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请教少量细胞RNA提取，扩增和array

请教少量细胞RNA提取，扩增和array# Biology - 生物学

A*n2012-08-21 07:08

1 楼

前段时间，华晨宇的演唱会，我朋友去看了，他是华晨宇的死忠粉，从快男出道开始，
她就迷上花花了。说实话，我本来是对他无感的，他的音乐也很少听，但是看了《明日
之子》里他的表现，迅速路人转粉，他真是是一个音乐奇才，对待音乐的态度也是当仁
不让的。后来听了很多华晨宇的歌，感觉他的内心住着一个神奇的精灵。我一直都认为
，作家用笔写心，歌手用心写歌。从他的原创里，可以无限接近他的内心。华晨宇有着
过人的音乐天赋，也有对摇滚近乎狂热的迷恋，无论是作曲还是舞台表现力，创作出来
的歌曲都是非常独特的。而且，华晨宇也是为数不多专心做音乐的人，也许公司的宣传
不到位，时机没到，花花总不算太火，但是实力会证明一切，时间会证明一切。而且华
晨宇的确做到了成为自己世界的主宰者，他过着自己最想过的生活。
如果你也是华晨宇的粉丝，请记得他的善良，记得他的固执与信念，记得他对自己的迷
恋和稍带害羞又真诚的笑容。
这就够了，这就是全部的华晨宇，一个爱音乐，爱自己，桀骜不驯又满是想法的音乐少
年。

k*e2012-08-21 07:08

2 楼

【以下文字转载自 Indiana 讨论区】
发信人: cherie890821 (cherie890821), 信区: Indiana
标题: 出售各类家具（桌、椅、架、柜等）
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Aug 16 21:02:01 2010, 美东)
联系方法：
e-mail: r********[email protected]
若有兴趣，价格可另议

l*72012-08-21 07:08

3 楼

我在留学期间认识了一个男朋友，是美国人，开始的时候我也犹豫要不要和他在一起，
但是相处了一段时间之后，发现了他是一个很好的人，很对我胃口，而且很能适应我的
生活方式，对我也很关爱。
在外留学的女孩都深有感触，一个人是很难的，这个时候有个人可以照顾你，何乐而不
为呢？
大概相处了有半年时间，我回国的时候，他主动要求和我一起回去，我觉得也没什么，
就带他回去了，本来是想给家里人一个惊喜，没想到是惊吓。
我带他回家，给家里人介绍他是我男朋友，我爸当时脸都绿了，直接拍桌子把我大骂了
一顿，还好我男朋友对于中国话理解还不是很透彻，我爸说了很多脏话，他几乎听不明
白。
我妈更夸张，直接嚎啕大哭，逼我赶紧和他分手，我奶奶也在一边添油加醋，说我败坏
了她家的门风。
你们可以脑补下那个场面，简直了！
我当时也很不理解，男友虽然不明白发生了什么，但是肯定也知道我家里的意思是不愿
意我和他交往，我拽着他就走了。
后来我一赌气就回去了，也没有在家住。
现在我妈一天打十个电话，问我和我男友分手了吗，我的态度也很坚决，就是不分，我
知道这样做有点过分，但是我觉得这是我自己的事情，他们不能给我做决定。
我爸说，最后悔的事情就是送我出国留学！
我现在已经不知道该怎么办了！

s*r2012-08-21 07:08

4 楼

老板想要从laser capture的少量细胞里提RNA，做array。
请教什么kit现在比较适合小量提取RNA，产率怎么样，
做array的话，还要不要纯化mRNA，哪家的kit比较好用，
array之前，RNA需要扩增吧，有什么好的kit或者protocol推荐一下。

