c*k
2 楼
小柯作品, 歌挺好听的
电影虽然豆瓣上评分比较低 但还是蛮好玩的 很多大腕儿
电影虽然豆瓣上评分比较低 但还是蛮好玩的 很多大腕儿
t*y
3 楼
m*n
4 楼
forward的那个有90＋，其中有大约60bp的尾巴；下游那个就是一般的20＋左右的引物
，从质粒上面p大约1.5k的片段，因为从来没有用过长引物做pcr，所以不知道要怎么样
优化。万一搞了半天出不了，老板又要有意见了，所以先来打听一下～～～谢谢～～
，从质粒上面p大约1.5k的片段，因为从来没有用过长引物做pcr，所以不知道要怎么样
优化。万一搞了半天出不了，老板又要有意见了，所以先来打听一下～～～谢谢～～
l*a
5 楼
土法是这样的，你拿一根针，消毒一下，然后手也消毒一下，看一下刺的方向，如果不
是很深的，就用针把上面的皮划开，看到刺以后挑出来，消毒伤口，如果很深，还是去
医院处理好。
【在 w*****4 的大作中提到】
: 幼儿园回来就这样了，开始以为擦破皮，今天摸着还挺硬的。怎么处理比较安全？
是很深的，就用针把上面的皮划开，看到刺以后挑出来，消毒伤口，如果很深，还是去
医院处理好。
【在 w*****4 的大作中提到】
: 幼儿园回来就这样了，开始以为擦破皮，今天摸着还挺硬的。怎么处理比较安全？
w*w
6 楼
稳稳的幸福，这个要求有点高，呵呵~~
e*k
7 楼
嗯，已经有一个，两个有啥用呢？
N2
8 楼
primers:
Forward primer: the matched part should be 30-35mer, tm~65C,
Reverse primer: should be >30-35er, could be 40-55mer if you don't have a
tail, the long the better, matched base pairs have tm around 65.
cycles:
using phusion polymerase, add 5% DMSO(2.5ul/50ul), annealing temperature>=
68C.
For the long primer pcr, the main problem is the primer dimer and the second
structure of the primer. So you need a long matched length to give space to
increase the annealing temperature and break any primers' complementary and
structure, but still have a good annealing.
good luck.
Forward primer: the matched part should be 30-35mer, tm~65C,
Reverse primer: should be >30-35er, could be 40-55mer if you don't have a
tail, the long the better, matched base pairs have tm around 65.
cycles:
using phusion polymerase, add 5% DMSO(2.5ul/50ul), annealing temperature>=
68C.
For the long primer pcr, the main problem is the primer dimer and the second
structure of the primer. So you need a long matched length to give space to
increase the annealing temperature and break any primers' complementary and
structure, but still have a good annealing.
good luck.
r*f
9 楼
去医生那里算了.孩子小,要是搞不定还麻烦,就不妙了
【在 w*****4 的大作中提到】
: 幼儿园回来就这样了，开始以为擦破皮，今天摸着还挺硬的。怎么处理比较安全？
【在 w*****4 的大作中提到】
: 幼儿园回来就这样了，开始以为擦破皮，今天摸着还挺硬的。怎么处理比较安全？
z*n
10 楼
这是原唱吧，好像只有右耳有声音呀。。。
y*n
11 楼
unlocked的么？可以用于AT&T prepaid或者Tmobile prepaid么？Verizon呢？
【在 t*******y 的大作中提到】
: http://slickdeals.net/forums/showthread.php?t=3624390
: Optimus V 卖52
【在 t*******y 的大作中提到】
: http://slickdeals.net/forums/showthread.php?t=3624390
: Optimus V 卖52
j*x
12 楼
拿质粒作模板，而且还只有1.5kb，基本上闭着眼也能扩增出来的，呵呵。直接2-step
PCR，不用退火，变性后直接72度延伸，可以有效减少引物二聚体的影响。前提是引物
Tm值均高于72度（这个应该不难）
PCR，不用退火，变性后直接72度延伸，可以有效减少引物二聚体的影响。前提是引物
Tm值均高于72度（这个应该不难）
p*i
13 楼
If it is not deep then dont worry. It will come out by itself.
t*y
14 楼
只能用于Virgin Mobile， Virgin Mobile是Sprint的子公司
【在 y***n 的大作中提到】
: unlocked的么？可以用于AT&T prepaid或者Tmobile prepaid么？Verizon呢？
【在 y***n 的大作中提到】
: unlocked的么？可以用于AT&T prepaid或者Tmobile prepaid么？Verizon呢？
m*n
15 楼
这么多，好感动啊，谢啦～～～
second
to
and
【在 N2 的大作中提到】
: primers:
: Forward primer: the matched part should be 30-35mer, tm~65C,
: Reverse primer: should be >30-35er, could be 40-55mer if you don't have a
: tail, the long the better, matched base pairs have tm around 65.
