f*t
2 楼
为啥俺的材料去了TSC,ld的去了NSC???这不是添乱么？
大家有这样的么？
大家有这样的么？
p*e
3 楼
p*n
4 楼
从苹果寄来的，把我高兴坏了，以为iphone 6＋到了
结果打开是个iphone 皮套子
结果打开是个iphone 皮套子
C*4
5 楼
看了一下做K／O老鼠的流程
疑问：
1 要获得K／O ES细胞系，为什么要先得到K／O老鼠，再分离inner cell mass啊？不
能直接在ES细胞里面K／O了，直接用于实验吗？
2 能在一般的细胞系里面直接做K／O吗？
谢谢！
疑问：
1 要获得K／O ES细胞系，为什么要先得到K／O老鼠，再分离inner cell mass啊？不
能直接在ES细胞里面K／O了，直接用于实验吗？
2 能在一般的细胞系里面直接做K／O吗？
谢谢！
c*7
6 楼
中间有感恩节。等到周末。
f*t
7 楼
看来还算是正常。。。不过也挺闹心的
i*p
8 楼
赞水蓝像宝石的眼睛
b*t
9 楼
年经帖
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.7
【在 p***n 的大作中提到】
: 从苹果寄来的，把我高兴坏了，以为iphone 6＋到了
: 结果打开是个iphone 皮套子
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.7
【在 p***n 的大作中提到】
: 从苹果寄来的，把我高兴坏了，以为iphone 6＋到了
: 结果打开是个iphone 皮套子
S*s
10 楼
可以。但很多实验室都是要老鼠，看表型
try TALEN
【在 C********4 的大作中提到】
: 看了一下做K／O老鼠的流程
: 疑问：
: 1 要获得K／O ES细胞系，为什么要先得到K／O老鼠，再分离inner cell mass啊？不
: 能直接在ES细胞里面K／O了，直接用于实验吗？
: 2 能在一般的细胞系里面直接做K／O吗？
: 谢谢！
d*a
11 楼
为啥啊？是一起邮寄的么？你们两地，地址不一样么？
p*e
12 楼
【在 p*****e 的大作中提到】
C*4
13 楼
用TALEN是可以
但是
用老鼠基因敲除的targeting construct不能用在普通细胞系吗
【在 S*********s 的大作中提到】
:
: 可以。但很多实验室都是要老鼠，看表型
: try TALEN
但是
用老鼠基因敲除的targeting construct不能用在普通细胞系吗
【在 S*********s 的大作中提到】
:
: 可以。但很多实验室都是要老鼠，看表型
: try TALEN
f*t
14 楼
第一次交主申请人的直接收了，发到TSC;副申请人退回因为一个日期的问题，第二次再
交，副申请人就被发到NSC
交，副申请人就被发到NSC
t*u
15 楼
大赞艳后！太有范儿了
尤其是闻葡萄藤那张，太太太有味道了！
尤其是闻葡萄藤那张，太太太有味道了！
C*S
16 楼
You will get heterozygous KO cell.
【在 C********4 的大作中提到】
: 用TALEN是可以
: 但是
: 用老鼠基因敲除的targeting construct不能用在普通细胞系吗
【在 C********4 的大作中提到】
: 用TALEN是可以
: 但是
: 用老鼠基因敲除的targeting construct不能用在普通细胞系吗
A*R
17 楼
want to RL it...
s*y
18 楼
非常难，因为即使是KO 一个copy 就足够难的了，要两个染色体上的copy
同时被KO的几率是小之又小
【在 C********4 的大作中提到】
: 用TALEN是可以
: 但是
: 用老鼠基因敲除的targeting construct不能用在普通细胞系吗
同时被KO的几率是小之又小
【在 C********4 的大作中提到】
: 用TALEN是可以
: 但是
: 用老鼠基因敲除的targeting construct不能用在普通细胞系吗
Q*A
19 楼
这是不是那只传说中的美艳的妖后？！！
【在 p*****e 的大作中提到】
【在 p*****e 的大作中提到】
h*y
20 楼
For the second question, the answer is Yes we can. There are several ways
to achieve this - Meganuclease such as ZFN or TALEN, or homologous rAAV
recombination.
Both ZFN and TALEN can make incisions on the chromosome DNA and then employ
non-homologous end-joining repair, which normally result in small deletion
in the endogenous loci to achieve knockout effect. But it is difficult to
knockin. For ZFN or TALEN, the biggest concern is off-target effect due to
the nature of these technologies.
rAAV can introduce very large number of single strand DNA into one cell, and
this presumably increases the chance of homologous recombination. Using
rAAV, it is relatively easier to make knockin than ZFN or TALEN. Of course,
you only get heterozygous deletion after one round, and can achieve
homologous deletion if you do a second round, which has a lower efficiency (
<50% in theory) than first round.
to achieve this - Meganuclease such as ZFN or TALEN, or homologous rAAV
recombination.
Both ZFN and TALEN can make incisions on the chromosome DNA and then employ
non-homologous end-joining repair, which normally result in small deletion
in the endogenous loci to achieve knockout effect. But it is difficult to
knockin. For ZFN or TALEN, the biggest concern is off-target effect due to
the nature of these technologies.
rAAV can introduce very large number of single strand DNA into one cell, and
this presumably increases the chance of homologous recombination. Using
rAAV, it is relatively easier to make knockin than ZFN or TALEN. Of course,
you only get heterozygous deletion after one round, and can achieve
homologous deletion if you do a second round, which has a lower efficiency (
<50% in theory) than first round.
j*e
21 楼
是地！
好美！
【在 Q****A 的大作中提到】
: 这是不是那只传说中的美艳的妖后？！！
好美！
【在 Q****A 的大作中提到】
: 这是不是那只传说中的美艳的妖后？！！
s*r
22 楼
TALENs是最好的，如果转染效率还可以的话，homozygous的克隆不难拿到。AAV的话好
处是转染效率高，但是实验室自己做病毒拿不到那么高的titer，那个纯化的kit也不便
宜，跟公司送过来的比titer差远了。
处是转染效率高，但是实验室自己做病毒拿不到那么高的titer，那个纯化的kit也不便
宜，跟公司送过来的比titer差远了。
a*a
23 楼
Nice!
