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含泪跪求,cre-lox 条件性knockdown 老鼠protocol
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含泪跪求,cre-lox 条件性knockdown 老鼠protocol# Biology - 生物学
g*e
1
如题, 在中国知网, 查到自己的中文文章被引用和下载次数, 律师说最好能搞到引
用你文章的文章(those articles that cite your work), 我怎么也无法办到。 请
问大家是怎么办的。多谢。
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s*p
2
KV Sisters 独家专访最强大脑美国战队中的
- Nelson Dellis (花两天记1900头奶牛)和Johnny Briones(走了世界上最难走的迷
宫)
- 分享他们记忆经验和最强大脑经历。
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d*e
3
【 以下文字转载自 NextGeneration 讨论区 】
发信人: ninikang (妮妮), 信区: NextGeneration
标 题: 第一次给儿子洗屁股闹的笑话
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Jul 2 17:06:07 2010, 美东)
第一次给儿子洗小屁屁,看到儿子的小鸡鸡尖端有皱在一起的几道包皮,我很紧张的问
老公“这个正常吗?”
老公:“正常正常,你难道没见过我的吗?”
我:“从来没有啊,每次看见你的都是大着的嘛。”
老公--- 绝倒!
洗小鸡鸡的时候,老公指导我要把儿子的包皮翻上去,清洁包皮里面的地方。由于Baby
的小鸡鸡真的是太小了,而且儿子正在大哭大闹,搞得我非常小心而又紧张,忽然发现
龟头上有一道缝,我吓得面如土色的问老公,“是不是被我擦裂了??” 老公笑昏了
,说“那是尿尿的地方嘛。” 喔,对哈,我晕倒!
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b*n
4
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c*e
5
請沒有領到包子的ID報道,“並且註明在第幾頁奔的”(不註明就要排後面拿咯)
閃的ID如果已經刪除也可以報道,群衆的眼睛是雪亮的。尤其我版有不少記憶超群的ID。
本貼是方便斑竹發包子用。
每版每天版上發的包子是有限度的,所以今天沒有領到的請少安毋躁,明天就到賬了。
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l*s
6
tamoxifen 用来做条件性敲出的。谢谢各位大侠啊!
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g*e
7
没人回答啊, 郁闷...

【在 g********e 的大作中提到】
: 如题, 在中国知网, 查到自己的中文文章被引用和下载次数, 律师说最好能搞到引
: 用你文章的文章(those articles that cite your work), 我怎么也无法办到。 请
: 问大家是怎么办的。多谢。

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c*o
8
这一对傻逼,小孩的包皮不能翻的,真够二的,性侵幼童呀。。。还好意思上来发贴。

Baby

【在 d****e 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 NextGeneration 讨论区 】
: 发信人: ninikang (妮妮), 信区: NextGeneration
: 标 题: 第一次给儿子洗屁股闹的笑话
: 发信站: BBS 未名空间站 (Fri Jul 2 17:06:07 2010, 美东)
: 第一次给儿子洗小屁屁,看到儿子的小鸡鸡尖端有皱在一起的几道包皮,我很紧张的问
: 老公“这个正常吗?”
: 老公:“正常正常,你难道没见过我的吗?”
: 我:“从来没有啊,每次看见你的都是大着的嘛。”
: 老公--- 绝倒!
: 洗小鸡鸡的时候,老公指导我要把儿子的包皮翻上去,清洁包皮里面的地方。由于Baby

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T*t
9
其实老是best in one的生活,也是容易stressful, 婚姻未必长久
最好双方都是natural in her/him self, 两个在一起的时候,都可以自然放松,这就
是最好的婚姻伴侣。
感情太激烈,各种生活琐事会让双方内心stress升高,不容易长久
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m*h
10
等10个包子

ID。

【在 c*******e 的大作中提到】
: 請沒有領到包子的ID報道,“並且註明在第幾頁奔的”(不註明就要排後面拿咯)
: 閃的ID如果已經刪除也可以報道,群衆的眼睛是雪亮的。尤其我版有不少記憶超群的ID。
: 本貼是方便斑竹發包子用。
: 每版每天版上發的包子是有限度的,所以今天沒有領到的請少安毋躁,明天就到賬了。

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l*1
11
Please try NYU Sun-lab free protocol links:
a)
//webdoc.nyumc.org/nyumc/files/sun-
lab/attachments/CPSC.Ch5.Genetic%20Manipulation%20of%20Stem%20Cells.pdf
b)
//webdoc.nyumc.org/nyumc/files/sun-lab/attachments/CPCB.ch19.Tissue%20Analysis.pdf
c)
//webdoc.nyumc.org/nyumc/files/sun-lab/attachments/CPMB.Ch.29.MousePhenotyping.pdf
plus alfa
//biology.hunter.cuny.edu/molecularbio/Class%20Materials%20Spring%202011%20BIol302/Lecture%2023/I
nducible%20Cre.pdf
and beta
//biologie.univ-mrs.fr/upload/p102/Kwan2002.pdf

