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求教,老鼠基因Q-PCR 引物设计,
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求教,老鼠基因Q-PCR 引物设计,# Biology - 生物学
c*y
1
大家铁锅都去哪里买?
谢谢!
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c*s
2
剩余给本年度EB2可用名额,奥本的原话是"OVER 16000"
同时祝贺火箭兄喜得绿卡!!
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I*a
3
如图,一般都是在exons 里面吗?后面有一大段non-synonymous coding 可以考虑吗?
多谢
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R*s
4
中国店
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u*r
5
!

【在 c**s 的大作中提到】
: 剩余给本年度EB2可用名额,奥本的原话是"OVER 16000"
: 同时祝贺火箭兄喜得绿卡!!

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I*a
6
我这个问题是不是过于弱智了?

【在 I***a 的大作中提到】
: 如图,一般都是在exons 里面吗?后面有一大段non-synonymous coding 可以考虑吗?
: 多谢

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c*9
7
沃尔玛。但是没有盖子。后来又自己配了个盖子。
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t*c
8
pai
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f*f
9
你设计primer的目的是什么?假如要半定量mRNA的话,引物最好跨过两个不同的exon,
这样不至于以基因组为模板pcr。

【在 I***a 的大作中提到】
: 如图,一般都是在exons 里面吗?后面有一大段non-synonymous coding 可以考虑吗?
: 多谢

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p*a
10
please detail. Thanks.

【在 c**s 的大作中提到】
: 剩余给本年度EB2可用名额,奥本的原话是"OVER 16000"
: 同时祝贺火箭兄喜得绿卡!!

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I*a
11
多谢,
比较两组老鼠一些基因的表达差异,
我本想把引物放在离mRNA尾巴的200bp左右,但是不知道有些区域是不是转录后被剪切
掉了
以前做细菌的,对高等生物的这些实验细节不太清楚。
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B*h
12
VB呢?探口风了吗?
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f*f
13
比较基因的表达差异你是指mRNA水平?与原核不同,转录mrna会有剪切。
因为你提取RNA做qPCR时,有时不可避免的混入微量的基因组DNA,为避免检测干扰,一
条引物分别与不同的exon匹配,减少干扰。有专门的qPCR软件,比如免费的perlprimer
就可以,粘贴mRNA和基因组序列就可以了,引物对会有打分。

【在 I***a 的大作中提到】
: 多谢,
: 比较两组老鼠一些基因的表达差异,
: 我本想把引物放在离mRNA尾巴的200bp左右,但是不知道有些区域是不是转录后被剪切
: 掉了
: 以前做细菌的,对高等生物的这些实验细节不太清楚。

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f*c
14
比上次的原话多了1000

【在 c**s 的大作中提到】
: 剩余给本年度EB2可用名额,奥本的原话是"OVER 16000"
: 同时祝贺火箭兄喜得绿卡!!

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I*a
15
一般怎么考虑剪切这个问题呢?
特别是一些exons 的选择
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H*i
16
thank you! That means 2008PD will get cards, and January to February 2009
PD will too.
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f*f
17
首先ncbi上找到该基因 基因组序列和mRNA序列,
两个引物之间的intron越长越好。引物在exon和intron的边界最好,mRNA amplicon长
度我习惯设定100bp左右。
你可以下载一个perlprimer,有real-time pcr的选项,操作界面比较简单,你选择一
个引物看看在genomic/mRNA的哪个位置就应该大致明白了。

【在 I***a 的大作中提到】
: 一般怎么考虑剪切这个问题呢?
: 特别是一些exons 的选择

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d*y
18
就是说,已经开始用SO了?
如果这样4月VB最多前进一个月。

【在 c**s 的大作中提到】
: 剩余给本年度EB2可用名额,奥本的原话是"OVER 16000"
: 同时祝贺火箭兄喜得绿卡!!

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s*r
19
去harvard的primerbank里找你的基因,老鼠的很多都有,一个基因会有不止一对,有
的还有validation data,自己试一下挑最好用的

【在 I***a 的大作中提到】
: 如图,一般都是在exons 里面吗?后面有一大段non-synonymous coding 可以考虑吗?
: 多谢

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h*y
20
谢谢谢谢。希望俺能赶上这波
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c*s
21
上次是讲上半年给EB1多少名额了。

【在 f*c 的大作中提到】
: 比上次的原话多了1000
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p*a
22
So positive?

【在 H******i 的大作中提到】
: thank you! That means 2008PD will get cards, and January to February 2009
: PD will too.

