f*y
2 楼
早上打开微信圈看到表妹发了一条关于评论谢霆锋的网上截屏，大意是谢霆锋能接
受为两个不同男人生过孩子的王菲，却不能接受为他生过两个儿子的张柏芝。的确爱情
是自私的，若一个人不够爱你，无论你为他做什么，都只是徒劳，爱从来不因感动而善
终。看到表妹对于这个评论的态度是现在的她要为自己负责，作为姐姐看到刚大学毕业
一年多的表妹有如此的人生态度还是很为她开心的。
那么促使我坐在这里写下这些文字的冲动只源于想谈谈自己对于王菲的个人感受，
而对于锋菲恋其实不想发表什么感想，在我眼里只是两个相爱的男女此刻又在一起了而
以，不管他们是心里一直有对方还是彼此单身相遇后又激起爱情的火花，总之此刻的结
果是他们相爱并在一起。当然我不知道此前与他们有过交集的男女此刻会有怎样的感想
，虽然舆论世俗的伤害不可避免，但我想真正爱他们的人会理解他们亦会祝福他们，而
我的这份祝福也只是纯粹对于爱情的祝福。对于谢霆锋我的了解并不够多，而王菲其实
一直是我比较欣赏的对象，在我眼里她一直是个豁达、洒脱又真性情的女子，简单的从
来不因世俗而改变过自己，是一个真正由内而外的独立而又活出自我的女子。而在我看
来她的世界也始终是她自己一个人的，或许这也是这么多男人、女人爱她和为她心甘情
愿的原因吧。还记得曾经看过一个李亚鹏的专访，他谈到：“世人看王菲太过复杂是因
为王菲太过简单。“或许正是这份简单才是王菲真正的魅力所在吧，她可以为自己所坚
持的价值付出所有、不顾一切，试问在娱乐圈这样一个鱼龙混杂是非之地谁又能有她如
此这般的勇气和洒脱，就算是娱乐圈之外这样的女子亦是少之又少，而所有的一切在她
眼里和内心不过都是如此的风淡云轻和顺其自然。亦还记得学生时期看到一篇关于王菲
为窦唯降下自己天后的屈尊、放弃如火如荼的事业而一起过柴米油盐、刷马桶的文章，
或许简单的爱和忠于自己内心的感受才是王菲心中存于这个世界唯一的金科玉律。还记
得与李亚鹏分手时的那一句微博：“这一世，夫妻缘尽至此，我还好你也保重。“如此
的洒脱与风淡云轻。而李亚鹏亦毫不掩饰自己对于这段走到尽头婚姻的遗憾和内心的失
落：“放手，是我唯一能为你做的，我的高中女生。“真正的爱就是如他所是，在这一
段情缘中李亚鹏是伟大的，而王菲亦是幸福的。
在我眼里王菲是简单的、纯粹的、至情至性的，但也是坚强的、冷静的、决绝的。
一直认为表面看似最为轻松和云淡风轻的人其实内心所承受的负担、煎熬或许是外人无
法想象的，而藏匿在她内心的那种无限感性和理性也定是常人无法理解和企及的。或许
一切也只是看上去很美，每个人的日子也都是一天天自己过出来的，谁也不曾体会她这
么多年是如何一步步坚持着走过来，但相信她一定是快乐的，无憾的。。。喜欢王菲和
王菲心中的那丝美好，那个随性的、自然的、怀揣童心、相信爱、相信一切、相信真善
美、忠于自我的大女孩。
每一个人都是独一无二的自己，王菲也不是任何人都可以模仿和学习的。她做自己
有她足够的资本和能力，她可以为自己所有的选择买单，所以一个真正成熟的人定是最
爱自己的。爱自己才能让更多的人来爱你，所以脚踏实地、学会珍惜，让自己变的足够
优秀，这样才能有更多的机会来选择自己的人生，也才能有机会爱更多的人。
受为两个不同男人生过孩子的王菲，却不能接受为他生过两个儿子的张柏芝。的确爱情
是自私的，若一个人不够爱你，无论你为他做什么，都只是徒劳，爱从来不因感动而善
终。看到表妹对于这个评论的态度是现在的她要为自己负责，作为姐姐看到刚大学毕业
一年多的表妹有如此的人生态度还是很为她开心的。
那么促使我坐在这里写下这些文字的冲动只源于想谈谈自己对于王菲的个人感受，
而对于锋菲恋其实不想发表什么感想，在我眼里只是两个相爱的男女此刻又在一起了而
以，不管他们是心里一直有对方还是彼此单身相遇后又激起爱情的火花，总之此刻的结
果是他们相爱并在一起。当然我不知道此前与他们有过交集的男女此刻会有怎样的感想
，虽然舆论世俗的伤害不可避免，但我想真正爱他们的人会理解他们亦会祝福他们，而
我的这份祝福也只是纯粹对于爱情的祝福。对于谢霆锋我的了解并不够多，而王菲其实
一直是我比较欣赏的对象，在我眼里她一直是个豁达、洒脱又真性情的女子，简单的从
来不因世俗而改变过自己，是一个真正由内而外的独立而又活出自我的女子。而在我看
来她的世界也始终是她自己一个人的，或许这也是这么多男人、女人爱她和为她心甘情
愿的原因吧。还记得曾经看过一个李亚鹏的专访，他谈到：“世人看王菲太过复杂是因
为王菲太过简单。“或许正是这份简单才是王菲真正的魅力所在吧，她可以为自己所坚
持的价值付出所有、不顾一切，试问在娱乐圈这样一个鱼龙混杂是非之地谁又能有她如
此这般的勇气和洒脱，就算是娱乐圈之外这样的女子亦是少之又少，而所有的一切在她
眼里和内心不过都是如此的风淡云轻和顺其自然。亦还记得学生时期看到一篇关于王菲
为窦唯降下自己天后的屈尊、放弃如火如荼的事业而一起过柴米油盐、刷马桶的文章，
或许简单的爱和忠于自己内心的感受才是王菲心中存于这个世界唯一的金科玉律。还记
得与李亚鹏分手时的那一句微博：“这一世，夫妻缘尽至此，我还好你也保重。“如此
的洒脱与风淡云轻。而李亚鹏亦毫不掩饰自己对于这段走到尽头婚姻的遗憾和内心的失
落：“放手，是我唯一能为你做的，我的高中女生。“真正的爱就是如他所是，在这一
段情缘中李亚鹏是伟大的，而王菲亦是幸福的。
在我眼里王菲是简单的、纯粹的、至情至性的，但也是坚强的、冷静的、决绝的。
一直认为表面看似最为轻松和云淡风轻的人其实内心所承受的负担、煎熬或许是外人无
法想象的，而藏匿在她内心的那种无限感性和理性也定是常人无法理解和企及的。或许
一切也只是看上去很美，每个人的日子也都是一天天自己过出来的，谁也不曾体会她这
么多年是如何一步步坚持着走过来，但相信她一定是快乐的，无憾的。。。喜欢王菲和
王菲心中的那丝美好，那个随性的、自然的、怀揣童心、相信爱、相信一切、相信真善
美、忠于自我的大女孩。
每一个人都是独一无二的自己，王菲也不是任何人都可以模仿和学习的。她做自己
有她足够的资本和能力，她可以为自己所有的选择买单，所以一个真正成熟的人定是最
爱自己的。爱自己才能让更多的人来爱你，所以脚踏实地、学会珍惜，让自己变的足够
优秀，这样才能有更多的机会来选择自己的人生，也才能有机会爱更多的人。
Y*X
3 楼
大家好,我有一个RDRP,在大约2-4mM Mg2+的浓度下有polymerase的活性.现在我们做了
很多突变,想确定镁离子的结合位点.请问下大家有没有什么好的方法能够检测蛋白与镁
离子相互作用或者结合常数的. 这个结合的KD估计在mM级或者几百uM级.
