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问个克隆问题
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问个克隆问题# Biology - 生物学
F*K
1 楼
最近克隆做不出，怀疑是酶切的问题。
现在用一个以前装好的质粒来测试，DNA是用同样的酶A和B切开后装进去的
现在问题是A和B单独反应都能切开质粒（超螺旋消失），但共同作用却切不出insert，
见附图。两个酶要求的Buffer和反应条件是一样的。请问这个结果该如何解释？谢谢
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F*K
2 楼


【在 F*K 的大作中提到】
: 最近克隆做不出，怀疑是酶切的问题。
: 现在用一个以前装好的质粒来测试，DNA是用同样的酶A和B切开后装进去的
: 现在问题是A和B单独反应都能切开质粒（超螺旋消失），但共同作用却切不出insert，
: 见附图。两个酶要求的Buffer和反应条件是一样的。请问这个结果该如何解释？谢谢
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h*r
3 楼
其实没有装进去？AB酶切位点还是靠得很近？插入片段太小？MS双切的载体变小了？小
片段跑走了？
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F*K
4 楼
我核实过这个质粒的测序结果，序列包括酶切位点在内没有问题。
质粒5.6KB，insert 2.2kb。

【在 h**********r 的大作中提到】
: 其实没有装进去？AB酶切位点还是靠得很近？插入片段太小？MS双切的载体变小了？小
: 片段跑走了？
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s*r
5 楼
A or B单切的话是多大，7.8kb？跟空载体比过吗？

我核实过这个质粒的测序结果，序列包括酶切位点在内没有问题。
质粒5.6KB，insert 2.2kb。

【在 F*K 的大作中提到】
: 我核实过这个质粒的测序结果，序列包括酶切位点在内没有问题。
: 质粒5.6KB，insert 2.2kb。
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s*s
6 楼
neb上查过能一起切么？

【在 F*K 的大作中提到】
: 最近克隆做不出，怀疑是酶切的问题。
: 现在用一个以前装好的质粒来测试，DNA是用同样的酶A和B切开后装进去的
: 现在问题是A和B单独反应都能切开质粒（超螺旋消失），但共同作用却切不出insert，
: 见附图。两个酶要求的Buffer和反应条件是一样的。请问这个结果该如何解释？谢谢
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F*K
7 楼
从marker上不好判断。的确，应该在旁边加个空载体的。

【在 s******r 的大作中提到】
: A or B单切的话是多大，7.8kb？跟空载体比过吗？
:
: 我核实过这个质粒的测序结果，序列包括酶切位点在内没有问题。
: 质粒5.6KB，insert 2.2kb。
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