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B*g
23
能批到哪年?大包子,请版务match
Beijing,您好:
您转给 cnus,现金(伪币):100,收取手续费:1
同时附加了如下留言给 cnus.
最新名额消息

【在 c**s 的大作中提到】
: 剩余给本年度EB2可用名额,奥本的原话是"OVER 16000"
: 同时祝贺火箭兄喜得绿卡!!

avatar
l*o
24
啊,June 09pd,FY2012绿不了?
啊!!!!
avatar
c*s
25
说是下午,或明天发布。反正已经定了,快了,没什么好问的。

【在 B*********h 的大作中提到】
: VB呢?探口风了吗?
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p*a
26
are you dreamer312's MJ?

【在 d*********y 的大作中提到】
: 就是说,已经开始用SO了?
: 如果这样4月VB最多前进一个月。

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f*i
27
都藏在这等消息呢?

【在 H******i 的大作中提到】
: thank you! That means 2008PD will get cards, and January to February 2009
: PD will too.

avatar
u*r
28
thanks

【在 c**s 的大作中提到】
: 说是下午,或明天发布。反正已经定了,快了,没什么好问的。
avatar
a*r
29
什么意思,从eb1过来的。

【在 c**s 的大作中提到】
: 剩余给本年度EB2可用名额,奥本的原话是"OVER 16000"
: 同时祝贺火箭兄喜得绿卡!!

avatar
f*c
30
我记得上次Helsinki得的原话说是剩余名额大概15000,我可能记错了,不过也差不多

【在 c**s 的大作中提到】
: 上次是讲上半年给EB1多少名额了。
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c*s
31
真不好意思,BEIJING MM都送几次这么大包子了,都拿得不好意思了。非常感谢。
avatar
B*g
32
财政年?

【在 H******i 的大作中提到】
: thank you! That means 2008PD will get cards, and January to February 2009
: PD will too.

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B*h
33

哦,谢谢。bless

【在 c**s 的大作中提到】
: 说是下午,或明天发布。反正已经定了,快了,没什么好问的。
avatar
s*d
34
猪外婆淡定

【在 l*******o 的大作中提到】
: 啊,June 09pd,FY2012绿不了?
: 啊!!!!

avatar
p*a
35
any clue? moderate or aggressive move?

【在 c**s 的大作中提到】
: 说是下午,或明天发布。反正已经定了,快了,没什么好问的。
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l*7
36
OVER 16000多少啊
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Y*L
37
So this means PD after May 2010 will get card after Oct. 2013?

【在 H******i 的大作中提到】
: thank you! That means 2008PD will get cards, and January to February 2009
: PD will too.

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s*l
38
this is for entire EB2 category including ROW, right?

【在 c**s 的大作中提到】
: 剩余给本年度EB2可用名额,奥本的原话是"OVER 16000"
: 同时祝贺火箭兄喜得绿卡!!

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l*o
39
哎,等着换工作呢,烦死现在的老板了。我都快抑郁了。

【在 s**d 的大作中提到】
: 猪外婆淡定
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p*a
40
Oct. 2013 or Oct. 2012?

【在 Y**L 的大作中提到】
: So this means PD after May 2010 will get card after Oct. 2013?
avatar
a*a
41
ROW 听到这消息还不得拼命申请EB2 阿。不过现在申请也来不及了。
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c*s
42
感谢飞猪和老赫带来真材实料的消息
期待中
avatar
c*s
43
这么悲催?

【在 p*****a 的大作中提到】
: Oct. 2013 or Oct. 2012?
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c*m
44
avatar
m*g
45
那2010年1月的PD,今年能绿吗?

【在 c**s 的大作中提到】
: 剩余给本年度EB2可用名额,奥本的原话是"OVER 16000"
: 同时祝贺火箭兄喜得绿卡!!

avatar
B*h
46

你的头像?哈哈哈

【在 c*******s 的大作中提到】
: 感谢飞猪和老赫带来真材实料的消息
: 期待中

avatar
s*d
47
上班一直在灌水,老板不错

【在 l*******o 的大作中提到】
: 哎,等着换工作呢,烦死现在的老板了。我都快抑郁了。
avatar
c*s
48
我和老赫感觉差不多,会差点。2月交的,有些会运气差点,2008年应该差不多在
今年10月1前批完,09年可能有些幸运儿,不多。

【在 B*****g 的大作中提到】
: 能批到哪年?大包子,请版务match
: Beijing,您好:
: 您转给 cnus,现金(伪币):100,收取手续费:1
: 同时附加了如下留言给 cnus.
: 最新名额消息

avatar
i*d
49
猪哥,请教:
这里的16000是指什么?是指本财年第3,第4季度的?不应该包括前两季度的吧(就是O
说的给出的30000)?