很多突变,想确定镁离子的结合位点.请问下大家有没有什么好的方法能够检测蛋白与镁
离子相互作用或者结合常数的. 这个结合的KD估计在mM级或者几百uM级.
t*e
4 楼
赞细心体会孕育的快乐。
【在 z*********n 的大作中提到】
: 不错啊，看来今年真的要丰收了
: 仔细看黄瓜西葫芦，每个分叉那都小小的同时有公花母花的微小雏形
: 再过几个礼拜估计就能结了，哈哈
【在 z*********n 的大作中提到】
: 不错啊，看来今年真的要丰收了
: 仔细看黄瓜西葫芦，每个分叉那都小小的同时有公花母花的微小雏形
: 再过几个礼拜估计就能结了，哈哈
B*j
5 楼
在我眼里，王菲的实力远没有她被吹的那么高。没听过她的演唱会，可是她最近两次在
春晚的表现实在是卡拉ok水平。
在我眼里，王菲是一个对感情和对家庭都很没有责任感的人。说好听了，是性情中人。
不过相对于白莲花董洁和姚晨，王菲的处事还是要好太多。好歹每次真爱来临，都会把
前一段结束。
【在 f****y 的大作中提到】
: 早上打开微信圈看到表妹发了一条关于评论谢霆锋的网上截屏，大意是谢霆锋能接
: 受为两个不同男人生过孩子的王菲，却不能接受为他生过两个儿子的张柏芝。的确爱情
: 是自私的，若一个人不够爱你，无论你为他做什么，都只是徒劳，爱从来不因感动而善
: 终。看到表妹对于这个评论的态度是现在的她要为自己负责，作为姐姐看到刚大学毕业
: 一年多的表妹有如此的人生态度还是很为她开心的。
: 那么促使我坐在这里写下这些文字的冲动只源于想谈谈自己对于王菲的个人感受，
: 而对于锋菲恋其实不想发表什么感想，在我眼里只是两个相爱的男女此刻又在一起了而
: 以，不管他们是心里一直有对方还是彼此单身相遇后又激起爱情的火花，总之此刻的结
: 果是他们相爱并在一起。当然我不知道此前与他们有过交集的男女此刻会有怎样的感想
: ，虽然舆论世俗的伤害不可避免，但我想真正爱他们的人会理解他们亦会祝福他们，而
春晚的表现实在是卡拉ok水平。
在我眼里，王菲是一个对感情和对家庭都很没有责任感的人。说好听了，是性情中人。
不过相对于白莲花董洁和姚晨，王菲的处事还是要好太多。好歹每次真爱来临，都会把
前一段结束。
【在 f****y 的大作中提到】
: 早上打开微信圈看到表妹发了一条关于评论谢霆锋的网上截屏，大意是谢霆锋能接
: 受为两个不同男人生过孩子的王菲，却不能接受为他生过两个儿子的张柏芝。的确爱情
: 是自私的，若一个人不够爱你，无论你为他做什么，都只是徒劳，爱从来不因感动而善
: 终。看到表妹对于这个评论的态度是现在的她要为自己负责，作为姐姐看到刚大学毕业
: 一年多的表妹有如此的人生态度还是很为她开心的。
: 那么促使我坐在这里写下这些文字的冲动只源于想谈谈自己对于王菲的个人感受，
: 而对于锋菲恋其实不想发表什么感想，在我眼里只是两个相爱的男女此刻又在一起了而
: 以，不管他们是心里一直有对方还是彼此单身相遇后又激起爱情的火花，总之此刻的结
: 果是他们相爱并在一起。当然我不知道此前与他们有过交集的男女此刻会有怎样的感想
: ，虽然舆论世俗的伤害不可避免，但我想真正爱他们的人会理解他们亦会祝福他们，而
l*1
6 楼
SPR可以做
h*b
7 楼
说好听了，是性情中人.......
b*y
8 楼
How big is your protein? If it is small, NMR is the best for a KD at your
specified range.
specified range.
Y*n
9 楼
笑死了，还真有天真的
早上打开微信圈看到表妹发了一条关于评论谢霆锋的网上截屏，大意是谢霆锋能接受为
两个不同男人生过孩子的王菲，却不能接受为他生过两个儿子的张柏芝。的确爱情是自
私的，若一个人不够爱你，........