: cycles:
: using phusion polymerase, add 5% DMSO(2.5ul/50ul), annealing temperature>=
: 68C.
: For the long primer pcr, the main problem is the primer dimer and the second
: structure of the primer. So you need a long matched length to give space to
: increase the annealing temperature and break any primers' complementary and
second
to
and
【在 N2 的大作中提到】
: primers:
: Forward primer: the matched part should be 30-35mer, tm~65C,
: Reverse primer: should be >30-35er, could be 40-55mer if you don't have a
: tail, the long the better, matched base pairs have tm around 65.
: cycles:
: using phusion polymerase, add 5% DMSO(2.5ul/50ul), annealing temperature>=
: 68C.
: For the long primer pcr, the main problem is the primer dimer and the second
: structure of the primer. So you need a long matched length to give space to
: increase the annealing temperature and break any primers' complementary and
w*f
16 楼
嗯， 挑开一点， 用镊子夹出来
【在 l******a 的大作中提到】
: 土法是这样的，你拿一根针，消毒一下，然后手也消毒一下，看一下刺的方向，如果不
: 是很深的，就用针把上面的皮划开，看到刺以后挑出来，消毒伤口，如果很深，还是去
: 医院处理好。
【在 l******a 的大作中提到】
: 土法是这样的，你拿一根针，消毒一下，然后手也消毒一下，看一下刺的方向，如果不
: 是很深的，就用针把上面的皮划开，看到刺以后挑出来，消毒伤口，如果很深，还是去
: 医院处理好。
y*n
17 楼
那就没有太大意思了。
【在 t*******y 的大作中提到】
: 只能用于Virgin Mobile， Virgin Mobile是Sprint的子公司
【在 t*******y 的大作中提到】
: 只能用于Virgin Mobile， Virgin Mobile是Sprint的子公司
m*n
18 楼
主要是实验室里的另一个人用其他方法构这个东西搞了好久没出来，老板都没啥兴趣了
；然后现在我有这个方法做，老板也同意，我就想先打听好有没有啥注意事项，万一搞
了半天出不来又把老板惹毛就不好了～
step
【在 j****x 的大作中提到】
: 拿质粒作模板，而且还只有1.5kb，基本上闭着眼也能扩增出来的，呵呵。直接2-step
: PCR，不用退火，变性后直接72度延伸，可以有效减少引物二聚体的影响。前提是引物
: Tm值均高于72度（这个应该不难）
；然后现在我有这个方法做，老板也同意，我就想先打听好有没有啥注意事项，万一搞
了半天出不来又把老板惹毛就不好了～
step
【在 j****x 的大作中提到】
: 拿质粒作模板，而且还只有1.5kb，基本上闭着眼也能扩增出来的，呵呵。直接2-step
: PCR，不用退火，变性后直接72度延伸，可以有效减少引物二聚体的影响。前提是引物
: Tm值均高于72度（这个应该不难）
V*8
19 楼
这个我想我很有经验回答。
我儿一岁左右光脚在家里走路也扎了个不知道是什么东西，摸着有点硬硬的，但是看他
走路依旧，也没有痛的表现，就没有怎么样。后来拖了一个多月，那东西既没有自己出
来，也没有恶化，我不放心就带他去看了儿医，又被转介到医院看。医生还给他照了X