h*y2012-08-21 07:08

5 楼

花爷最棒！爱花爷！

H*72012-08-21 07:08

6 楼

基本上是walmart同类物品的2倍价啊，镜子walmart只要5元，这是三倍

a*t2012-08-21 07:08

7 楼

time will heal everything

【在 l****7 的大作中提到】

: 我在留学期间认识了一个男朋友，是美国人，开始的时候我也犹豫要不要和他在一起，
: 但是相处了一段时间之后，发现了他是一个很好的人，很对我胃口，而且很能适应我的
: 生活方式，对我也很关爱。
: 在外留学的女孩都深有感触，一个人是很难的，这个时候有个人可以照顾你，何乐而不
: 为呢？
: 大概相处了有半年时间，我回国的时候，他主动要求和我一起回去，我觉得也没什么，
: 就带他回去了，本来是想给家里人一个惊喜，没想到是惊吓。
: 我带他回家，给家里人介绍他是我男朋友，我爸当时脸都绿了，直接拍桌子把我大骂了
: 一顿，还好我男朋友对于中国话理解还不是很透彻，我爸说了很多脏话，他几乎听不明
: 白。

l*u2012-08-21 07:08

8 楼

Qiagen RNeasy Micro for RNA extraction.
Don need to purify mRNA, total RNA is fine.
Epicenter kit or Nugene kit are good for amplification to array.
http://www.nugeninc.com/nugen/index.cfm/products/pl/target-prep
Please be very carefull to RNA quality after LCM, it is quite tricky.

【在 s******r 的大作中提到】

: 老板想要从laser capture的少量细胞里提RNA，做array。
: 请教什么kit现在比较适合小量提取RNA，产率怎么样，
: 做array的话，还要不要纯化mRNA，哪家的kit比较好用，
: array之前，RNA需要扩增吧，有什么好的kit或者protocol推荐一下。

k*e2012-08-21 07:08

9 楼

可能由于是美女用过的旧货吧，所以贵些。如果有卖裤头bra之类的，就更贵了。

【在 H******7 的大作中提到】

: 基本上是walmart同类物品的2倍价啊，镜子walmart只要5元，这是三倍

w*n2012-08-21 07:08

10 楼

支持。
不是所有老外都会只是和你玩玩而已，也不是个个老外会把你杀了连尸骨都找不到的。

【在 l****7 的大作中提到】

s*r2012-08-21 07:08

11 楼

Really appreciate.

【在 l******u 的大作中提到】

: Qiagen RNeasy Micro for RNA extraction.
: Don need to purify mRNA, total RNA is fine.
: Epicenter kit or Nugene kit are good for amplification to array.
: http://www.nugeninc.com/nugen/index.cfm/products/pl/target-prep
: Please be very carefull to RNA quality after LCM, it is quite tricky.

H*72012-08-21 07:08

12 楼

过三四天就是美女的生日了，买一些算祝寿吧

【在 k****e 的大作中提到】

: 可能由于是美女用过的旧货吧，所以贵些。如果有卖裤头bra之类的，就更贵了。

l*u2012-08-21 07:08

13 楼

you are welcome

【在 s******r 的大作中提到】

: Really appreciate.

w*a2012-08-21 07:08

14 楼

最后那个鱼缸好像用过的夜壶

M*a2012-08-21 07:08

15 楼

try NuGEN RNA amplification kits.
I even got high quality cDNA good for NGS from a single cell (human or
bacteria).
Array? Why not NGS?

【在 s******r 的大作中提到】

P*s2012-08-21 07:08

16 楼

靠
那个电扇，新的不是常年10刀么？

【在 k****e 的大作中提到】

: 可能由于是美女用过的旧货吧，所以贵些。如果有卖裤头bra之类的，就更贵了。

M*a2012-08-21 07:08

17 楼

U got it. :)

【在 l******u 的大作中提到】

e*e2012-08-21 07:08

18 楼

音响 lol

l*u2012-08-21 07:08

19 楼

but how can you know whether the RNA has been degredated, how did you do
the RNA quality control from a single cell (one cell).

【在 M**a 的大作中提到】

: try NuGEN RNA amplification kits.
: I even got high quality cDNA good for NGS from a single cell (human or
: bacteria).
: Array? Why not NGS?

w*f2012-08-21 07:08

20 楼

wokao

【在 k****e 的大作中提到】

: 可能由于是美女用过的旧货吧，所以贵些。如果有卖裤头bra之类的，就更贵了。

M*a2012-08-21 07:08

21 楼

亲，we can single cell RNA QC after turning into cDNAs...
Agarose gel. Bioanalyzer. PicoGreen.
and NGS results told everything.