【在 f****y 的大作中提到】
: 早上打开微信圈看到表妹发了一条关于评论谢霆锋的网上截屏，大意是谢霆锋能接
: 受为两个不同男人生过孩子的王菲，却不能接受为他生过两个儿子的张柏芝。的确爱情
: 是自私的，若一个人不够爱你，无论你为他做什么，都只是徒劳，爱从来不因感动而善
: 终。看到表妹对于这个评论的态度是现在的她要为自己负责，作为姐姐看到刚大学毕业
: 一年多的表妹有如此的人生态度还是很为她开心的。
: 那么促使我坐在这里写下这些文字的冲动只源于想谈谈自己对于王菲的个人感受，
: 而对于锋菲恋其实不想发表什么感想，在我眼里只是两个相爱的男女此刻又在一起了而
: 以，不管他们是心里一直有对方还是彼此单身相遇后又激起爱情的火花，总之此刻的结
: 果是他们相爱并在一起。当然我不知道此前与他们有过交集的男女此刻会有怎样的感想
: ，虽然舆论世俗的伤害不可避免，但我想真正爱他们的人会理解他们亦会祝福他们，而
早上打开微信圈看到表妹发了一条关于评论谢霆锋的网上截屏，大意是谢霆锋能接受为
两个不同男人生过孩子的王菲，却不能接受为他生过两个儿子的张柏芝。的确爱情是自
私的，若一个人不够爱你，........
【在 f****y 的大作中提到】
: 早上打开微信圈看到表妹发了一条关于评论谢霆锋的网上截屏，大意是谢霆锋能接
: 受为两个不同男人生过孩子的王菲，却不能接受为他生过两个儿子的张柏芝。的确爱情
: 是自私的，若一个人不够爱你，无论你为他做什么，都只是徒劳，爱从来不因感动而善
: 终。看到表妹对于这个评论的态度是现在的她要为自己负责，作为姐姐看到刚大学毕业
: 一年多的表妹有如此的人生态度还是很为她开心的。
: 那么促使我坐在这里写下这些文字的冲动只源于想谈谈自己对于王菲的个人感受，
: 而对于锋菲恋其实不想发表什么感想，在我眼里只是两个相爱的男女此刻又在一起了而
: 以，不管他们是心里一直有对方还是彼此单身相遇后又激起爱情的火花，总之此刻的结
: 果是他们相爱并在一起。当然我不知道此前与他们有过交集的男女此刻会有怎样的感想
: ，虽然舆论世俗的伤害不可避免，但我想真正爱他们的人会理解他们亦会祝福他们，而
e*s
10 楼
我会先试各种光谱的，比如看看Mg的加入会不会让蛋白的荧光(Trp)或者可见-UV光谱产
生变化，有变化，那就恭喜了，做Titration就好了。
另外不知道离子Mg会不会有比较好的光谱,比如Raman之类的，如果蛋白的光谱没有明显
变化，可以从金属的光谱来做。
【在 Y*X 的大作中提到】
: 大家好,我有一个RDRP,在大约2-4mM Mg2+的浓度下有polymerase的活性.现在我们做了
: 很多突变,想确定镁离子的结合位点.请问下大家有没有什么好的方法能够检测蛋白与镁
: 离子相互作用或者结合常数的. 这个结合的KD估计在mM级或者几百uM级.
生变化，有变化，那就恭喜了，做Titration就好了。
另外不知道离子Mg会不会有比较好的光谱,比如Raman之类的，如果蛋白的光谱没有明显
变化，可以从金属的光谱来做。
【在 Y*X 的大作中提到】
: 大家好,我有一个RDRP,在大约2-4mM Mg2+的浓度下有polymerase的活性.现在我们做了
: 很多突变,想确定镁离子的结合位点.请问下大家有没有什么好的方法能够检测蛋白与镁
: 离子相互作用或者结合常数的. 这个结合的KD估计在mM级或者几百uM级.
u*e
11 楼
对四十几岁的人，有人呼她为“我的高中女生”不是赞誉之辞吧。依旧的是"高中女生
”的青春容颜，苗条体态，还是"高中女生”的简单头脑，盲目热情？"高中女生”的爱
情憧憬里会有对家庭，责任的思考吗？
”的青春容颜，苗条体态，还是"高中女生”的简单头脑，盲目热情？"高中女生”的爱
情憧憬里会有对家庭，责任的思考吗？
B*Q
12 楼
ITC can do it.
m*t
13 楼
李亚鹏这么明显的讽刺这些人都看不出。
天后婚内就跟真爱搞上了是板上钉钉得事情，只不过李亚鹏情商高，对这个老女人自己
滚蛋也没那么care而已。
那个“成人之美”，就是耳光扇得啪啪的。
【在 u******e 的大作中提到】
: 对四十几岁的人，有人呼她为“我的高中女生”不是赞誉之辞吧。依旧的是"高中女生
: ”的青春容颜，苗条体态，还是"高中女生”的简单头脑，盲目热情？"高中女生”的爱
: 情憧憬里会有对家庭，责任的思考吗？
天后婚内就跟真爱搞上了是板上钉钉得事情，只不过李亚鹏情商高，对这个老女人自己
滚蛋也没那么care而已。
那个“成人之美”，就是耳光扇得啪啪的。
【在 u******e 的大作中提到】
: 对四十几岁的人，有人呼她为“我的高中女生”不是赞誉之辞吧。依旧的是"高中女生
: ”的青春容颜，苗条体态，还是"高中女生”的简单头脑，盲目热情？"高中女生”的爱
: 情憧憬里会有对家庭，责任的思考吗？
m*z
14 楼
re.
Mg-binding UV不会有变化，intrinsic fluorescence值得一试。或者用能bind Mg的
fluoresent probe做competition titration.又或者equilibrium dialysis.ITC,NMR也
可以，但是不容易做，蛋白需要量也大。
还有一个值得一试的是：用Co先代替Mg作titration.Co binding通常伴随UV变化，然后
加Mg来compete with Co.这样数据分析也能得到Co/Mg binding constant.
【在 e****s 的大作中提到】
: 我会先试各种光谱的，比如看看Mg的加入会不会让蛋白的荧光(Trp)或者可见-UV光谱产
: 生变化，有变化，那就恭喜了，做Titration就好了。
: 另外不知道离子Mg会不会有比较好的光谱,比如Raman之类的，如果蛋白的光谱没有明显
: 变化，可以从金属的光谱来做。
Mg-binding UV不会有变化，intrinsic fluorescence值得一试。或者用能bind Mg的
fluoresent probe做competition titration.又或者equilibrium dialysis.ITC,NMR也
可以，但是不容易做，蛋白需要量也大。
还有一个值得一试的是：用Co先代替Mg作titration.Co binding通常伴随UV变化，然后
加Mg来compete with Co.这样数据分析也能得到Co/Mg binding constant.