光。结果什么也看不出来。
当时医生让我自己选，他说X光只能照出玻璃等异物，如果是木屑是照不出来的。我可
以1）随他去。2）全身麻醉把脚底板隔一个小口子看看。他说如果是木屑有可能以后身
体会自己消化掉。。
我选了1.后来就没有了，可能自己消化掉了或者出来了。
我儿一岁左右光脚在家里走路也扎了个不知道是什么东西，摸着有点硬硬的，但是看他
走路依旧，也没有痛的表现，就没有怎么样。后来拖了一个多月，那东西既没有自己出
来，也没有恶化，我不放心就带他去看了儿医，又被转介到医院看。医生还给他照了X
光。结果什么也看不出来。
当时医生让我自己选，他说X光只能照出玻璃等异物，如果是木屑是照不出来的。我可
以1）随他去。2）全身麻醉把脚底板隔一个小口子看看。他说如果是木屑有可能以后身
体会自己消化掉。。
我选了1.后来就没有了，可能自己消化掉了或者出来了。
l*a
20 楼
CDMA, 制式。
h*e
21 楼
这个应该不难，没啥特别的 就按照平常PCR的方法试试 就能扩出来
w*4
22 楼
谢谢。针消毒，手消毒，还有伤口消毒用啥呀？用娃小时候肚脐消毒的酒精片好吗？
娃这么小，肯定针刚一扎就开始嚎了，难度太大了。。。
看着倒是不深的样子，医生是不是也是这样子弄？
【在 l******a 的大作中提到】
: 土法是这样的，你拿一根针，消毒一下，然后手也消毒一下，看一下刺的方向，如果不
: 是很深的，就用针把上面的皮划开，看到刺以后挑出来，消毒伤口，如果很深，还是去
: 医院处理好。
娃这么小，肯定针刚一扎就开始嚎了，难度太大了。。。
看着倒是不深的样子，医生是不是也是这样子弄？
【在 l******a 的大作中提到】
: 土法是这样的，你拿一根针，消毒一下，然后手也消毒一下，看一下刺的方向，如果不
: 是很深的，就用针把上面的皮划开，看到刺以后挑出来，消毒伤口，如果很深，还是去
: 医院处理好。
p*c
23 楼
有同学知道怎么换电话么？收到之后给他们打电话就行？原来电话自动deactive？
谢谢
谢谢
L*t
24 楼
以前做PCR扩不出来就往里面加DMSO，从3%开始往上加到10%一般都能做出来，比退火温度梯度什么的有效多了。文献里说加甜菜碱也可以不过没用过。
w*4
25 楼
come out by itself? how...
【在 p******i 的大作中提到】
: If it is not deep then dont worry. It will come out by itself.
【在 p******i 的大作中提到】
: If it is not deep then dont worry. It will come out by itself.
y*n
26 楼
Verizon也是CDMA的，不能用么？
【在 t*******y 的大作中提到】
: 只能用于Virgin Mobile， Virgin Mobile是Sprint的子公司
【在 t*******y 的大作中提到】
: 只能用于Virgin Mobile， Virgin Mobile是Sprint的子公司
m*n
27 楼
嗯嗯，谢谢。那我就放心准备订引物了～～～
温度梯度什么的有效多了。文献里说加甜菜碱也可以不过没用过。
【在 L*****t 的大作中提到】
: 以前做PCR扩不出来就往里面加DMSO，从3%开始往上加到10%一般都能做出来，比退火温度梯度什么的有效多了。文献里说加甜菜碱也可以不过没用过。
温度梯度什么的有效多了。文献里说加甜菜碱也可以不过没用过。
【在 L*****t 的大作中提到】
: 以前做PCR扩不出来就往里面加DMSO，从3%开始往上加到10%一般都能做出来，比退火温度梯度什么的有效多了。文献里说加甜菜碱也可以不过没用过。
w*4
28 楼
en, 我给我父亲拨刺的时候也这样，有时候干脆就用针尖弄出来，只是小孩子不好控制
，还怕发炎感染
【在 w**f 的大作中提到】
: 嗯， 挑开一点， 用镊子夹出来
，还怕发炎感染
【在 w**f 的大作中提到】
: 嗯， 挑开一点， 用镊子夹出来
t*y
29 楼
不行，就算买了用到他们家的母公司，Sprint，也不行，他们不会给你激活的。当然自
己烧号另说了。
【在 y***n 的大作中提到】
: Verizon也是CDMA的，不能用么？
己烧号另说了。
【在 y***n 的大作中提到】
: Verizon也是CDMA的，不能用么？
W*7
30 楼