【在 p*****e 的大作中提到】
【在 p*****e 的大作中提到】
H*N
24 楼
There are two ways to get null es cells with traditional targeting method.
The first is to increase the drug concentration for the positive selection
marker (e.g. Neo). The second, which may be easier, is to use two positive
selection markers, but you will have to make two trageting constructs.
The first is to increase the drug concentration for the positive selection
marker (e.g. Neo). The second, which may be easier, is to use two positive
selection markers, but you will have to make two trageting constructs.
L*s
25 楼
Nice!!!
u*d
26 楼
正如楼上们所说，要拿到-/-的细胞，可靠的方法就是两轮转染筛选，这还是一个费时
费力的活的。还没有用过talen系统。
ES细胞系在传代过程中会因为压力小逐渐含有一些genome的变异，包括染色体的
deletion，translocation和aneuploid非整倍体，而两轮的克隆筛选很可能会得到一个
不正常的ES系，光做核型分析还是不够的。
希望KO是ES表型变化的唯一原因，必须rescue实验。
很多KO可能对ES的维持是没太多影响的，起作用是在分化阶段，要用in vitro方法分析
就需要建立不同的分化体系。
用+/- 老鼠配对就反而显得简单了，得到的ICM基本都是没有大的genome缺陷的，-/-的
表型也很好观测了。
【在 C********4 的大作中提到】
: 看了一下做K／O老鼠的流程
: 疑问：
: 1 要获得K／O ES细胞系，为什么要先得到K／O老鼠，再分离inner cell mass啊？不
: 能直接在ES细胞里面K／O了，直接用于实验吗？
: 2 能在一般的细胞系里面直接做K／O吗？
: 谢谢！
费力的活的。还没有用过talen系统。
ES细胞系在传代过程中会因为压力小逐渐含有一些genome的变异，包括染色体的
deletion，translocation和aneuploid非整倍体，而两轮的克隆筛选很可能会得到一个
不正常的ES系，光做核型分析还是不够的。
希望KO是ES表型变化的唯一原因，必须rescue实验。
很多KO可能对ES的维持是没太多影响的，起作用是在分化阶段，要用in vitro方法分析
就需要建立不同的分化体系。
用+/- 老鼠配对就反而显得简单了，得到的ICM基本都是没有大的genome缺陷的，-/-的
表型也很好观测了。
【在 C********4 的大作中提到】
: 看了一下做K／O老鼠的流程
: 疑问：
: 1 要获得K／O ES细胞系，为什么要先得到K／O老鼠，再分离inner cell mass啊？不
: 能直接在ES细胞里面K／O了，直接用于实验吗？
: 2 能在一般的细胞系里面直接做K／O吗？
: 谢谢！
p*e
27 楼
That one is my backgroud image in my computer. :-)
【在 t*****u 的大作中提到】
: 大赞艳后！太有范儿了
: 尤其是闻葡萄藤那张，太太太有味道了！
【在 t*****u 的大作中提到】
: 大赞艳后！太有范儿了
: 尤其是闻葡萄藤那张，太太太有味道了！
w*r
28 楼
talen效率很高的，ko双链问题不大
【在 s******y 的大作中提到】
: 非常难，因为即使是KO 一个copy 就足够难的了，要两个染色体上的copy
: 同时被KO的几率是小之又小
【在 s******y 的大作中提到】
: 非常难，因为即使是KO 一个copy 就足够难的了，要两个染色体上的copy
: 同时被KO的几率是小之又小
h*n
29 楼
好漂亮。尤其第二张的猫猫，那眼神太cool了。
o*5
30 楼
nice! would vote for this one
p*e
31 楼
thx.
【在 o*******5 的大作中提到】
: nice! would vote for this one
【在 o*******5 的大作中提到】
: nice! would vote for this one
a*y
32 楼
赞！
蓝眼睛，好PP~~~~
蓝眼睛，好PP~~~~
h*o
33 楼
super zan~~~
p*e
34 楼
She lost about 1/2 lb. from 13.1 to 12.6 lbs. now. :-)
Compare to one of my firends' cat, she is tiny.
【在 t*****u 的大作中提到】
: 大赞艳后！太有范儿了
: 尤其是闻葡萄藤那张，太太太有味道了！
Compare to one of my firends' cat, she is tiny.
【在 t*****u 的大作中提到】
: 大赞艳后！太有范儿了
: 尤其是闻葡萄藤那张，太太太有味道了！
m*h
35 楼
奔一个！
【在 p*****e 的大作中提到】
: She lost about 1/2 lb. from 13.1 to 12.6 lbs. now. :-)
: Compare to one of my firends' cat, she is tiny.
【在 p*****e 的大作中提到】
: She lost about 1/2 lb. from 13.1 to 12.6 lbs. now. :-)
: Compare to one of my firends' cat, she is tiny.
p*e
36 楼
Let me took some pics, Xian ... ~
but she looks fat in frount of the camera anyway :-(
【在 m***h 的大作中提到】
: 奔一个！
but she looks fat in frount of the camera anyway :-(
【在 m***h 的大作中提到】
: 奔一个！
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