【在 e****s 的大作中提到】
: 我会先试各种光谱的，比如看看Mg的加入会不会让蛋白的荧光(Trp)或者可见-UV光谱产
: 生变化，有变化，那就恭喜了，做Titration就好了。
: 另外不知道离子Mg会不会有比较好的光谱,比如Raman之类的，如果蛋白的光谱没有明显
: 变化，可以从金属的光谱来做。
w*l
15 楼
只针对第一段的评论：谢霆锋和王菲之间的苟苟且且还能上升到爱情的高度？哦，原来
真爱可以不在乎为两个男人生过孩子，那当初真爱死哪儿去了？当初真爱就接受不了闹
脾气、误会，各种各种，就非得拖另一个女人下水，还让另一个女人生了一堆孩子？哦
，还拖了两个男人下水，一共枉生了四个孩子。现在真爱就突然变得宽宏无比了？两个
自私的人，连婚姻、为人父母的责任都尽不到，没有资格谈爱情。不过是自私自恋、极
端追求自我的典型罢了。当然，世界上总有人是这样的，大家也就不说什么，但居然还
被推崇、被赞扬就让人无法忍受了。有多少名著和感人的小说描写曾经遗憾的？多学学
那里面对待错过的爱情的态度吧。做一个正直有责任感的人，才是真正地对曾经的爱情
的尊重。
【在 f****y 的大作中提到】
: 早上打开微信圈看到表妹发了一条关于评论谢霆锋的网上截屏，大意是谢霆锋能接
: 受为两个不同男人生过孩子的王菲，却不能接受为他生过两个儿子的张柏芝。的确爱情
: 是自私的，若一个人不够爱你，无论你为他做什么，都只是徒劳，爱从来不因感动而善
: 终。看到表妹对于这个评论的态度是现在的她要为自己负责，作为姐姐看到刚大学毕业
: 一年多的表妹有如此的人生态度还是很为她开心的。
: 那么促使我坐在这里写下这些文字的冲动只源于想谈谈自己对于王菲的个人感受，
: 而对于锋菲恋其实不想发表什么感想，在我眼里只是两个相爱的男女此刻又在一起了而
: 以，不管他们是心里一直有对方还是彼此单身相遇后又激起爱情的火花，总之此刻的结
: 果是他们相爱并在一起。当然我不知道此前与他们有过交集的男女此刻会有怎样的感想
: ，虽然舆论世俗的伤害不可避免，但我想真正爱他们的人会理解他们亦会祝福他们，而
真爱可以不在乎为两个男人生过孩子，那当初真爱死哪儿去了？当初真爱就接受不了闹
脾气、误会，各种各种，就非得拖另一个女人下水，还让另一个女人生了一堆孩子？哦
，还拖了两个男人下水，一共枉生了四个孩子。现在真爱就突然变得宽宏无比了？两个
自私的人，连婚姻、为人父母的责任都尽不到，没有资格谈爱情。不过是自私自恋、极
端追求自我的典型罢了。当然，世界上总有人是这样的，大家也就不说什么，但居然还
被推崇、被赞扬就让人无法忍受了。有多少名著和感人的小说描写曾经遗憾的？多学学
那里面对待错过的爱情的态度吧。做一个正直有责任感的人，才是真正地对曾经的爱情
的尊重。
【在 f****y 的大作中提到】
: 早上打开微信圈看到表妹发了一条关于评论谢霆锋的网上截屏，大意是谢霆锋能接
: 受为两个不同男人生过孩子的王菲，却不能接受为他生过两个儿子的张柏芝。的确爱情
: 是自私的，若一个人不够爱你，无论你为他做什么，都只是徒劳，爱从来不因感动而善
: 终。看到表妹对于这个评论的态度是现在的她要为自己负责，作为姐姐看到刚大学毕业
: 一年多的表妹有如此的人生态度还是很为她开心的。
: 那么促使我坐在这里写下这些文字的冲动只源于想谈谈自己对于王菲的个人感受，
: 而对于锋菲恋其实不想发表什么感想，在我眼里只是两个相爱的男女此刻又在一起了而
: 以，不管他们是心里一直有对方还是彼此单身相遇后又激起爱情的火花，总之此刻的结
: 果是他们相爱并在一起。当然我不知道此前与他们有过交集的男女此刻会有怎样的感想
: ，虽然舆论世俗的伤害不可避免，但我想真正爱他们的人会理解他们亦会祝福他们，而
w*7
16 楼
Mark this one.
谱产
明显
【在 m**z 的大作中提到】
: re.
: Mg-binding UV不会有变化，intrinsic fluorescence值得一试。或者用能bind Mg的
: fluoresent probe做competition titration.又或者equilibrium dialysis.ITC,NMR也
: 可以，但是不容易做，蛋白需要量也大。
: 还有一个值得一试的是：用Co先代替Mg作titration.Co binding通常伴随UV变化，然后
: 加Mg来compete with Co.这样数据分析也能得到Co/Mg binding constant.
谱产
明显
【在 m**z 的大作中提到】
: re.
: Mg-binding UV不会有变化，intrinsic fluorescence值得一试。或者用能bind Mg的
: fluoresent probe做competition titration.又或者equilibrium dialysis.ITC,NMR也
: 可以，但是不容易做，蛋白需要量也大。
: 还有一个值得一试的是：用Co先代替Mg作titration.Co binding通常伴随UV变化，然后
: 加Mg来compete with Co.这样数据分析也能得到Co/Mg binding constant.
i*4
17 楼
赞大家的评论。
e*s
18 楼
专家！
【在 m**z 的大作中提到】
: re.
: Mg-binding UV不会有变化，intrinsic fluorescence值得一试。或者用能bind Mg的
: fluoresent probe做competition titration.又或者equilibrium dialysis.ITC,NMR也
: 可以，但是不容易做，蛋白需要量也大。
: 还有一个值得一试的是：用Co先代替Mg作titration.Co binding通常伴随UV变化，然后
: 加Mg来compete with Co.这样数据分析也能得到Co/Mg binding constant.