【在 l******u 的大作中提到】

: but how can you know whether the RNA has been degredated, how did you do
: the RNA quality control from a single cell (one cell).

x*g2012-08-21 07:08

22 楼

真贵啊

l*u2012-08-21 07:08

23 楼

even original RNA quality is not so good, you could amplify the RNA, and get
certain amount of cDNA. In Agilent bioanalyzer, it is hard to say whether
the cDNA quality is good or not. If you compare some samples (for example
Mut vs Ctr, disease vs healthy), more or less you could get NGS result, but
how good of the data quality, it really hard to say.

【在 M**a 的大作中提到】

: 亲，we can single cell RNA QC after turning into cDNAs...
: Agarose gel. Bioanalyzer. PicoGreen.
: and NGS results told everything.

A*e2012-08-21 07:08

24 楼

我就爱看这个。你再多找一些，我给你发包子

【在 k****e 的大作中提到】

: 【以下文字转载自 Indiana 讨论区】
: 发信人: cherie890821 (cherie890821), 信区: Indiana
: 标题: 出售各类家具（桌、椅、架、柜等）
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Aug 16 21:02:01 2010, 美东)
: 联系方法：
: e-mail: r********[email protected]
: 若有兴趣，价格可另议

M*a2012-08-21 07:08

25 楼

Yeah, we both knew it is tough for dealing with single cell RNA. Step by
step ba, otherwise, we could wait till others find the way...

get
but

【在 l******u 的大作中提到】

: even original RNA quality is not so good, you could amplify the RNA, and get
: certain amount of cDNA. In Agilent bioanalyzer, it is hard to say whether
: the cDNA quality is good or not. If you compare some samples (for example
: Mut vs Ctr, disease vs healthy), more or less you could get NGS result, but
: how good of the data quality, it really hard to say.

J*s2012-08-21 07:08

26 楼

卖寂寞的

【在 k****e 的大作中提到】

: 可能由于是美女用过的旧货吧，所以贵些。如果有卖裤头bra之类的，就更贵了。

j*p2012-08-21 07:08

27 楼

Try RNAseq ba. As far as I know, RNAseq requires less starting material, as
few as 100 cells, based on my knowledge (I have never seen RNAseq data from
single cell).
Besides, if you decide to use RNAseq, I suggest NuGEN RNA amplification kits
, because data from NuGEN is the best I have ever see, in comparing to at
least 3 other kits.

r*g2012-08-21 07:08

28 楼

穷山恶谁出刁民啊。
我们这里都是送。

T*y2012-08-21 07:08

29 楼

热

z*n2012-08-21 07:08

30 楼

便宜啊

【在 k****e 的大作中提到】

l*u2012-08-21 07:08

31 楼

in current time, people call 100 cells "single cell".
normally in most of cases, "single cell" study is not in one cell.

as
from
kits

【在 j*p 的大作中提到】

: Try RNAseq ba. As far as I know, RNAseq requires less starting material, as
: few as 100 cells, based on my knowledge (I have never seen RNAseq data from
: single cell).
: Besides, if you decide to use RNAseq, I suggest NuGEN RNA amplification kits
: , because data from NuGEN is the best I have ever see, in comparing to at
: least 3 other kits.