放心闭着眼睛做吧，、
我当时做的120多的引物，也就是闭着眼睛做的，一点问题都没有。。
我当时做的120多的引物，也就是闭着眼睛做的，一点问题都没有。。
w*4
31 楼
真的会自己消失吗？木头会被身体消化掉？很神奇的说。
我也只是猜着是木头刺，没有硬物只是小口子的话不会硬硬的。问他他又说不疼。好奇
怪，我觉得要是
我手上扎刺，肯定一直疼。
你说起光脚走路，我也担心我家这个，playground都是碎木头的，穿crocs鞋还是有被
扎的可能的，
以后还是穿运动鞋算了。看老美的孩子很多光着脚丫到处乱跑，难道都是铁脚掌。。。
X
【在 V*****8 的大作中提到】
: 这个我想我很有经验回答。
: 我儿一岁左右光脚在家里走路也扎了个不知道是什么东西，摸着有点硬硬的，但是看他
: 走路依旧，也没有痛的表现，就没有怎么样。后来拖了一个多月，那东西既没有自己出
: 来，也没有恶化，我不放心就带他去看了儿医，又被转介到医院看。医生还给他照了X
: 光。结果什么也看不出来。
: 当时医生让我自己选，他说X光只能照出玻璃等异物，如果是木屑是照不出来的。我可
: 以1）随他去。2）全身麻醉把脚底板隔一个小口子看看。他说如果是木屑有可能以后身
: 体会自己消化掉。。
: 我选了1.后来就没有了，可能自己消化掉了或者出来了。
我也只是猜着是木头刺，没有硬物只是小口子的话不会硬硬的。问他他又说不疼。好奇
怪，我觉得要是
我手上扎刺，肯定一直疼。
你说起光脚走路，我也担心我家这个，playground都是碎木头的，穿crocs鞋还是有被
扎的可能的，
以后还是穿运动鞋算了。看老美的孩子很多光着脚丫到处乱跑，难道都是铁脚掌。。。
X
【在 V*****8 的大作中提到】
: 这个我想我很有经验回答。
: 我儿一岁左右光脚在家里走路也扎了个不知道是什么东西，摸着有点硬硬的，但是看他
: 走路依旧，也没有痛的表现，就没有怎么样。后来拖了一个多月，那东西既没有自己出
: 来，也没有恶化，我不放心就带他去看了儿医，又被转介到医院看。医生还给他照了X
: 光。结果什么也看不出来。
: 当时医生让我自己选，他说X光只能照出玻璃等异物，如果是木屑是照不出来的。我可
: 以1）随他去。2）全身麻醉把脚底板隔一个小口子看看。他说如果是木屑有可能以后身
: 体会自己消化掉。。
: 我选了1.后来就没有了，可能自己消化掉了或者出来了。
y*n
32 楼
那Virgin就是用Sprint的网络？只要Sprint有信号，Virgin就有？
主要是习惯了Verizon到哪都有信号，担心换到Virgin悲剧了。
【在 t*******y 的大作中提到】
: 不行，就算买了用到他们家的母公司，Sprint，也不行，他们不会给你激活的。当然自
: 己烧号另说了。
主要是习惯了Verizon到哪都有信号，担心换到Virgin悲剧了。
【在 t*******y 的大作中提到】
: 不行，就算买了用到他们家的母公司，Sprint，也不行，他们不会给你激活的。当然自
: 己烧号另说了。
C*e
33 楼
没什么问题
就是订的引物要当心
这么长
要不你要求PAGE纯化
要不自己PAGE纯化
不然等你拿到clone结果在引物的部分有错或者短了什么的就要哭了
就是订的引物要当心
这么长
要不你要求PAGE纯化
要不自己PAGE纯化
不然等你拿到clone结果在引物的部分有错或者短了什么的就要哭了
z*i
34 楼
不弄出来碰到就会疼.还是挑出来好.我给儿子挑过好几次刺儿了. 有时候会露一点在外
面,用镊子夹出来就可以.有时候需要用针挑开,会有点疼. 我用一点可卡因油膏抹在上
面,会有点麻醉作用,然后把刺挑出来. 可卡因油膏在walgreens有卖的,治痔疮用的.
【在 w*****4 的大作中提到】
: 真的会自己消失吗？木头会被身体消化掉？很神奇的说。
: 我也只是猜着是木头刺，没有硬物只是小口子的话不会硬硬的。问他他又说不疼。好奇
: 怪，我觉得要是
: 我手上扎刺，肯定一直疼。
: 你说起光脚走路，我也担心我家这个，playground都是碎木头的，穿crocs鞋还是有被
: 扎的可能的，
: 以后还是穿运动鞋算了。看老美的孩子很多光着脚丫到处乱跑，难道都是铁脚掌。。。
:
: X
面,用镊子夹出来就可以.有时候需要用针挑开,会有点疼. 我用一点可卡因油膏抹在上
面,会有点麻醉作用,然后把刺挑出来. 可卡因油膏在walgreens有卖的,治痔疮用的.
