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请教质粒dimer问题

请教质粒dimer问题# Biology - 生物学

b*t2012-06-01 07:06

1 楼

g*j2012-06-01 07:06

2 楼

正在构建一个质粒，挺简单，就是把这个质粒上的gfp换成同样大小的dsRed,质粒的骨
干不变。
连接，转化以后，有不少菌落。
第一天挑了4个菌落，长在LB里，amp浓度100ug/ml.结果只长了一个。试剂盒提质粒，
solution3 以后离心，结果上清非常浑浊，白色的东西离不下去。继续做，提完，跑胶
，没质粒。
第二天，又挑了4个菌落，长在LB里，amp浓度50ug/ml。4个都长了，试剂盒提质粒。同
样，solution3 以后离心，结果上清非常浑浊，白色的东西离不下去。继续做，提完，
跑胶，都有质粒。质粒大小和原质粒dimer 一样大。单切，跑胶，3个切不开，1个切开
后和原质粒单切大小一样。更加确定是形成dimer了。
问题一，为啥会形成dimer呢？
问题二，我是重新做连接，转化呢？还是把那个能切开的切一下，然后稀释，连接，再
转化呢？

i*e2012-06-01 07:06

3 楼

我儿子估计都不敢吃＞＜

【在 b*******t 的大作中提到】

e*s2012-06-01 07:06

4 楼

觉得你提的更可能是Trash，不是你的目标质粒。
重新来吧。

【在 g***j 的大作中提到】

: 正在构建一个质粒，挺简单，就是把这个质粒上的gfp换成同样大小的dsRed,质粒的骨
: 干不变。
: 连接，转化以后，有不少菌落。
: 第一天挑了4个菌落，长在LB里，amp浓度100ug/ml.结果只长了一个。试剂盒提质粒，
: solution3 以后离心，结果上清非常浑浊，白色的东西离不下去。继续做，提完，跑胶
: ，没质粒。
: 第二天，又挑了4个菌落，长在LB里，amp浓度50ug/ml。4个都长了，试剂盒提质粒。同
: 样，solution3 以后离心，结果上清非常浑浊，白色的东西离不下去。继续做，提完，
: 跑胶，都有质粒。质粒大小和原质粒dimer 一样大。单切，跑胶，3个切不开，1个切开
: 后和原质粒单切大小一样。更加确定是形成dimer了。