j*n2012-08-21 07:08

32 楼

不用付税

【在 P*****s 的大作中提到】

: 靠
: 那个电扇，新的不是常年10刀么？

l*12012-08-21 07:08

33 楼

For single cell RNA-seq
LZ 可以用NGS 2.0 or 2.5
详细考古下本分舵即可:
同主题阅读：问一下RNA-seq和proteomics测序费用
[版面:生物学][首篇作者：aaaty] , 2012年02月10日
http://www.mitbbs.com/article_t/Biology/31634383.html
同主题阅读：ION的下一代sequencer快要出来了- The Ion Proton Sequencer
[版面:生物学][首篇作者：medIT] , 2012年01月10日
http://www.mitbbs.com/article_t/Biology/31624641.html
more
//www.weiming.info/zhuti/Biology/31624899/

z*n2012-08-21 07:08

34 楼

赞15块钱的音响。

【在 k****e 的大作中提到】

s*r2012-08-21 07:08

35 楼

好是好，可惜人穷志短。

as
from
kits

【在 j*p 的大作中提到】

z*n2012-08-21 07:08

36 楼

那也是美女用过的夜壶。
回去打飞机必备。

【在 w*a 的大作中提到】

: 最后那个鱼缸好像用过的夜壶

HL2012-08-21 07:08

37 楼

全包了...

s*r2012-08-21 07:08

38 楼

鱼缸贵了点了吧！！二手货1块钱还差不多。。那椅子30块？宜家新的也没这么贵。。

f*12012-08-21 07:08

39 楼

搞不好都是捡来的，连原价是多少也不知道。

N*p2012-08-21 07:08

40 楼

想起来那个相声卖五器

【在 k****e 的大作中提到】

c*e2012-08-21 07:08

41 楼

how much?

【在 A*******e 的大作中提到】

: 我就爱看这个。你再多找一些，我给你发包子

a*g2012-08-21 07:08

42 楼

那这个定价低了

【在 w*a 的大作中提到】

: 最后那个鱼缸好像用过的夜壶

m*l2012-08-21 07:08

43 楼

有没有合欢床？

【在 k****e 的大作中提到】

: 可能由于是美女用过的旧货吧，所以贵些。如果有卖裤头bra之类的，就更贵了。

y*n2012-08-21 07:08

44 楼

看了看这位极品大牛发过的贴子列表，不得不感慨真tmd会过日子啊。发帖不多，但都
很实在，无任何灌水无聊的帖子。
文章标题文章版面日期
1 出售各类家具（桌、椅、架、柜等） Indiana Aug 16
2 autocheck Indiana Aug 16
3 卖书 Indiana Aug 16
4 房屋出租 Indiana Apr 02
5 便宜出租 Indiana Nov 05
6 转租 1 bedroom in a 3 bedroom apt. 带家具，步行10分钟到学校 Indiana
Oct 26
7 本周日有人想去chicago的six flag么？我们有一张多出来的票，$1 Indiana
Aug 01
8 chicago KTV Indiana Aug 01
9 有人知道Indi有什么好玩的么？ Indiana Jun 04
10 租车：22号从印地机场回普渡 Indiana M

z*n2012-08-21 07:08

45 楼

人也去chicago唱KTV的

Indiana

【在 y*******n 的大作中提到】

: 看了看这位极品大牛发过的贴子列表，不得不感慨真tmd会过日子啊。发帖不多，但都
: 很实在，无任何灌水无聊的帖子。
: 文章标题文章版面日期
: 1 出售各类家具（桌、椅、架、柜等） Indiana Aug 16
: 2 autocheck Indiana Aug 16
: 3 卖书 Indiana Aug 16
: 4 房屋出租 Indiana Apr 02
: 5 便宜出租 Indiana Nov 05
: 6 转租 1 bedroom in a 3 bedroom apt. 带家具，步行10分钟到学校 Indiana
: Oct 26

y*n2012-08-21 07:08

46 楼

看id可能是89年生的，小本。

【在 z*********n 的大作中提到】

: 人也去chicago唱KTV的
:
: Indiana

s*g2012-08-21 07:08

47 楼

lol
很多人上bbs只是为了获取实用信息
灌水是浪费时间的无聊行为

Indiana

【在 y*******n 的大作中提到】

y*n2012-08-21 07:08

48 楼

是啊，只有wsn、大龄女才在这里灌水。

【在 s*******g 的大作中提到】

: lol
: 很多人上bbs只是为了获取实用信息
: 灌水是浪费时间的无聊行为
:
: Indiana