【在 w*****4 的大作中提到】
: 真的会自己消失吗？木头会被身体消化掉？很神奇的说。
: 我也只是猜着是木头刺，没有硬物只是小口子的话不会硬硬的。问他他又说不疼。好奇
: 怪，我觉得要是
: 我手上扎刺，肯定一直疼。
: 你说起光脚走路，我也担心我家这个，playground都是碎木头的，穿crocs鞋还是有被
: 扎的可能的，
: 以后还是穿运动鞋算了。看老美的孩子很多光着脚丫到处乱跑，难道都是铁脚掌。。。
:
: X
y*d
35 楼
国内CDMA能用么
【在 t*******y 的大作中提到】
: 不行，就算买了用到他们家的母公司，Sprint，也不行，他们不会给你激活的。当然自
: 己烧号另说了。
【在 t*******y 的大作中提到】
: 不行，就算买了用到他们家的母公司，Sprint，也不行，他们不会给你激活的。当然自
: 己烧号另说了。
L*t
36 楼
长引物的主要问题是5'容易丢碱基，我一般建议设计的时候多加几个保护碱基而不是纯化。PAGE纯化很贵，何况本来长引物产率就不高，纯化后就更少了。
【在 C*******e 的大作中提到】
: 没什么问题
: 就是订的引物要当心
: 这么长
: 要不你要求PAGE纯化
: 要不自己PAGE纯化
: 不然等你拿到clone结果在引物的部分有错或者短了什么的就要哭了
【在 C*******e 的大作中提到】
: 没什么问题
: 就是订的引物要当心
: 这么长
: 要不你要求PAGE纯化
: 要不自己PAGE纯化
: 不然等你拿到clone结果在引物的部分有错或者短了什么的就要哭了
b*t
37 楼
我也觉得playground用碎木头挺不合理的，我看好多小孩夏天膝盖也是留着血的。
【在 w*****4 的大作中提到】
: 真的会自己消失吗？木头会被身体消化掉？很神奇的说。
: 我也只是猜着是木头刺，没有硬物只是小口子的话不会硬硬的。问他他又说不疼。好奇
: 怪，我觉得要是
: 我手上扎刺，肯定一直疼。
: 你说起光脚走路，我也担心我家这个，playground都是碎木头的，穿crocs鞋还是有被
: 扎的可能的，
: 以后还是穿运动鞋算了。看老美的孩子很多光着脚丫到处乱跑，难道都是铁脚掌。。。
:
: X
【在 w*****4 的大作中提到】
: 真的会自己消失吗？木头会被身体消化掉？很神奇的说。
: 我也只是猜着是木头刺，没有硬物只是小口子的话不会硬硬的。问他他又说不疼。好奇
: 怪，我觉得要是
: 我手上扎刺，肯定一直疼。
: 你说起光脚走路，我也担心我家这个，playground都是碎木头的，穿crocs鞋还是有被
: 扎的可能的，
: 以后还是穿运动鞋算了。看老美的孩子很多光着脚丫到处乱跑，难道都是铁脚掌。。。
:
: X
t*y
38 楼
用Sprint网的信号，Sprint的手机可以免费漫游到Verizon，Virgin的手机可不可以，
就不知道了.
【在 y***n 的大作中提到】
: 那Virgin就是用Sprint的网络？只要Sprint有信号，Virgin就有？
: 主要是习惯了Verizon到哪都有信号，担心换到Virgin悲剧了。
就不知道了.
【在 y***n 的大作中提到】
: 那Virgin就是用Sprint的网络？只要Sprint有信号，Virgin就有？
: 主要是习惯了Verizon到哪都有信号，担心换到Virgin悲剧了。
C*e
39 楼
不光是丢碱基
我遇到过几次5'端连序列都有错的
PAGE纯化不算贵
HPLC纯化才贵
而且PAGE纯化自己做也挺简单的
就是要一个手持的短波UV灯而已
再少也不会有不够用的情况
纯化。PAGE纯化很贵，何况本来长引物产率就不高，纯化后就更少了。
【在 L*****t 的大作中提到】
: 长引物的主要问题是5'容易丢碱基，我一般建议设计的时候多加几个保护碱基而不是纯化。PAGE纯化很贵，何况本来长引物产率就不高，纯化后就更少了。
我遇到过几次5'端连序列都有错的
PAGE纯化不算贵
HPLC纯化才贵
而且PAGE纯化自己做也挺简单的
就是要一个手持的短波UV灯而已
再少也不会有不够用的情况
纯化。PAGE纯化很贵，何况本来长引物产率就不高，纯化后就更少了。
【在 L*****t 的大作中提到】
: 长引物的主要问题是5'容易丢碱基，我一般建议设计的时候多加几个保护碱基而不是纯化。PAGE纯化很贵，何况本来长引物产率就不高，纯化后就更少了。
w*4
40 楼
哦，谢谢了，我回来到walgreen 找找去。你家宝宝都是怎么扎的刺啊，除了
playground木屑还有什
么地方容易扎刺吗？
【在 z******i 的大作中提到】
: 不弄出来碰到就会疼.还是挑出来好.我给儿子挑过好几次刺儿了. 有时候会露一点在外
: 面,用镊子夹出来就可以.有时候需要用针挑开,会有点疼. 我用一点可卡因油膏抹在上
: 面,会有点麻醉作用,然后把刺挑出来. 可卡因油膏在walgreens有卖的,治痔疮用的.
