早就已经把公司的事挪到了中午以后了，接到电话，多少有
些失落，但也无奈的答应了。过了一会儿，她一定是敏感的觉到了我的惋惜，又打了电
话过来，犹豫的说，其实也能打，不过要借我们家的浴室洗个澡，午饭时可以直接见客
户。咚咚，咚咚，我几乎可以听到自己的心跳声。我几乎可以想到，如果去dreamer发
帖询问她是什么意思，dreamer的回答一定是让我不要禽兽不如。
球，飞来飞去，可我的心思却根本不在了。。。。。。
水，哗哗的响，可我的心思却根本不在了。。。。。。
浴室的门开了
她穿了黑色的露肩裙
正式中透着无比的性感
湿漉漉的长发，垂在一边
她轻轻地搓弄着头发。。。。。。。
我轻轻的走到她身后，伸出手。。。
打开了壁柜，拿出吹风机给她。
吹风机，呜呜呜的响，可我的心思却根本不在了。。。。。。
“谢谢你”她笑吟吟的看着我，眼里充满了温柔的诱惑。
“我要赶紧走了，有点晚了”她紧接着说道，言语里充满了没有诱惑。
该死的梦版，我心里喃喃道。
后来没过几天，版里就开始了一轮关于agent的大战。我想都没想的，也加入了其中。
D*y
4 楼
请教高位Chromatin Immunoprecipitation (ChIP)高手，ChIP最后的得到的DNA用PCR来
检测，现在Reviewer要求用Q-PCR检测，我是不是可以用总input的DNA和抗体IP后恢复
的DNA来进行Q-PCR(用一特定primer），然后取两者的Ratio来Normalization作为最终
结果？请问大家是怎么做的呢？感谢！！
检测，现在Reviewer要求用Q-PCR检测，我是不是可以用总input的DNA和抗体IP后恢复
的DNA来进行Q-PCR(用一特定primer），然后取两者的Ratio来Normalization作为最终
结果？请问大家是怎么做的呢？感谢！！
b*s
5 楼
终于在爱版抢到沙发
发信人: bostontennis (bostontennis), 信区: Boston
标 题: Re: [等待]春天的情书2
发信站: BBS 未名空间站 (Thu May 10 07:57:12 2012, 美东)
终于等来第2集了，虽然没有抢到沙发，但还是要支持多情的网球爱好者
楼主用行动证明打网球时约会的好方式，健康而且愉快。帅哥美女如果也想参加，就看
看我们网球俱乐部的信息巴：
https://sites.google.com/site/bostonasiantennisgroup/
发信人: bostontennis (bostontennis), 信区: Boston
标 题: Re: [等待]春天的情书2
发信站: BBS 未名空间站 (Thu May 10 07:57:12 2012, 美东)
终于等来第2集了，虽然没有抢到沙发，但还是要支持多情的网球爱好者
楼主用行动证明打网球时约会的好方式，健康而且愉快。帅哥美女如果也想参加，就看
看我们网球俱乐部的信息巴：
https://sites.google.com/site/bostonasiantennisgroup/
s*t
6 楼
取1%的input
IgG和抗体分别IP后恢复的DNA，加上input的DNA，各自用同一引物做Q-PCR，IgG
control和抗体分别对input做normalization
【在 D*****y 的大作中提到】
: 请教高位Chromatin Immunoprecipitation (ChIP)高手，ChIP最后的得到的DNA用PCR来
: 检测，现在Reviewer要求用Q-PCR检测，我是不是可以用总input的DNA和抗体IP后恢复
: 的DNA来进行Q-PCR(用一特定primer），然后取两者的Ratio来Normalization作为最终
: 结果？请问大家是怎么做的呢？感谢！！
IgG和抗体分别IP后恢复的DNA，加上input的DNA，各自用同一引物做Q-PCR，IgG
control和抗体分别对input做normalization
【在 D*****y 的大作中提到】
: 请教高位Chromatin Immunoprecipitation (ChIP)高手，ChIP最后的得到的DNA用PCR来
: 检测，现在Reviewer要求用Q-PCR检测，我是不是可以用总input的DNA和抗体IP后恢复
: 的DNA来进行Q-PCR(用一特定primer），然后取两者的Ratio来Normalization作为最终
: 结果？请问大家是怎么做的呢？感谢！！
h*g
7 楼
对你大有情意呵
D*y
8 楼
可是IgG IP后，PCR后什么信号也没有，如何对input DNA作normalization? 请指教。
谢谢
谢谢
p*g
9 楼
到man版发续集吧，呵呵
【在 W*D 的大作中提到】
: 那天是个周四，本来约了上午一起去我们小区打网球的。不过前一天的时候，她打电话
: 过来，说中午要见客户。我早就已经把公司的事挪到了中午以后了，接到电话，多少有
: 些失落，但也无奈的答应了。过了一会儿，她一定是敏感的觉到了我的惋惜，又打了电
: 话过来，犹豫的说，其实也能打，不过要借我们家的浴室洗个澡，午饭时可以直接见客
: 户。咚咚，咚咚，我几乎可以听到自己的心跳声。我几乎可以想到，如果去dreamer发
: 帖询问她是什么意思，dreamer的回答一定是让我不要禽兽不如。
: 球，飞来飞去，可我的心思却根本不在了。。。。。。
: 水，哗哗的响，可我的心思却根本不在了。。。。。。
: 浴室的门开了
: 她穿了黑色的露肩裙
【在 W*D 的大作中提到】
: 那天是个周四，本来约了上午一起去我们小区打网球的。不过前一天的时候，她打电话
: 过来，说中午要见客户。我早就已经把公司的事挪到了中午以后了，接到电话，多少有
: 些失落，但也无奈的答应了。过了一会儿，她一定是敏感的觉到了我的惋惜，又打了电
: 话过来，犹豫的说，其实也能打，不过要借我们家的浴室洗个澡，午饭时可以直接见客
: 户。咚咚，咚咚，我几乎可以听到自己的心跳声。我几乎可以想到，如果去dreamer发
: 帖询问她是什么意思，dreamer的回答一定是让我不要禽兽不如。
: 球，飞来飞去，可我的心思却根本不在了。。。。。。
: 水，哗哗的响，可我的心思却根本不在了。。。。。。
: 浴室的门开了
: 她穿了黑色的露肩裙
c*e
10 楼
negative control你指望有什么信号? 有background就行了.