【在 m**z 的大作中提到】
: re.
: Mg-binding UV不会有变化，intrinsic fluorescence值得一试。或者用能bind Mg的
: fluoresent probe做competition titration.又或者equilibrium dialysis.ITC,NMR也
: 可以，但是不容易做，蛋白需要量也大。
: 还有一个值得一试的是：用Co先代替Mg作titration.Co binding通常伴随UV变化，然后
: 加Mg来compete with Co.这样数据分析也能得到Co/Mg binding constant.
j*9
19 楼
我对王大妈是没什么兴趣的，还以为你现实中认识王菲呢，才进来看看。
o*e
20 楼
这个比较靠谱
【在 B***Q 的大作中提到】
: ITC can do it.
【在 B***Q 的大作中提到】
: ITC can do it.
b*e
21 楼
哥来给你解释一下这个事情吧。张柏芝的事情吧，是谢霆锋被戴绿帽子。王菲的事情吧
，是谢霆锋给别人戴绿帽子。就这么简单。
【在 f****y 的大作中提到】
: 早上打开微信圈看到表妹发了一条关于评论谢霆锋的网上截屏，大意是谢霆锋能接
: 受为两个不同男人生过孩子的王菲，却不能接受为他生过两个儿子的张柏芝。的确爱情
: 是自私的，若一个人不够爱你，无论你为他做什么，都只是徒劳，爱从来不因感动而善
: 终。看到表妹对于这个评论的态度是现在的她要为自己负责，作为姐姐看到刚大学毕业
: 一年多的表妹有如此的人生态度还是很为她开心的。
: 那么促使我坐在这里写下这些文字的冲动只源于想谈谈自己对于王菲的个人感受，
: 而对于锋菲恋其实不想发表什么感想，在我眼里只是两个相爱的男女此刻又在一起了而
: 以，不管他们是心里一直有对方还是彼此单身相遇后又激起爱情的火花，总之此刻的结
: 果是他们相爱并在一起。当然我不知道此前与他们有过交集的男女此刻会有怎样的感想
: ，虽然舆论世俗的伤害不可避免，但我想真正爱他们的人会理解他们亦会祝福他们，而
，是谢霆锋给别人戴绿帽子。就这么简单。
【在 f****y 的大作中提到】
: 早上打开微信圈看到表妹发了一条关于评论谢霆锋的网上截屏，大意是谢霆锋能接
: 受为两个不同男人生过孩子的王菲，却不能接受为他生过两个儿子的张柏芝。的确爱情
: 是自私的，若一个人不够爱你，无论你为他做什么，都只是徒劳，爱从来不因感动而善
: 终。看到表妹对于这个评论的态度是现在的她要为自己负责，作为姐姐看到刚大学毕业
: 一年多的表妹有如此的人生态度还是很为她开心的。
: 那么促使我坐在这里写下这些文字的冲动只源于想谈谈自己对于王菲的个人感受，
: 而对于锋菲恋其实不想发表什么感想，在我眼里只是两个相爱的男女此刻又在一起了而
: 以，不管他们是心里一直有对方还是彼此单身相遇后又激起爱情的火花，总之此刻的结
: 果是他们相爱并在一起。当然我不知道此前与他们有过交集的男女此刻会有怎样的感想
: ，虽然舆论世俗的伤害不可避免，但我想真正爱他们的人会理解他们亦会祝福他们，而
n*8
22 楼
透析，ITC， SPR
A*1
23 楼
王菲有老本吃，完全不怕啊。即使到现在，捧朋友，翻唱了一首《传奇》，顿时一堆人
翻唱。唱了个《匆匆那年》，马上也是很多人就选她的歌曲来翻唱。某一个人认为她唱
歌实力如何，已经完全不重要了。她反正也完全不缺粉丝，甚至很多明星歌星的粉丝。
爱情谁都不知道到底是咋回事。反正11年之后还能再相爱，一般也都是奇迹。目前演艺
圈的，也只听说过王菲和莫文蔚，吃了回头草的。大家都是爱过了，分手了，就再也不
会爱了，也回不到从前了。
【在 B***j 的大作中提到】
: 在我眼里，王菲的实力远没有她被吹的那么高。没听过她的演唱会，可是她最近两次在
: 春晚的表现实在是卡拉ok水平。
: 在我眼里，王菲是一个对感情和对家庭都很没有责任感的人。说好听了，是性情中人。
: 不过相对于白莲花董洁和姚晨，王菲的处事还是要好太多。好歹每次真爱来临，都会把
: 前一段结束。
翻唱。唱了个《匆匆那年》，马上也是很多人就选她的歌曲来翻唱。某一个人认为她唱
歌实力如何，已经完全不重要了。她反正也完全不缺粉丝，甚至很多明星歌星的粉丝。
爱情谁都不知道到底是咋回事。反正11年之后还能再相爱，一般也都是奇迹。目前演艺
圈的，也只听说过王菲和莫文蔚，吃了回头草的。大家都是爱过了，分手了，就再也不
会爱了，也回不到从前了。
【在 B***j 的大作中提到】
: 在我眼里，王菲的实力远没有她被吹的那么高。没听过她的演唱会，可是她最近两次在
: 春晚的表现实在是卡拉ok水平。
: 在我眼里，王菲是一个对感情和对家庭都很没有责任感的人。说好听了，是性情中人。
: 不过相对于白莲花董洁和姚晨，王菲的处事还是要好太多。好歹每次真爱来临，都会把
: 前一段结束。
m*z
24 楼
SPR不靠谱，没见过几个用SPR做metal-protein binding的例子.原因大概是把蛋白固定
住，bind个金属离子造成不了什么signal change吧
【在 n**8 的大作中提到】
: 透析，ITC， SPR
住，bind个金属离子造成不了什么signal change吧
【在 n**8 的大作中提到】
: 透析，ITC， SPR
m*s
25 楼
所谓天后，其实也就是当年在港灿那里有个新鲜劲，放在如今大陆人民才艺辈出和欣赏
水平的高度和多样性，她屁都不是。整个就一attention whore。没啥好说的，姚大嘴
也是。
水平的高度和多样性，她屁都不是。整个就一attention whore。没啥好说的，姚大嘴
也是。
p*n
26 楼
要得到准确的itc数据，几百um以上还是比较困难的。
不过往往不做不知道。如果你对蛋白浓度有信心，也不太在乎实际delta h,
那么kd应该还算准。
另外还要考虑到一个问题是mg的binding site有几个。
【在 o****e 的大作中提到】
: 这个比较靠谱
不过往往不做不知道。如果你对蛋白浓度有信心，也不太在乎实际delta h,
那么kd应该还算准。
另外还要考虑到一个问题是mg的binding site有几个。
【在 o****e 的大作中提到】
: 这个比较靠谱
y*f
27 楼
没听过现场就不要评价了吧。 廉价的电视机喇叭听什么都是卡拉ok水平
【在 B***j 的大作中提到】
: 在我眼里，王菲的实力远没有她被吹的那么高。没听过她的演唱会，可是她最近两次在
: 春晚的表现实在是卡拉ok水平。
: 在我眼里，王菲是一个对感情和对家庭都很没有责任感的人。说好听了，是性情中人。
: 不过相对于白莲花董洁和姚晨，王菲的处事还是要好太多。好歹每次真爱来临，都会把
: 前一段结束。
【在 B***j 的大作中提到】
: 在我眼里，王菲的实力远没有她被吹的那么高。没听过她的演唱会，可是她最近两次在
: 春晚的表现实在是卡拉ok水平。
: 在我眼里，王菲是一个对感情和对家庭都很没有责任感的人。说好听了，是性情中人。
: 不过相对于白莲花董洁和姚晨，王菲的处事还是要好太多。好歹每次真爱来临，都会把
: 前一段结束。
l*1
28 楼
LZ can try MST
Key Features
NanoTemper's unique MST technology has the following features and benefits:
Sample Preparation Features
measure affinities without surface immobilization, in free solution
measure label-free
measure affinities (KD, dissociation constant) between any (bio)molecules in
10 minutes
measure sub-nM to mM range of dissociation constants