playground木屑还有什
么地方容易扎刺吗？
【在 z******i 的大作中提到】
: 不弄出来碰到就会疼.还是挑出来好.我给儿子挑过好几次刺儿了. 有时候会露一点在外
: 面,用镊子夹出来就可以.有时候需要用针挑开,会有点疼. 我用一点可卡因油膏抹在上
: 面,会有点麻醉作用,然后把刺挑出来. 可卡因油膏在walgreens有卖的,治痔疮用的.
y*n
41 楼
那岂不是Sprint的信号最好了？btw, Virgin激活要钱么？买了可以放几个月不激活么？
【在 t*******y 的大作中提到】
: 用Sprint网的信号，Sprint的手机可以免费漫游到Verizon，Virgin的手机可不可以，
: 就不知道了.
【在 t*******y 的大作中提到】
: 用Sprint网的信号，Sprint的手机可以免费漫游到Verizon，Virgin的手机可不可以，
: 就不知道了.
b*g
42 楼
我最近一直在用180左右的，很稳定，不用纯化
【在 m******n 的大作中提到】
: forward的那个有90＋，其中有大约60bp的尾巴；下游那个就是一般的20＋左右的引物
: ，从质粒上面p大约1.5k的片段，因为从来没有用过长引物做pcr，所以不知道要怎么样
: 优化。万一搞了半天出不了，老板又要有意见了，所以先来打听一下～～～谢谢～～
【在 m******n 的大作中提到】
: forward的那个有90＋，其中有大约60bp的尾巴；下游那个就是一般的20＋左右的引物
: ，从质粒上面p大约1.5k的片段，因为从来没有用过长引物做pcr，所以不知道要怎么样
: 优化。万一搞了半天出不了，老板又要有意见了，所以先来打听一下～～～谢谢～～
w*4
43 楼
update一下：昨天洗澡发现他的手指竟然像起皮一样，皮掉了，啥都没了。真的有些神
奇，我明明摸着硬硬的，不像单纯割破个小口子，研究了半天，竟然自己就没了，真相
也不得而知。
奇，我明明摸着硬硬的，不像单纯割破个小口子，研究了半天，竟然自己就没了，真相
也不得而知。
t*y
44 楼
激活不要钱，存了钱进去以后每个月会扣月费。
么？
【在 y***n 的大作中提到】
: 那岂不是Sprint的信号最好了？btw, Virgin激活要钱么？买了可以放几个月不激活么？
么？
【在 y***n 的大作中提到】
: 那岂不是Sprint的信号最好了？btw, Virgin激活要钱么？买了可以放几个月不激活么？
w*a
45 楼
不要怕做
管他结果,先做一遍,看看结果,就是个pcr,花不了多少时间和精力还有钱
然后网上查查
很快经验就会积累起来
管他结果,先做一遍,看看结果,就是个pcr,花不了多少时间和精力还有钱
然后网上查查
很快经验就会积累起来
x*u
46 楼
Could you please share the English name for 卡因油膏? Thanks a lot!
【在 z******i 的大作中提到】
: 不弄出来碰到就会疼.还是挑出来好.我给儿子挑过好几次刺儿了. 有时候会露一点在外
: 面,用镊子夹出来就可以.有时候需要用针挑开,会有点疼. 我用一点可卡因油膏抹在上
: 面,会有点麻醉作用,然后把刺挑出来. 可卡因油膏在walgreens有卖的,治痔疮用的.
