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三黄包求方案可行性!!!co-microinjection(for transgenic mice!!!)
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三黄包求方案可行性!!!co-microinjection(for transgenic mice!!!)# Biology - 生物学
k*g
1
我和老公是在某朋友的婚礼上认识的,因为彼此都没男女友,朋友们就撺掇我们在一起。
我们就顺势交换了电话和微信号。他很快加了我的微信号,常常会给我点赞和评论
一两句什么的,这样两人慢慢地熟悉起来。他就开始打电话约我出去。
他比我大六岁,三十了,父亲很小的时候就过世了,他和婆婆相依为命。他一直没
结婚,婆婆很着急。
我们俩在一起,婆婆很高兴,天天催着我们结婚。
我们俩相处的时间长了,对彼此都挺满意,结婚成了顺理成章的事情。婚后我们和
婆婆一块住。
婆婆是个工人,没多大文化,嘴有点碎,爱唠叨。但是对我却挺好,平时的家务都
抢着做,周末我有睡懒觉的习惯,婆婆还不许老公叫醒我,帮我买了早餐留着。
我觉得很幸福。心里想以后婆婆老了我一定要孝敬她!
老公跟我说不太想要孩子,他现在正在事业上升期,我也还年轻,应该多把精力放
在事业上。我不同意,我说婆婆年纪大了,她一直想要抱孙子,何况我们的孩子生下来
,肯定是婆婆带的多,不会影响我们的工作。
这事争执了好几次,老公特别不高兴,然后有一天我无意中听到婆婆在骂他,你不
想生孩子,你到底想干什么?
我听这话有点奇怪,但也没往心里去。自己开始一直做备孕的准备工作。
不久,老公去参加了一场同学聚会,去了三天两夜。一回来,就跟我提出离婚。我
懵了。我不明白,我们过得好好的,为什么要离婚。
老公被我逼问不过,突然就给我跪下了,说他从前的初恋情人现在离婚了,她过得
很苦,这些年因为心里一直忘不了他,她虽然结婚了,但一直没让她老公碰。为此,她
老公没少打骂她。
老公说,觉得特别对不起她,这一次他下了决心,无论如何要和她在一起。
我完全惊呆了,我说,你傻啊,她说没让老公碰你以为真的就没碰?怎么可能。
老公固执地说,我相信她。
他说,家里所有的存款都给我,除了房子是婆婆名下的,不能动,所有我们的东西
都给我。
我哭了,我拍打着他,我说你把我当什么了。
正闹着,婆婆进来了,冲上去就打了老公一耳光,骂他,你这个不争气的东西!
老公一气之下就走了。几天也不回来,我给他打电话,他只说对不起我。
后来我才听说,原来老公的初恋是他的大学同学,两人很相爱,老公带着她回家的
时候,婆婆却很不满意,嫌她举止轻浮,不懂事,总之,就是哪都不满意。
在婆婆的极力反对下,老公和初恋分开了。不久,初恋就结婚了,老公这才死了心
,认识了我,跟我结了婚。
老公对我说,他真的很爱他的初恋,一想到她为他受了那么多的苦,他就后悔当初
没能坚持下来,没能好好照顾她。
听到这些,我心都碎了。
短短一个多月,我吃不好睡不好,瘦了十多斤,最后我也想通了,决定答应老公离
婚,成全他和他的初恋情人。
没想到,听到我的决定,婆婆哭着说,要是我们离婚,她就不活了,一头撞死得了
……
我不知道,我该怎么办,以后的路,该怎么走,这场婚,要不要离……
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a*n
2
【 以下文字转载自 board 讨论区 】
发信人: ablution (灌水要从娃娃抓起), 信区: board
标 题: 严重恳请站务整顿apple版版务
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Feb 2 18:09:26 2012, 美东)
斑竹板斧长期矿工,应该罢免
版三一个人为非作歹,应该弹劾
一个讨论苹果产品硬件软件的技术性的版面
被他一个人搞成他的后花园
容不得任何关于苹果产品缺陷的技术性讨论
上来就关黑屋
更容不得任何调侃
简直就是文字狱
看不懂也封人
有人说了一个“21”,大家都知道就是”而已“的意思
版三看不懂, 就把人封了, 这已经成了本站的大笑话
让这样的人当版务,简直就是本站的大笑话,也不利于苹果版正常的技术讨论
大家还有什么经历的冤情或者是complain
都跟贴说一说吧
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m*5
3
如图,有一个BAC transgenic Vector含有一个要命的FRT flanked Neo cassette
必须用flipase切除
为省时间,想co-microinject一个CAGGS-Flpe plasmid
没有查到相关文献,但觉理论上可行,求高手re-assurance!!
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m*5
5
顶!!!!

【在 m******5 的大作中提到】
: 如图,有一个BAC transgenic Vector含有一个要命的FRT flanked Neo cassette
: 必须用flipase切除
: 为省时间,想co-microinject一个CAGGS-Flpe plasmid
: 没有查到相关文献,但觉理论上可行,求高手re-assurance!!