【在 l********s 的大作中提到】
: tamoxifen 用来做条件性敲出的。谢谢各位大侠啊!
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a*a
12
Ask your fridens who can acess chinese journals and make a photocopies to
you.
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t*9
13
玉成很有经验

【在 c*******o 的大作中提到】
: 这一对傻逼,小孩的包皮不能翻的,真够二的,性侵幼童呀。。。还好意思上来发贴。
:
: Baby

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b*n
14


【在 T**********t 的大作中提到】
: 其实老是best in one的生活,也是容易stressful, 婚姻未必长久
: 最好双方都是natural in her/him self, 两个在一起的时候,都可以自然放松,这就
: 是最好的婚姻伴侣。
: 感情太激烈,各种生活琐事会让双方内心stress升高,不容易长久

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c*e
15
O_O
哦,對哦。破狗娘我給忘了。
10個包子發了

【在 m***h 的大作中提到】
: 等10个包子
:
: ID。

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S*9
16
你是成鼠做还是D1,还是妊娠母鼠?
这个很容易,不要跪求,说说条件吧
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l*5
17
让国内的朋友帮你吧, 下载文章要花钱的
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c*o
18
玉成,你小时候是不是被翻过?

玉成很有经验

【在 t****9 的大作中提到】
: 玉成很有经验
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t*8
19
我,还没收到包子

ID。

【在 c*******e 的大作中提到】
: 請沒有領到包子的ID報道,“並且註明在第幾頁奔的”(不註明就要排後面拿咯)
: 閃的ID如果已經刪除也可以報道,群衆的眼睛是雪亮的。尤其我版有不少記憶超群的ID。
: 本貼是方便斑竹發包子用。
: 每版每天版上發的包子是有限度的,所以今天沒有領到的請少安毋躁,明天就到賬了。

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z*u
20
Tamoxifen拿corn oil 配成20mg/ml 浓度。然后每天给成鼠注射4mg IP. 成鼠对此表示
无压力。情绪稳定。有的protocol还拿酒精稀释。我的经验是那样经常会把老鼠打死。

【在 l********s 的大作中提到】
: tamoxifen 用来做条件性敲出的。谢谢各位大侠啊!
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g*e
21
多谢二位回答.
不搜不知道, 一搜, 自己的烂文章比自己想象的要好啊.

【在 l******5 的大作中提到】
: 让国内的朋友帮你吧, 下载文章要花钱的
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s*e
22
哎呀,这个老公很不幸呀
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c*e
23
註明第幾頁奔
這個方便帕拉過了午夜第二輪包子
白天已經把8號的限額用掉了

【在 t*****8 的大作中提到】
: 我,还没收到包子
:
: ID。

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n*k
24
Tamoxifen拿corn oil 配成20mg/ml 浓度。然后每天给成鼠注射4mg IP. 成鼠对此表
示无压力。情绪稳定。
How many days can you inject without killing them? how old are the mice? i
am trying to get your dosing(ours are at between 150mg-180mg/kg)
有的protocol还拿酒精稀释。我的经验是那样经常会把老鼠打死。
Yes, with this one, at our dose, the mice feel the stress after 3 days and
cannot tolerate more than 6 days...lethality could be up to 20-30% with 6-7
doses...
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m*h
25
bouns奔一群帅哥, dogs need jobs!
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S*9
26
我是那ethol溶解,然后sunflower oil稀释10倍。
每天是1mg, 连续10天。老鼠在3-4天有点精神不是很好。
如果是3mg/d。老鼠在3天以后很容易死。
1mg/d x 5天我们的target基因deletion大概是90-93%, 如果是10天就可以到97-99%之
间。
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P*o
27
我这就去发版面包子
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l*s
28
谢谢大侠!!! 好人有好报!

20Analysis.pdf
MousePhenotyping.pdf
20BIol302/Lecture%2023/I

【在 l**********1 的大作中提到】
: Please try NYU Sun-lab free protocol links:
: a)
: //webdoc.nyumc.org/nyumc/files/sun-
: lab/attachments/CPSC.Ch5.Genetic%20Manipulation%20of%20Stem%20Cells.pdf
: b)
: //webdoc.nyumc.org/nyumc/files/sun-lab/attachments/CPCB.ch19.Tissue%20Analysis.pdf
: c)
: //webdoc.nyumc.org/nyumc/files/sun-lab/attachments/CPMB.Ch.29.MousePhenotyping.pdf
: plus alfa
: //biology.hunter.cuny.edu/molecularbio/Class%20Materials%20Spring%202011%20BIol302/Lecture%2023/I

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t*u
29
这三八过的很不爽
破狗娘奔了?露脸的??!!!
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l*s
30
先做成鼠,实验室买的是 tamoxifen-citrate 注射的。估计这个只能feed,不能注射
谢过这位大哥了!