equally applicable to a very large size range of molecules: measure ions,
fragments as well as nucleosomes and liposomes
study multi-component reactions like ternary complex formation, the order of
assembly, interfering factors, cooperativity and the like
discriminate between different binding sites on a target of interest
determine the number of binding sites of biomolecules
//www.nanotemper-technologies.com/technology/microscale-thermophoresis/
article/key-features/
or
//www.nanotemper-technologies.com/technology/
【在 p*****n 的大作中提到】
: 要得到准确的itc数据，几百um以上还是比较困难的。
: 不过往往不做不知道。如果你对蛋白浓度有信心，也不太在乎实际delta h,
: 那么kd应该还算准。
: 另外还要考虑到一个问题是mg的binding site有几个。
Key Features
NanoTemper's unique MST technology has the following features and benefits:
Sample Preparation Features
measure affinities without surface immobilization, in free solution
measure label-free
measure affinities (KD, dissociation constant) between any (bio)molecules in
10 minutes
measure sub-nM to mM range of dissociation constants
equally applicable to a very large size range of molecules: measure ions,
fragments as well as nucleosomes and liposomes
study multi-component reactions like ternary complex formation, the order of
assembly, interfering factors, cooperativity and the like
discriminate between different binding sites on a target of interest
determine the number of binding sites of biomolecules
//www.nanotemper-technologies.com/technology/microscale-thermophoresis/
article/key-features/
or
//www.nanotemper-technologies.com/technology/
【在 p*****n 的大作中提到】
: 要得到准确的itc数据，几百um以上还是比较困难的。
: 不过往往不做不知道。如果你对蛋白浓度有信心，也不太在乎实际delta h,
: 那么kd应该还算准。
: 另外还要考虑到一个问题是mg的binding site有几个。
M*s
29 楼
玩儿吧，我等着小谢再婚王菲出家的头条儿
【在 f****y 的大作中提到】
: 早上打开微信圈看到表妹发了一条关于评论谢霆锋的网上截屏，大意是谢霆锋能接
: 受为两个不同男人生过孩子的王菲，却不能接受为他生过两个儿子的张柏芝。的确爱情
: 是自私的，若一个人不够爱你，无论你为他做什么，都只是徒劳，爱从来不因感动而善
: 终。看到表妹对于这个评论的态度是现在的她要为自己负责，作为姐姐看到刚大学毕业
: 一年多的表妹有如此的人生态度还是很为她开心的。
: 那么促使我坐在这里写下这些文字的冲动只源于想谈谈自己对于王菲的个人感受，
: 而对于锋菲恋其实不想发表什么感想，在我眼里只是两个相爱的男女此刻又在一起了而
: 以，不管他们是心里一直有对方还是彼此单身相遇后又激起爱情的火花，总之此刻的结
: 果是他们相爱并在一起。当然我不知道此前与他们有过交集的男女此刻会有怎样的感想
: ，虽然舆论世俗的伤害不可避免，但我想真正爱他们的人会理解他们亦会祝福他们，而
【在 f****y 的大作中提到】
: 早上打开微信圈看到表妹发了一条关于评论谢霆锋的网上截屏，大意是谢霆锋能接
: 受为两个不同男人生过孩子的王菲，却不能接受为他生过两个儿子的张柏芝。的确爱情
: 是自私的，若一个人不够爱你，无论你为他做什么，都只是徒劳，爱从来不因感动而善
: 终。看到表妹对于这个评论的态度是现在的她要为自己负责，作为姐姐看到刚大学毕业
: 一年多的表妹有如此的人生态度还是很为她开心的。
: 那么促使我坐在这里写下这些文字的冲动只源于想谈谈自己对于王菲的个人感受，
: 而对于锋菲恋其实不想发表什么感想，在我眼里只是两个相爱的男女此刻又在一起了而
: 以，不管他们是心里一直有对方还是彼此单身相遇后又激起爱情的火花，总之此刻的结
: 果是他们相爱并在一起。当然我不知道此前与他们有过交集的男女此刻会有怎样的感想
: ，虽然舆论世俗的伤害不可避免，但我想真正爱他们的人会理解他们亦会祝福他们，而
o*e
30 楼
Kd几百uM，不意味着protein浓度一定要几百uM以上；(至少Mg离子浓度很容易提上去)
ITC数据可以“帮忙”回答binding site的问题。
【在 p*****n 的大作中提到】
: 要得到准确的itc数据，几百um以上还是比较困难的。
: 不过往往不做不知道。如果你对蛋白浓度有信心，也不太在乎实际delta h,
: 那么kd应该还算准。
: 另外还要考虑到一个问题是mg的binding site有几个。
ITC数据可以“帮忙”回答binding site的问题。
【在 p*****n 的大作中提到】
: 要得到准确的itc数据，几百um以上还是比较困难的。
: 不过往往不做不知道。如果你对蛋白浓度有信心，也不太在乎实际delta h,
: 那么kd应该还算准。
: 另外还要考虑到一个问题是mg的binding site有几个。
V*3
31 楼
要确保Mg和蛋白的结合有能检测到的热效应
这个可真说不准
【在 o****e 的大作中提到】
: 这个比较靠谱
这个可真说不准
【在 o****e 的大作中提到】
: 这个比较靠谱
o*e
32 楼
当然没有绝对的事情。
我说的就是在前面提到的几个方法里比较的话，ITC会是我认为最有可能拿到
可靠的定量的数据的。
【在 V**3 的大作中提到】
: 要确保Mg和蛋白的结合有能检测到的热效应
: 这个可真说不准
我说的就是在前面提到的几个方法里比较的话，ITC会是我认为最有可能拿到
可靠的定量的数据的。
【在 V**3 的大作中提到】
: 要确保Mg和蛋白的结合有能检测到的热效应
: 这个可真说不准
m*z
33 楼
spectroscopy methods should be easier than ITC, and won't require large
amount of protein
【在 o****e 的大作中提到】
: 当然没有绝对的事情。
: 我说的就是在前面提到的几个方法里比较的话，ITC会是我认为最有可能拿到
: 可靠的定量的数据的。