【在 z******i 的大作中提到】
: 不弄出来碰到就会疼.还是挑出来好.我给儿子挑过好几次刺儿了. 有时候会露一点在外
: 面,用镊子夹出来就可以.有时候需要用针挑开,会有点疼. 我用一点可卡因油膏抹在上
: 面,会有点麻醉作用,然后把刺挑出来. 可卡因油膏在walgreens有卖的,治痔疮用的.
y*n
47 楼
谢谢了。
【在 t*******y 的大作中提到】
: 激活不要钱，存了钱进去以后每个月会扣月费。
:
: 么？
【在 t*******y 的大作中提到】
: 激活不要钱，存了钱进去以后每个月会扣月费。
:
: 么？
q*8
48 楼
LS说的没错，做实验就是试这个试那个，要是怕结果不好就不敢做的话那就不是做实验
了。
SERIALCLONER可以预测初始和后期的ANNEALING TEMPERATURE。大不了你前面5个循环用
低温，后面调高温。
不过我的建议是你把60+的FORWARD PRIMER分成3个不就做出来了。每次就加20个BP，我
一直在做 一点问题都没有
了。
SERIALCLONER可以预测初始和后期的ANNEALING TEMPERATURE。大不了你前面5个循环用
低温，后面调高温。
不过我的建议是你把60+的FORWARD PRIMER分成3个不就做出来了。每次就加20个BP，我
一直在做 一点问题都没有
g*g
49 楼
$35就是35? 还是会收税和费?
这样$35的总价就到$43左右了.
有的公司的预付费是$30就是$30,不另外收税费了
virgin 是哪一种?
希望用的给确认一下,谢谢.
【在 t*******y 的大作中提到】
: 激活不要钱，存了钱进去以后每个月会扣月费。
:
: 么？
这样$35的总价就到$43左右了.
有的公司的预付费是$30就是$30,不另外收税费了
virgin 是哪一种?
希望用的给确认一下,谢谢.
【在 t*******y 的大作中提到】
: 激活不要钱，存了钱进去以后每个月会扣月费。
:
: 么？
y*n
50 楼
月费是不是通常$35+tax。tax大概$10?
【在 t*******y 的大作中提到】
: 激活不要钱，存了钱进去以后每个月会扣月费。
:
: 么？
【在 t*******y 的大作中提到】
: 激活不要钱，存了钱进去以后每个月会扣月费。
:
: 么？
t*y
51 楼
你可以在Ebay上或者别的预付卡网站，比方CallingMart，买了卡然后加进去，就没税
，有时还能便宜几毛钱。直接在他们家网上加钱，有税。没Fee，35就35。
刚涨价后的一两个月里，用户可以把自己账户偷偷改成25的Plan（几个月前涨价的，之
前是25一个月），现在不知道还可不可以。
【在 g*****g 的大作中提到】
: $35就是35? 还是会收税和费?
: 这样$35的总价就到$43左右了.
: 有的公司的预付费是$30就是$30,不另外收税费了
: virgin 是哪一种?
: 希望用的给确认一下,谢谢.
，有时还能便宜几毛钱。直接在他们家网上加钱，有税。没Fee，35就35。
刚涨价后的一两个月里，用户可以把自己账户偷偷改成25的Plan（几个月前涨价的，之
前是25一个月），现在不知道还可不可以。
【在 g*****g 的大作中提到】
: $35就是35? 还是会收税和费?
: 这样$35的总价就到$43左右了.
: 有的公司的预付费是$30就是$30,不另外收税费了
: virgin 是哪一种?
: 希望用的给确认一下,谢谢.
y*n
52 楼
这个$25太爽了。回头搞一个试试。如果不从值，号码会不会过期？需要重新激活？
太感谢你的解答了。建议斑竹mark.
【在 t*******y 的大作中提到】
: 你可以在Ebay上或者别的预付卡网站，比方CallingMart，买了卡然后加进去，就没税
: ，有时还能便宜几毛钱。直接在他们家网上加钱，有税。没Fee，35就35。
: 刚涨价后的一两个月里，用户可以把自己账户偷偷改成25的Plan（几个月前涨价的，之
: 前是25一个月），现在不知道还可不可以。
太感谢你的解答了。建议斑竹mark.
【在 t*******y 的大作中提到】
: 你可以在Ebay上或者别的预付卡网站，比方CallingMart，买了卡然后加进去，就没税
: ，有时还能便宜几毛钱。直接在他们家网上加钱，有税。没Fee，35就35。
: 刚涨价后的一两个月里，用户可以把自己账户偷偷改成25的Plan（几个月前涨价的，之
: 前是25一个月），现在不知道还可不可以。
t*y
53 楼
现在不一定可以私自改25，以前是可以的。
如果你帐号里一直有钱，号码就会保留下去，不然就不知道了。
【在 y***n 的大作中提到】
: 这个$25太爽了。回头搞一个试试。如果不从值，号码会不会过期？需要重新激活？
: 太感谢你的解答了。建议斑竹mark.