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s*a
7
co-microinject两个DNA没问题。但是你得要提多少BAC呀。你的 BAC大提能有多少DNA
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m*5
9
why do you think concentration is a problem?

【在 s****a 的大作中提到】
: co-microinject两个DNA没问题。但是你得要提多少BAC呀。你的 BAC大提能有多少DNA
: ?

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z*0
10
支持,对这样的奇葩要爱护!否则太没看点了。

【在 a***e 的大作中提到】
: 靠,俺反对
: 俺们上网是来娱乐的,NND没有娱乐业从业人员怎么成

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s*a
11
你要inject到哪里?BAC量和质粒比起来怎么样?
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t*o
12
大家把名媛整的内分泌失调了不是,开始在版面血崩似的合集了

【在 z****0 的大作中提到】
: 支持,对这样的奇葩要爱护!否则太没看点了。
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m*5
13
pronuclear injection 做transgenic line
approximately 1:1
1ng/ul in injection buffer

【在 s****a 的大作中提到】
: 你要inject到哪里?BAC量和质粒比起来怎么样?
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a*m
14
摁。要体谅行文艺术家!顺便鄙视娇客版!还不如果果版给力。。。

【在 z****0 的大作中提到】
: 支持,对这样的奇葩要爱护!否则太没看点了。
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s*a
15
BAC的copy数量要少很多。 还有flipase的效率应该比cre要低一些。你后面还得做
screening 把没有切掉的克隆去掉。
不知道flipase可不可以做in vitro的剪切。如果可以的话剪了重新转化,再大提做
injection也不是很多活啊。
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c*y
16
乐趣啊
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m*5
17
invitro拓扑结构不会出问题么?倒是有这个菌但我手上没有

【在 s****a 的大作中提到】
: BAC的copy数量要少很多。 还有flipase的效率应该比cre要低一些。你后面还得做
: screening 把没有切掉的克隆去掉。
: 不知道flipase可不可以做in vitro的剪切。如果可以的话剪了重新转化,再大提做
: injection也不是很多活啊。

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m*5
18
非常感谢!包子送上先,另外您是做哪个方向的?

【在 s****a 的大作中提到】
: BAC的copy数量要少很多。 还有flipase的效率应该比cre要低一些。你后面还得做
: screening 把没有切掉的克隆去掉。
: 不知道flipase可不可以做in vitro的剪切。如果可以的话剪了重新转化,再大提做
: injection也不是很多活啊。

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m*5
19
另外,你在这里说的克隆是说positive transgenic founder么?

【在 s****a 的大作中提到】
: BAC的copy数量要少很多。 还有flipase的效率应该比cre要低一些。你后面还得做
: screening 把没有切掉的克隆去掉。
: 不知道flipase可不可以做in vitro的剪切。如果可以的话剪了重新转化,再大提做
: injection也不是很多活啊。

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s*a
20
就是这个POSTIVE FOUNDER.
我做Neuroscience的。你说的这块其实我不是很了解。我记得cre好像可以在in vitro
的情况下使用. flipase不知道行不行吧。
另外,我想过把一个bac整合到细胞基因组里,做一个stable line。 不知道lz有没有
什么好的建议。能比较快,而且很稳定。 谢谢!
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s*a
21
就是这个POSTIVE FOUNDER.
我做Neuroscience的。你说的这块其实我不是很了解。我记得cre好像可以在in vitro
的情况下使用. flipase不知道行不行吧。
另外,我想过把一个bac整合到细胞基因组里,做一个stable line。 不知道lz有没有
什么好的建议。能比较快,而且很稳定。 谢谢!
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m*5
22
参考这篇文章的supplemental method
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2871289/

vitro

【在 s****a 的大作中提到】
: 就是这个POSTIVE FOUNDER.
: 我做Neuroscience的。你说的这块其实我不是很了解。我记得cre好像可以在in vitro
: 的情况下使用. flipase不知道行不行吧。
: 另外,我想过把一个bac整合到细胞基因组里,做一个stable line。 不知道lz有没有
: 什么好的建议。能比较快,而且很稳定。 谢谢!

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m*5
23
I did it anyway, waiting for results……………………

vitro

【在 s****a 的大作中提到】
: 就是这个POSTIVE FOUNDER.
: 我做Neuroscience的。你说的这块其实我不是很了解。我记得cre好像可以在in vitro
: 的情况下使用. flipase不知道行不行吧。
: 另外,我想过把一个bac整合到细胞基因组里,做一个stable line。 不知道lz有没有
: 什么好的建议。能比较快,而且很稳定。 谢谢!

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s*a
24
thanks a lot!
good luck!
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m*5
25
Glad that I could provide some information useful to you. I am keeping
sucking in those informations, if you are interested, I would be very happy
to discuses with you!

【在 s****a 的大作中提到】
: thanks a lot!
: good luck!

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s*a
26
that will be great! I will PS you my contact info. i was thinking you can
just transform flipase into the bacteria with your BAC and do PCR screening.
that should work. talk to you later.
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