amount of protein
【在 o****e 的大作中提到】
: 当然没有绝对的事情。
: 我说的就是在前面提到的几个方法里比较的话，ITC会是我认为最有可能拿到
: 可靠的定量的数据的。
o*e
34 楼
和Mg结合时有特定的、“long wavelength”的吸收时，研究起来才会容易些。
protein的“intrinsic fluorescence”(比如Trp)可影响的因素太多，我不会把
它作为首选的定量研究“Mg binding event”的手段。
【在 m**z 的大作中提到】
: spectroscopy methods should be easier than ITC, and won't require large
: amount of protein
protein的“intrinsic fluorescence”(比如Trp)可影响的因素太多，我不会把
它作为首选的定量研究“Mg binding event”的手段。
【在 m**z 的大作中提到】
: spectroscopy methods should be easier than ITC, and won't require large
: amount of protein
o*e
35 楼
可以参考一下：
Biochemistry 2001, 40, 1423-1429
Thermodynamics of Ion-Induced RNA Folding in the Hammerhead Ribozyme:
An Isothermal Titration Calorimetric Study
【在 Y*X 的大作中提到】
: 大家好,我有一个RDRP,在大约2-4mM Mg2+的浓度下有polymerase的活性.现在我们做了
: 很多突变,想确定镁离子的结合位点.请问下大家有没有什么好的方法能够检测蛋白与镁
: 离子相互作用或者结合常数的. 这个结合的KD估计在mM级或者几百uM级.
Biochemistry 2001, 40, 1423-1429
Thermodynamics of Ion-Induced RNA Folding in the Hammerhead Ribozyme:
An Isothermal Titration Calorimetric Study
【在 Y*X 的大作中提到】
: 大家好,我有一个RDRP,在大约2-4mM Mg2+的浓度下有polymerase的活性.现在我们做了
: 很多突变,想确定镁离子的结合位点.请问下大家有没有什么好的方法能够检测蛋白与镁
: 离子相互作用或者结合常数的. 这个结合的KD估计在mM级或者几百uM级.
m*z
36 楼
fluoresent probe can be used for a competition experiment. Or use Co to
produce the long wavelength (d-d transition) and back titrate Mg.
【在 o****e 的大作中提到】
: 和Mg结合时有特定的、“long wavelength”的吸收时，研究起来才会容易些。
: protein的“intrinsic fluorescence”(比如Trp)可影响的因素太多，我不会把
: 它作为首选的定量研究“Mg binding event”的手段。
produce the long wavelength (d-d transition) and back titrate Mg.
【在 o****e 的大作中提到】
: 和Mg结合时有特定的、“long wavelength”的吸收时，研究起来才会容易些。
: protein的“intrinsic fluorescence”(比如Trp)可影响的因素太多，我不会把
: 它作为首选的定量研究“Mg binding event”的手段。
o*e
37 楼
这些都需要额外的hypotheses，相比较而言，我认为ITC才是更直接的手段。
【在 m**z 的大作中提到】
: fluoresent probe can be used for a competition experiment. Or use Co to
: produce the long wavelength (d-d transition) and back titrate Mg.
【在 m**z 的大作中提到】
: fluoresent probe can be used for a competition experiment. Or use Co to
: produce the long wavelength (d-d transition) and back titrate Mg.
m*z
38 楼
intrinsic fluorescence受到很多因素影响，ITC又何尝不是呢。enthalpy change可以
由很多因素引起，buffer protonation/deprotonation,metal-buffer interaction,
precipitation,etc.所说得最直接其实measure也是这些的总和。反正ITC一直都不我
measure metal-protein interaction的首选，感觉有时候是个吃力不讨好的方法。。
。当然要是需要enthalpy/entropy,那就只有ITC了
【在 o****e 的大作中提到】
: 这些都需要额外的hypotheses，相比较而言，我认为ITC才是更直接的手段。
由很多因素引起，buffer protonation/deprotonation,metal-buffer interaction,
precipitation,etc.所说得最直接其实measure也是这些的总和。反正ITC一直都不我
measure metal-protein interaction的首选，感觉有时候是个吃力不讨好的方法。。
。当然要是需要enthalpy/entropy,那就只有ITC了
【在 o****e 的大作中提到】
: 这些都需要额外的hypotheses，相比较而言，我认为ITC才是更直接的手段。
o*e
39 楼
我说的是相比较而言。
即便是你说的spectroscopy method一样要考虑buffer的影响，一样要考虑比如
“precipitation”的问题，甚至还有金属离子和buffer结合造成吸收光谱变化
的问题。
而ITC至少不需要考虑你说的fluoresent probe本身对protein及其function的
影响（ITC不需要有tag的Mg或有tag的protein），不需要考虑Co与Mg不同的
binding site(s)以及造成“对protein function不同影响”的问题。
ITC研究Mg binding的例子我前面已经举过了。比普通spectroscopy method能
给出更多有用的信息。
即便是你说的spectroscopy method一样要考虑buffer的影响，一样要考虑比如
“precipitation”的问题，甚至还有金属离子和buffer结合造成吸收光谱变化
的问题。
而ITC至少不需要考虑你说的fluoresent probe本身对protein及其function的
影响（ITC不需要有tag的Mg或有tag的protein），不需要考虑Co与Mg不同的
binding site(s)以及造成“对protein function不同影响”的问题。
ITC研究Mg binding的例子我前面已经举过了。比普通spectroscopy method能
给出更多有用的信息。
m*z
40 楼
我同意如果ITC顺利的话可以提供更多信息，但它不是我的首选。。buffer等的影响ITC
相对也严重些，因为蛋白浓度的关系。
Xiao Z & Wedd AG. Nat Prod Rep 2010, 27(5) 768-89.
