关于protein kinase subclone 的问题# Biology - 生物学
s*r
1 楼
major revision在single blind审稿下，是“刑部”一种新酷刑！！ 心理折磨更让人
受不了。
受不了。
H*y
2 楼
☆─────────────────────────────────────☆
yejuhua (香香) 于 (Wed May 12 20:08:20 2010, 美东) 提到:
一般大家准备几封？
☆─────────────────────────────────────☆
AprilSummer (人生如梦，一尊还酹江月) 于 (Wed May 12 20:54:18 2010, 美东) 提到:
大部分人都准备5－8封。
我打算试试一封推荐信都没有看能不能搞定。我自己的petition letter基本就没怎么
用到推荐信。
☆─────────────────────────────────────☆
yejuhua (香香) 于 (Wed May 12 21:20:29 2010, 美东) 提到:
前几封还好
后几封实在痛苦
既然最少5封。。。
yejuhua (香香) 于 (Wed May 12 20:08:20 2010, 美东) 提到:
一般大家准备几封？
☆─────────────────────────────────────☆
AprilSummer (人生如梦，一尊还酹江月) 于 (Wed May 12 20:54:18 2010, 美东) 提到:
大部分人都准备5－8封。
我打算试试一封推荐信都没有看能不能搞定。我自己的petition letter基本就没怎么
用到推荐信。
☆─────────────────────────────────────☆
yejuhua (香香) 于 (Wed May 12 21:20:29 2010, 美东) 提到:
前几封还好
后几封实在痛苦
既然最少5封。。。
r*r
3 楼
Att unlock越来越难，现在两年到期想转Verizon了，只是舍不得att的unlimited data
plan啊
plan啊
y*a
4 楼
我最近一直在克隆一个protein kinase gene，连在T-easy vector 上还挺轻松，然后
通过粘性末端切下来， 和pCambia binary vector 相连转入E.Coli后就出现问题了。
有时候菌很难长，有时候长的size正常，做colony PCR没有，以为是gene 太长（3.5kb
）普通的Taqpolymerase很难PCR出来，所以用基因的部分片段PCR，colony PCR都有条
带。提取plasmid后酶切总是很乱，所幸去测序，但都是没测序结果。请问是不是
protein kinase的表达会影响E.coli？
非常感谢！
通过粘性末端切下来， 和pCambia binary vector 相连转入E.Coli后就出现问题了。
有时候菌很难长，有时候长的size正常，做colony PCR没有，以为是gene 太长（3.5kb
）普通的Taqpolymerase很难PCR出来，所以用基因的部分片段PCR，colony PCR都有条
带。提取plasmid后酶切总是很乱，所幸去测序，但都是没测序结果。请问是不是
protein kinase的表达会影响E.coli？
非常感谢！
T*g
5 楼
让咋改咋改就是了啊
不过现在好多杂志都取消major revision了
不过现在好多杂志都取消major revision了
a*0
6 楼
为啥难？ ATT有个网页专为解锁啊。 只要用6个月就可以解锁。
o*d
7 楼
有专门用来做高保真长片段克隆的酶， 好像是roche的。
c*d
8 楼
改成reject, but allow resubmission...
【在 T*******g 的大作中提到】
: 让咋改咋改就是了啊
: 不过现在好多杂志都取消major revision了
【在 T*******g 的大作中提到】
: 让咋改咋改就是了啊
: 不过现在好多杂志都取消major revision了
i*o
9 楼
改规矩了。要用满两年。
【在 a*****0 的大作中提到】
: 为啥难？ ATT有个网页专为解锁啊。 只要用6个月就可以解锁。
【在 a*****0 的大作中提到】
: 为啥难？ ATT有个网页专为解锁啊。 只要用6个月就可以解锁。
y*a
10 楼
我们也是用高保真酶P的全长。我是觉得colony PCR 没必要用高保真酶检验。我的
promoter是35S，不知道是不是E.Coli体内无法接受protein kinase?
【在 o**d 的大作中提到】
: 有专门用来做高保真长片段克隆的酶， 好像是roche的。
M*P
11 楼
我让你revise，回来的还是垃圾一坨怎么办？
[在 saltier (OMG) 的大作中提到：]
：major revision在single blind审稿下，是“刑部”一种新酷刑！！ 心理折磨更让人
：受不了。
：...........
[在 saltier (OMG) 的大作中提到：]
：major revision在single blind审稿下，是“刑部”一种新酷刑！！ 心理折磨更让人
：受不了。
：...........
z*i
12 楼
2手版$40搞定
data
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.2.1
【在 r****r 的大作中提到】
: Att unlock越来越难，现在两年到期想转Verizon了，只是舍不得att的unlimited data
: plan啊
data
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.2.1
【在 r****r 的大作中提到】
: Att unlock越来越难，现在两年到期想转Verizon了，只是舍不得att的unlimited data
: plan啊
y*a
13 楼
我可以得到基因的全长，只是觉得用高保真酶做colony PCR比较浪费。我用的promoter
是35S.不知道是不是因为E.Coli自身接受不了protein kinase的表达？
【在 o**d 的大作中提到】
: 有专门用来做高保真长片段克隆的酶， 好像是roche的。
m*p
14 楼
我们领域顶尖期刊80%过第一轮的文章都是major revision. 表太矫情。
r*r
15 楼
老黄历了，现在已经不可能了，从5开始就没有解锁服务了，ebay上也没有。ATT全面封
杀，nnd
【在 z********i 的大作中提到】
: 2手版$40搞定
:
: data
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.2.1
杀，nnd
【在 z********i 的大作中提到】
: 2手版$40搞定
:
: data
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.2.1
o*d
16 楼
有点不太明白了。
你是要用ecoli来表达kinase这个protein还是只有用ecoli来做克隆？
promoter
【在 y*******a 的大作中提到】
:
: 我可以得到基因的全长，只是觉得用高保真酶做colony PCR比较浪费。我用的promoter
: 是35S.不知道是不是因为E.Coli自身接受不了protein kinase的表达？
你是要用ecoli来表达kinase这个protein还是只有用ecoli来做克隆？
promoter
【在 y*******a 的大作中提到】
:
: 我可以得到基因的全长，只是觉得用高保真酶做colony PCR比较浪费。我用的promoter
: 是35S.不知道是不是因为E.Coli自身接受不了protein kinase的表达？
T*g
17 楼
很多杂志都是这样，叫R&R
【在 c*******d 的大作中提到】
: 改成reject, but allow resubmission...