【在 c**s 的大作中提到】
: 剩余给本年度EB2可用名额,奥本的原话是"OVER 16000"
: 同时祝贺火箭兄喜得绿卡!!

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c*x
50
what about EB3
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c*m
51
我也快抑郁了!

【在 l*******o 的大作中提到】
: 哎,等着换工作呢,烦死现在的老板了。我都快抑郁了。
avatar
c*s
52
偶也耐不住寂寞了,换成猪头了,呵呵

【在 B*********h 的大作中提到】
:
: 你的头像?哈哈哈

avatar
a*a
53
还是你的猪头真材实料!!

【在 c*******s 的大作中提到】
: 感谢飞猪和老赫带来真材实料的消息
: 期待中

avatar
l*7
54
这么AGGRESSIVE?当然我也希望。
新财年开始是不是又该一个月最多前进两周啦? 不过09人倒是不多。

【在 m******g 的大作中提到】
: 那2010年1月的PD,今年能绿吗?
avatar
l*n
55
多谢,奉上双黄包.

【在 c**s 的大作中提到】
: 我和老赫感觉差不多,会差点。2月交的,有些会运气差点,2008年应该差不多在
: 今年10月1前批完,09年可能有些幸运儿,不多。

avatar
v*a
56
这对未来几个月的vb有什么影响么?

【在 H******i 的大作中提到】
: thank you! That means 2008PD will get cards, and January to February 2009
: PD will too.

avatar
Y*L
57
Oct. 2013. By Helsinki, January to February 2009 PD will get card this
fiscal year (Oct. 2012). By looking at PERM numbers, the PDs between 02/2009
and 05/2010 will get card in fiscal year of 2013. So PDs after May 2010
will be greened after Oct. 2013. Hope I'm wrong.

【在 p*****a 的大作中提到】
: Oct. 2013 or Oct. 2012?
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p*j
58
我只想交485拿AP, 什么时候拿绿卡倒是不关心。
前进10个月吧!
avatar
c*s
59
不包括,奥的预计会保守些,所以打2万给第三,第四季度是合理的。他说16000
就按16000来估计。

是O

【在 i****d 的大作中提到】
: 猪哥,请教:
: 这里的16000是指什么?是指本财年第3,第4季度的?不应该包括前两季度的吧(就是O
: 说的给出的30000)?

avatar
p*a
60
If so, why the VB will still advance this month? They have already had 1
year inventory

2009

【在 Y**L 的大作中提到】
: Oct. 2013. By Helsinki, January to February 2009 PD will get card this
: fiscal year (Oct. 2012). By looking at PERM numbers, the PDs between 02/2009
: and 05/2010 will get card in fiscal year of 2013. So PDs after May 2010
: will be greened after Oct. 2013. Hope I'm wrong.

avatar
c*s
61
thank you!

【在 l****n 的大作中提到】
: 多谢,奉上双黄包.
avatar
i*d
62
那等下个财年开始,不是就主攻09PD了?

【在 c**s 的大作中提到】
: 我和老赫感觉差不多,会差点。2月交的,有些会运气差点,2008年应该差不多在
: 今年10月1前批完,09年可能有些幸运儿,不多。

avatar
r*s
63
ryegrass,您好:
您转给 cnus,现金(伪币):100,收取手续费:1
avatar
H*i
64
Beijing也给我十个包子吧。

【在 c**s 的大作中提到】
: 我和老赫感觉差不多,会差点。2月交的,有些会运气差点,2008年应该差不多在
: 今年10月1前批完,09年可能有些幸运儿,不多。

avatar
i*n
65
应该是好消息吧,16000多吗?
avatar
Y*L
66
to calm us down a little bit? Who knows? CO is unpredictable.

【在 p*****a 的大作中提到】
: If so, why the VB will still advance this month? They have already had 1
: year inventory
:
: 2009

avatar
B*h
67

希望猪头带来好运

【在 c*******s 的大作中提到】
: 偶也耐不住寂寞了,换成猪头了,呵呵
avatar
c*s
68
thank you!