【在 S******9 的大作中提到】
: 你是成鼠做还是D1,还是妊娠母鼠?
: 这个很容易,不要跪求,说说条件吧

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c*e
31
恩,奔了
除了比较小以外基本符合我二不要三要的要求。。。
cft大米娘,hiahiahiahia

【在 t*****u 的大作中提到】
: 这三八过的很不爽
: 破狗娘奔了?露脸的??!!!

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l*s
32
非常有用!,谢谢,我看很多是酒精稀释的。 我们暂买的是 tamoxifen-citrate
非常感谢您!

7

【在 n********k 的大作中提到】
: Tamoxifen拿corn oil 配成20mg/ml 浓度。然后每天给成鼠注射4mg IP. 成鼠对此表
: 示无压力。情绪稳定。
: How many days can you inject without killing them? how old are the mice? i
: am trying to get your dosing(ours are at between 150mg-180mg/kg)
: 有的protocol还拿酒精稀释。我的经验是那样经常会把老鼠打死。
: Yes, with this one, at our dose, the mice feel the stress after 3 days and
: cannot tolerate more than 6 days...lethality could be up to 20-30% with 6-7
: doses...

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l*s
33
谢谢您!,
我也想做primary cell的,最近老板催的紧。非常有用,收下啦!

【在 S******9 的大作中提到】
: 我是那ethol溶解,然后sunflower oil稀释10倍。
: 每天是1mg, 连续10天。老鼠在3-4天有点精神不是很好。
: 如果是3mg/d。老鼠在3天以后很容易死。
: 1mg/d x 5天我们的target基因deletion大概是90-93%, 如果是10天就可以到97-99%之
: 间。

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l*s
34
我想把 tamoxifen-citrate 溶解在水中,给老鼠
tramoxifen-citrate 经过stomach 后,可以分解成citrate 和tamoxifen-free base。
不过剂量还没找到,呵呵,打算用食物比例算算,您有什么建议吗?

【在 S******9 的大作中提到】
: 我是那ethol溶解,然后sunflower oil稀释10倍。
: 每天是1mg, 连续10天。老鼠在3-4天有点精神不是很好。
: 如果是3mg/d。老鼠在3天以后很容易死。
: 1mg/d x 5天我们的target基因deletion大概是90-93%, 如果是10天就可以到97-99%之
: 间。

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z*u
35
我就是拿Sigma的corn oil 20mg/ml就是最大溶解度了。 37度下溶解。然后冻存。剂量
4mg/30g ..差不多就是150mg/kg. 老鼠年龄3周以上。 一般打2-4天。看Cre的效率了。
有的cre很好,一天就够。想要保证高效的就打4天。so far还不错。没打过超过4天的
还。
酒精稀释感觉坏处很大。 一来把tamoxifen稀释了,注射volume得提高,再来酒精打到
腹膜下反应很大,有好些老鼠甚至当场死亡。

7

【在 n********k 的大作中提到】
: Tamoxifen拿corn oil 配成20mg/ml 浓度。然后每天给成鼠注射4mg IP. 成鼠对此表
: 示无压力。情绪稳定。
: How many days can you inject without killing them? how old are the mice? i
: am trying to get your dosing(ours are at between 150mg-180mg/kg)
: 有的protocol还拿酒精稀释。我的经验是那样经常会把老鼠打死。
: Yes, with this one, at our dose, the mice feel the stress after 3 days and
: cannot tolerate more than 6 days...lethality could be up to 20-30% with 6-7
: doses...

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l*1
36
De rien.
plus
Bouvier J and Cheng JG.
Recombineering-based procedure for creating Cre/loxP conditional knockouts
in the mouse. (2009)
Curr Protoc Mol Biol. Chapter 23:Unit 23.13.
//www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19170029

【在 l********s 的大作中提到】
: 谢谢大侠!!! 好人有好报!
:
: 20Analysis.pdf
: MousePhenotyping.pdf
: 20BIol302/Lecture%2023/I

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S*9
37
这个我也做过,灌胃,每天是3mg,连续5天。这个deletion效果一样。
不能加到水里喂,效果不好。
有那种和食物做到一起的,但是好像很贵,我老板以前舍不得出钱,看见有一个实验室喂含在食物
里面的,每天是1mg,喂42天,我们没买这个食物,结果我给老鼠灌胃了42天,最后还是效果不
好,最后发现是那个Cre的老鼠不work。

base。

【在 l********s 的大作中提到】
: 我想把 tamoxifen-citrate 溶解在水中,给老鼠
: tramoxifen-citrate 经过stomach 后,可以分解成citrate 和tamoxifen-free base。
: 不过剂量还没找到,呵呵,打算用食物比例算算,您有什么建议吗?

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b*n
38
搭车问:
Topical application真的能只在涂抹的地方敲除吗?
有的说可以,效果很好;有的说这种情况tamoxifen需要转运到肝脏代谢然后分布全身
,其实跟IP的效果差不多。

【在 l********s 的大作中提到】
: tamoxifen 用来做条件性敲出的。谢谢各位大侠啊!
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