【在 c*******d 的大作中提到】
: 改成reject, but allow resubmission...
z*i
18 楼
我看现在2手还有卖的啊
【在 r****r 的大作中提到】
: 老黄历了，现在已经不可能了，从5开始就没有解锁服务了，ebay上也没有。ATT全面封
: 杀，nnd
【在 r****r 的大作中提到】
: 老黄历了，现在已经不可能了，从5开始就没有解锁服务了，ebay上也没有。ATT全面封
: 杀，nnd
y*a
19 楼
只是用E.Coli来做克隆。因为以前有个老师说过在E.Coli里overexpress protein
kiase，会让E。Coli自身受不了。我是想在版上问问有没有这种说法?
kiase，会让E。Coli自身受不了。我是想在版上问问有没有这种说法?
j*n
20 楼
很多小杂志也是这个趋势吧
没啥名气的小杂志一般只能邀请到刚毕业的或者没啥经验的reviewer 为了不让自己显
得sb或者水平不行 一般都是给major revision 进可攻退可守
【在 m*******p 的大作中提到】
: 我们领域顶尖期刊80%过第一轮的文章都是major revision. 表太矫情。
没啥名气的小杂志一般只能邀请到刚毕业的或者没啥经验的reviewer 为了不让自己显
得sb或者水平不行 一般都是给major revision 进可攻退可守
【在 m*******p 的大作中提到】
: 我们领域顶尖期刊80%过第一轮的文章都是major revision. 表太矫情。
o*d
21 楼
没听说过。
【在 y*******a 的大作中提到】
: 只是用E.Coli来做克隆。因为以前有个老师说过在E.Coli里overexpress protein
: kiase，会让E。Coli自身受不了。我是想在版上问问有没有这种说法?
【在 y*******a 的大作中提到】
: 只是用E.Coli来做克隆。因为以前有个老师说过在E.Coli里overexpress protein
: kiase，会让E。Coli自身受不了。我是想在版上问问有没有这种说法?
O*a
22 楼
revise and resubmit 也叫... R&R...
【在 T*******g 的大作中提到】
: 很多杂志都是这样，叫R&R
【在 T*******g 的大作中提到】
: 很多杂志都是这样，叫R&R
g*n
23 楼
那个基因装在真核表达载体上，怎么会在原核细菌里表达。
【在 y*******a 的大作中提到】
: 只是用E.Coli来做克隆。因为以前有个老师说过在E.Coli里overexpress protein
: kiase，会让E。Coli自身受不了。我是想在版上问问有没有这种说法?
【在 y*******a 的大作中提到】
: 只是用E.Coli来做克隆。因为以前有个老师说过在E.Coli里overexpress protein
: kiase，会让E。Coli自身受不了。我是想在版上问问有没有这种说法?
t*t
24 楼
这个allow resubmission...到底意义何在？ 难道还真有期刊not allow resubmission
?
【在 c*******d 的大作中提到】
: 改成reject, but allow resubmission...
?
【在 c*******d 的大作中提到】
: 改成reject, but allow resubmission...
l*1
25 楼
LZ next might try Hek293 or sf9 cell lines transformation for
protein expression.
【在 g*****n 的大作中提到】
: 那个基因装在真核表达载体上，怎么会在原核细菌里表达。
protein expression.
【在 g*****n 的大作中提到】
: 那个基因装在真核表达载体上，怎么会在原核细菌里表达。
M*l
26 楼
当然有。牛期刊，如果拒掉后没有实质、脱胎换骨的改进，resubmit会被编辑直接拒掉
，反复玩几次就上黑名单。
resubmission
【在 t*****t 的大作中提到】
: 这个allow resubmission...到底意义何在？ 难道还真有期刊not allow resubmission
: ?
，反复玩几次就上黑名单。
resubmission
【在 t*****t 的大作中提到】
: 这个allow resubmission...到底意义何在？ 难道还真有期刊not allow resubmission
: ?
k*l
27 楼
基因在哪个promoter下？如果是 T7，在expression strain 像 BL21（DE3）中表达可
能会有问题，但你克隆应该用 DH5alpha
【在 y*******a 的大作中提到】
: 只是用E.Coli来做克隆。因为以前有个老师说过在E.Coli里overexpress protein
: kiase，会让E。Coli自身受不了。我是想在版上问问有没有这种说法?
能会有问题，但你克隆应该用 DH5alpha
【在 y*******a 的大作中提到】
: 只是用E.Coli来做克隆。因为以前有个老师说过在E.Coli里overexpress protein
: kiase，会让E。Coli自身受不了。我是想在版上问问有没有这种说法?
y*a
28 楼
我的promoter 是35S。 strain是DH5alpha。
【在 k****l 的大作中提到】
: 基因在哪个promoter下？如果是 T7，在expression strain 像 BL21（DE3）中表达可
: 能会有问题，但你克隆应该用 DH5alpha
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