【在 r******s 的大作中提到】
: ryegrass,您好:
: 您转给 cnus,现金(伪币):100,收取手续费:1

avatar
c*s
69
恩,会很快,圣诞节前09年应该都有机会。形势不错。

【在 i****d 的大作中提到】
: 那等下个财年开始,不是就主攻09PD了?
avatar
i*d
70
多谢,看来形势不错啊。

【在 c**s 的大作中提到】
: 不包括,奥的预计会保守些,所以打2万给第三,第四季度是合理的。他说16000
: 就按16000来估计。
:
: 是O

avatar
l*o
71
呵呵,工作相对自由。给资本家辛辛苦苦的卖命。

【在 s**d 的大作中提到】
: 上班一直在灌水,老板不错
avatar
c*s
72
因为2,3月交的还没形成大量的有效需求。

【在 p*****a 的大作中提到】
: If so, why the VB will still advance this month? They have already had 1
: year inventory
:
: 2009

avatar
c*s
73
飞猪给预测下,10年6月份的马上出来的vb有多大概率能curent,还有13年能拿到绿卡
吗?

【在 c**s 的大作中提到】
: 恩,会很快,圣诞节前09年应该都有机会。形势不错。
avatar
p*a
74
Where is 1月's demand?
No demand will be generated until FY2012 visa number is used up.

【在 c**s 的大作中提到】
: 因为2,3月交的还没形成大量的有效需求。
avatar
i*d
75
嗯,加之09PD数量不算多,现在的形势的确是不错。
看来,现在是在季度性地用SO了?
不知道SO里EB1和EB2ROW的分布是什么样的。

【在 c**s 的大作中提到】
: 恩,会很快,圣诞节前09年应该都有机会。形势不错。
avatar
a*9
76
多谢,多谢.
avatar
l*l
77
I think it's 40k. Since 40k is more than 16k.
Please agree with me!
avatar
c*s
78
我真不知道,其实客观讲绿卡本来就差不多4年,过去不搞27%的季度性SO,所以导
致多数人多等半年,甚至更久的(这是奥一个人造成的)。现在大家等4年是比较不错
的形势,当然不少人因为VB大跳,想着两年三年内就批,我觉得有点过于乐观。经济形
势不好,从4年再缩短到3年半是非常有可能。下个月VB我真不知道,看2,3月交的
处理速度。

【在 c*******s 的大作中提到】
: 飞猪给预测下,10年6月份的马上出来的vb有多大概率能curent,还有13年能拿到绿卡
: 吗?

avatar
N*r
79
现在连Q2 都还没完,44K就剩下1/3了?
不过要是有足够的SO,加上这16K,08PD应该可以大致处理完。这已经是不错的结果
了,老实说。
不过还是希望能在4月进入09的PD。
avatar
B*g
80
这个太乐观了

【在 N*******r 的大作中提到】
: 现在连Q2 都还没完,44K就剩下1/3了?
: 不过要是有足够的SO,加上这16K,08PD应该可以大致处理完。这已经是不错的结果
: 了,老实说。
: 不过还是希望能在4月进入09的PD。

avatar
j*s
81
请问等4年是从什么时候算起?
谢了

【在 c**s 的大作中提到】
: 我真不知道,其实客观讲绿卡本来就差不多4年,过去不搞27%的季度性SO,所以导
: 致多数人多等半年,甚至更久的(这是奥一个人造成的)。现在大家等4年是比较不错
: 的形势,当然不少人因为VB大跳,想着两年三年内就批,我觉得有点过于乐观。经济形
: 势不好,从4年再缩短到3年半是非常有可能。下个月VB我真不知道,看2,3月交的
: 处理速度。

avatar
p*a
82
PD

【在 j********s 的大作中提到】
: 请问等4年是从什么时候算起?
: 谢了

avatar
c*s
83
从工作到现在我已经四年多了,唉。。。。

【在 j********s 的大作中提到】
: 请问等4年是从什么时候算起?
: 谢了

avatar
j*s
84
这么久??

【在 p*****a 的大作中提到】
: PD
avatar
p*a
85
so from now?

【在 j********s 的大作中提到】
: 这么久??
avatar
N*r
86
现在好像是2-3个月的处理Cycle, 12月交的在2月开始见绿;现在3月,就有1月交的申
请开始见绿。
唯一担心的是没了Visa Number。那就万事皆休。

【在 B*****g 的大作中提到】
: 这个太乐观了
avatar
l*l
87
说实话,很多人就是关心什么时候交。老婆等着上班,自己不想怕失业而已。

【在 c**s 的大作中提到】
: 我真不知道,其实客观讲绿卡本来就差不多4年,过去不搞27%的季度性SO,所以导
: 致多数人多等半年,甚至更久的(这是奥一个人造成的)。现在大家等4年是比较不错
: 的形势,当然不少人因为VB大跳,想着两年三年内就批,我觉得有点过于乐观。经济形
: 势不好,从4年再缩短到3年半是非常有可能。下个月VB我真不知道,看2,3月交的
: 处理速度。