如果你帐号里一直有钱，号码就会保留下去，不然就不知道了。
【在 y***n 的大作中提到】
: 这个$25太爽了。回头搞一个试试。如果不从值，号码会不会过期？需要重新激活？
: 太感谢你的解答了。建议斑竹mark.
y*n
54 楼
找到了：
http://virginmobileusa.custhelp.com/app/answers/detail/a_id/915
Virgin Mobile accounts can expire
Your account will expire if:
A) Pay by the minute plan accounts will expire if you go more than 150 days
without Topping-Up at least $20 or $15 if you select the Auto Top-Up option
- OR - you go more than 105 days from your last Top-Up of less than $20 .
B) Monthly Plan accounts will expire if you go 120 days without fixing it or
otherwise paying your monthly charge.
Don't let either of these happen to you! If your account expires, you'll
lose your phone number and any money left in your account.
【在 t*******y 的大作中提到】
: 现在不一定可以私自改25，以前是可以的。
: 如果你帐号里一直有钱，号码就会保留下去，不然就不知道了。
http://virginmobileusa.custhelp.com/app/answers/detail/a_id/915
Virgin Mobile accounts can expire
Your account will expire if:
A) Pay by the minute plan accounts will expire if you go more than 150 days
without Topping-Up at least $20 or $15 if you select the Auto Top-Up option
- OR - you go more than 105 days from your last Top-Up of less than $20 .
B) Monthly Plan accounts will expire if you go 120 days without fixing it or
otherwise paying your monthly charge.
Don't let either of these happen to you! If your account expires, you'll
lose your phone number and any money left in your account.
【在 t*******y 的大作中提到】
: 现在不一定可以私自改25，以前是可以的。
: 如果你帐号里一直有钱，号码就会保留下去，不然就不知道了。
r*t
55 楼
verizon 在我呆的办公室里面就没有信号。
【在 y***n 的大作中提到】
: 那Virgin就是用Sprint的网络？只要Sprint有信号，Virgin就有？
: 主要是习惯了Verizon到哪都有信号，担心换到Virgin悲剧了。
【在 y***n 的大作中提到】
: 那Virgin就是用Sprint的网络？只要Sprint有信号，Virgin就有？
: 主要是习惯了Verizon到哪都有信号，担心换到Virgin悲剧了。
r*t
56 楼
virgin 是没有月费的吧？我有个号，手机太烂已经放了一年了。
【在 t*******y 的大作中提到】
: 激活不要钱，存了钱进去以后每个月会扣月费。
:
: 么？
【在 t*******y 的大作中提到】
: 激活不要钱，存了钱进去以后每个月会扣月费。
:
: 么？
t*y
57 楼
看你什么Plan了，Beyond Talk是一个月35块，但没合同
http://www.virginmobileusa.com/cell-phone-plans/beyond-talk-pla
【在 r****t 的大作中提到】
: virgin 是没有月费的吧？我有个号，手机太烂已经放了一年了。
http://www.virginmobileusa.com/cell-phone-plans/beyond-talk-pla
【在 r****t 的大作中提到】
: virgin 是没有月费的吧？我有个号，手机太烂已经放了一年了。
p*n
58 楼
25的已经没有了，确定。
r*t
59 楼
就是 pay as you go 这样的，我记得是 10c/min, 自动每三个月充值一次。
【在 t*******y 的大作中提到】
: 看你什么Plan了，Beyond Talk是一个月35块，但没合同
: http://www.virginmobileusa.com/cell-phone-plans/beyond-talk-pla
【在 t*******y 的大作中提到】
: 看你什么Plan了，Beyond Talk是一个月35块，但没合同
: http://www.virginmobileusa.com/cell-phone-plans/beyond-talk-pla
O*X
60 楼
请问这些prepaid的phone也可以用分钟的plan吧?
另外monthly prepaid 和 contract有什么差别?
另外monthly prepaid 和 contract有什么差别?
t*y
61 楼
差别就是没合同，随时可以停掉，也可以隔月付一次，但那样你在不付钱的那个月就没
得用了。
【在 O**X 的大作中提到】
: 请问这些prepaid的phone也可以用分钟的plan吧?
: 另外monthly prepaid 和 contract有什么差别?
得用了。
【在 O**X 的大作中提到】
: 请问这些prepaid的phone也可以用分钟的plan吧?
: 另外monthly prepaid 和 contract有什么差别?
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