这是一篇比较general的review,不是针对Mg的。。
相对也严重些，因为蛋白浓度的关系。
Xiao Z & Wedd AG. Nat Prod Rep 2010, 27(5) 768-89.
这是一篇比较general的review,不是针对Mg的。。
l*n
41 楼
象前面同学推荐的,光谱类的快速,简单,直接.作为首选很合适.
(1).Fluorescence Emission,最简单的看看tyrosine, tryptophan的化学环境有没有因
为Mg结合而变化,从而对荧光有影响.
(2).同时可以尝试Circular Dichroism,最简单的蛋白二级结构,如果不追究变化的源头
,而只是用变化作为信号去测量金属离子和蛋白作用的,很简单方便.
以上两个方法典型的应用有很多,比如calmodulin和钙离子作用.
注意:因为你需要测的是chemical equilibrium,如果反应很慢的话,需要保证滴定过程
每个滴定点(浓度)都要达到化学反应平衡.
SPR
这个不适合,首先是因为信号来自bulk solution(流动的溶液)中的分子被吸附到固定在
表面的蛋白上形成复合物,本质上因为质量吸附造成sensor surface附近媒介的折射率
改变.所以被吸附的质量大小直接影响了信号强弱.你的实验是Mg在bulk solution,这么
小的离子,几乎不可能产生什么明显的信号.这也是ligand-protein binding里很少用
SPR的原因.同时,SPR还有很多潜在问题,比如说蛋白被固定到表面,造成性质和构想改变
,一
部分亲和力丢失或者全部丢失等.同时multi-valent binding是最大的问题之一,也就是
说如果bulk solution里的analyte有多个结合位点,那么数据几乎是不可用作定量分析
的.因为avidity effect.
ITC
这个要保证有足够大的热量从反应中产生.对于Mg+protein, Ca+protein一般来说是满
足要求的.参见很多Dr. Michael Henzl (U of Missouri) 的文章. 有需要注意的地方
是,有的蛋白在ITC实验中对高速搅拌不适应,容易产生沉淀,所以要用相对低的速度和足
够长的时间间隔. 建议做了实验以后把溶液拿到UV-Vis spectrophotometer下读一下,
可以看看光散射有没有增加,或者放到Dynamic Light Scattering里前后实验(before
and after ITC)对比.
Hope this helps!
(1).Fluorescence Emission,最简单的看看tyrosine, tryptophan的化学环境有没有因
为Mg结合而变化,从而对荧光有影响.
(2).同时可以尝试Circular Dichroism,最简单的蛋白二级结构,如果不追究变化的源头
,而只是用变化作为信号去测量金属离子和蛋白作用的,很简单方便.
以上两个方法典型的应用有很多,比如calmodulin和钙离子作用.
注意:因为你需要测的是chemical equilibrium,如果反应很慢的话,需要保证滴定过程
每个滴定点(浓度)都要达到化学反应平衡.
SPR
这个不适合,首先是因为信号来自bulk solution(流动的溶液)中的分子被吸附到固定在
表面的蛋白上形成复合物,本质上因为质量吸附造成sensor surface附近媒介的折射率
改变.所以被吸附的质量大小直接影响了信号强弱.你的实验是Mg在bulk solution,这么
小的离子,几乎不可能产生什么明显的信号.这也是ligand-protein binding里很少用
SPR的原因.同时,SPR还有很多潜在问题,比如说蛋白被固定到表面,造成性质和构想改变
,一
部分亲和力丢失或者全部丢失等.同时multi-valent binding是最大的问题之一,也就是
说如果bulk solution里的analyte有多个结合位点,那么数据几乎是不可用作定量分析
的.因为avidity effect.
ITC
这个要保证有足够大的热量从反应中产生.对于Mg+protein, Ca+protein一般来说是满
足要求的.参见很多Dr. Michael Henzl (U of Missouri) 的文章. 有需要注意的地方
是,有的蛋白在ITC实验中对高速搅拌不适应,容易产生沉淀,所以要用相对低的速度和足
够长的时间间隔. 建议做了实验以后把溶液拿到UV-Vis spectrophotometer下读一下,
可以看看光散射有没有增加,或者放到Dynamic Light Scattering里前后实验(before
and after ITC)对比.
Hope this helps!
l*n
42 楼
还需要考虑蛋白上有几个结合位点, stoichiometry.
【在 Y*X 的大作中提到】
: 大家好,我有一个RDRP,在大约2-4mM Mg2+的浓度下有polymerase的活性.现在我们做了
: 很多突变,想确定镁离子的结合位点.请问下大家有没有什么好的方法能够检测蛋白与镁
: 离子相互作用或者结合常数的. 这个结合的KD估计在mM级或者几百uM级.
【在 Y*X 的大作中提到】
: 大家好,我有一个RDRP,在大约2-4mM Mg2+的浓度下有polymerase的活性.现在我们做了
: 很多突变,想确定镁离子的结合位点.请问下大家有没有什么好的方法能够检测蛋白与镁
: 离子相互作用或者结合常数的. 这个结合的KD估计在mM级或者几百uM级.
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