e*a
11 楼
goodtocu感动死了。你从你别的版四处拉生意。
【在 p*********g 的大作中提到】
: 到man版发续集吧，呵呵
【在 p*********g 的大作中提到】
: 到man版发续集吧，呵呵
s*t
12 楼
PCR看不到
QPCR还是会有cp值的
除以1%的input，大概在0.0几%
就是负对照了
【在 D*****y 的大作中提到】
: 可是IgG IP后，PCR后什么信号也没有，如何对input DNA作normalization? 请指教。
: 谢谢
QPCR还是会有cp值的
除以1%的input，大概在0.0几%
就是负对照了
【在 D*****y 的大作中提到】
: 可是IgG IP后，PCR后什么信号也没有，如何对input DNA作normalization? 请指教。
: 谢谢
W*D
13 楼
惭愧，都是我们boston的事。发这里混个征文包子。
这次又发love了，下次有机会吧。
【在 p*********g 的大作中提到】
: 到man版发续集吧，呵呵
这次又发love了，下次有机会吧。
【在 p*********g 的大作中提到】
: 到man版发续集吧，呵呵
m*a
14 楼
最好做一个标准曲线,然后用得出的量去normalize input.
s*t
15 楼
楼主别听这个，不要越弄越复杂
按我的那个做
【在 m**********a 的大作中提到】
: 最好做一个标准曲线,然后用得出的量去normalize input.
按我的那个做
【在 m**********a 的大作中提到】
: 最好做一个标准曲线,然后用得出的量去normalize input.
f*s
16 楼
做CHIP的同时，要保留一定体积的input,我们一般保留10%的input.比如说，用150ul的
DNA做CHIP,保留15ul作为input.CHIP-DNA和input-DNA用同样的方式purify到同样的体
积里。做QPCR的时候，先将input做梯度稀释，做出一个标准曲线。比如说稀释五倍。
第一个点是10% input, 第二个点2%input，第三个点0.4%input....PCR仪会根据你的标
准曲线，计算CHIP-DNA相当于x% input.这就是你的normalize 过后的值。
对于不同的细胞要用不同的标准曲线，比如说WT，要有WT的标准曲线；Mut,要有Mut的
标准曲线。这个时候IgG作为negetive control，比如说相当于0.03%input；那你的
postive signal 就可能是相当于0.3% input（相对于IgG 有10倍enrichement）。
【在 D*****y 的大作中提到】
: 请教高位Chromatin Immunoprecipitation (ChIP)高手，ChIP最后的得到的DNA用PCR来
: 检测，现在Reviewer要求用Q-PCR检测，我是不是可以用总input的DNA和抗体IP后恢复
: 的DNA来进行Q-PCR(用一特定primer），然后取两者的Ratio来Normalization作为最终
: 结果？请问大家是怎么做的呢？感谢！！
DNA做CHIP,保留15ul作为input.CHIP-DNA和input-DNA用同样的方式purify到同样的体
积里。做QPCR的时候，先将input做梯度稀释，做出一个标准曲线。比如说稀释五倍。
第一个点是10% input, 第二个点2%input，第三个点0.4%input....PCR仪会根据你的标
准曲线，计算CHIP-DNA相当于x% input.这就是你的normalize 过后的值。
对于不同的细胞要用不同的标准曲线，比如说WT，要有WT的标准曲线；Mut,要有Mut的
标准曲线。这个时候IgG作为negetive control，比如说相当于0.03%input；那你的
postive signal 就可能是相当于0.3% input（相对于IgG 有10倍enrichement）。
【在 D*****y 的大作中提到】
: 请教高位Chromatin Immunoprecipitation (ChIP)高手，ChIP最后的得到的DNA用PCR来
: 检测，现在Reviewer要求用Q-PCR检测，我是不是可以用总input的DNA和抗体IP后恢复
: 的DNA来进行Q-PCR(用一特定primer），然后取两者的Ratio来Normalization作为最终
: 结果？请问大家是怎么做的呢？感谢！！
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