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c*s
88
刚批了一个2008年12月的幸运儿,其实12月交的至少一半还没批。

【在 N*******r 的大作中提到】
: 现在好像是2-3个月的处理Cycle, 12月交的在2月开始见绿;现在3月,就有1月交的申
: 请开始见绿。
: 唯一担心的是没了Visa Number。那就万事皆休。

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i*d
89
嗯,现在CIS的处理速度明显上去了。visa number的短缺就越发显现出来了。

【在 N*******r 的大作中提到】
: 现在好像是2-3个月的处理Cycle, 12月交的在2月开始见绿;现在3月,就有1月交的申
: 请开始见绿。
: 唯一担心的是没了Visa Number。那就万事皆休。

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c*s
90
是,这个理解,本来EB2是都可以放开的,奥这个人都得拿出来鞭尸

【在 l****l 的大作中提到】
: 说实话,很多人就是关心什么时候交。老婆等着上班,自己不想怕失业而已。
avatar
c*s
91
他们会控制,虽然VB还在,突然停了不批,过去发生过几次。

【在 i****d 的大作中提到】
: 嗯,现在CIS的处理速度明显上去了。visa number的短缺就越发显现出来了。
avatar
p*j
92
我只想交485拿AP而已
avatar
x*u
93
我也是只想交了然后耐心地等待了
avatar
c*l
94
Thanks cnus!
Helsinki, could you explain your prediction?

【在 H******i 的大作中提到】
: thank you! That means 2008PD will get cards, and January to February 2009
: PD will too.

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M*U
95
10年3月的什么时候能拿卡啊?痛苦啊!老板不给力

恩,会很快,圣诞节前09年应该都有机会。形势不错。
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【在 c**s 的大作中提到】
: 恩,会很快,圣诞节前09年应该都有机会。形势不错。
avatar
c*s
96
有些同学造我的谣,我感到很不理解,我什么时候预测四月VB了?

【在 c**s 的大作中提到】
: 说是下午,或明天发布。反正已经定了,快了,没什么好问的。
avatar
B*g
97
以后有消息就发给我一个人,拿包子了事,嘿嘿

【在 c**s 的大作中提到】
: 有些同学造我的谣,我感到很不理解,我什么时候预测四月VB了?
avatar
i*d
98
怕的就是这么么。
还有个问题,如果VB cut off date比较靠后,CIS只管批,会不会发生批出去的绿卡超
过法定限额的事情?我好像在哪里看到过...?

【在 c**s 的大作中提到】
: 他们会控制,虽然VB还在,突然停了不批,过去发生过几次。
avatar
i*d
99
输不起么

【在 c**s 的大作中提到】
: 有些同学造我的谣,我感到很不理解,我什么时候预测四月VB了?
avatar
M*d
100
别太在意。感谢你一直以来为大家所做的努力。

【在 c**s 的大作中提到】
: 有些同学造我的谣,我感到很不理解,我什么时候预测四月VB了?
avatar
c*s
101
绝对不会,USCIS有每天统计一年累计批多少了,批到满的时候会完全停下来,不批一
个案子,这是可控的,那时候就算VB到的,也没人得到批准。

【在 i****d 的大作中提到】
: 怕的就是这么么。
: 还有个问题,如果VB cut off date比较靠后,CIS只管批,会不会发生批出去的绿卡超
: 过法定限额的事情?我好像在哪里看到过...?

avatar
c*s
102
倒不是,这时候VB预测真的没什么意义,因为库存已经很够。

【在 i****d 的大作中提到】
: 输不起么
avatar
i*d
103
I see, 谢谢指教。
那么交了485的同学,实际现在就在比谁的运气好了!一旦停下来,就只能等下个财年
了。

【在 c**s 的大作中提到】
: 绝对不会,USCIS有每天统计一年累计批多少了,批到满的时候会完全停下来,不批一
: 个案子,这是可控的,那时候就算VB到的,也没人得到批准。

avatar
c*s
104
恩,是这样。人说一命二运三风水,我还满信,虽然努力也很重要。名额已经用了很多
了,如果以TRACKITT数据为样本,EB2今年已经批了4万三了,虽然奥说是给了三万多。
不过也就差半年左右,如果10月新财政年度还执行27%

【在 i****d 的大作中提到】
: I see, 谢谢指教。
: 那么交了485的同学,实际现在就在比谁的运气好了!一旦停下来,就只能等下个财年
: 了。

avatar
m*t
105
PD 02/09的小激动了一下

【在 H******i 的大作中提到】
: thank you! That means 2008PD will get cards, and January to February 2009
: PD will too.

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w*c
106
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