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求助两个问题，primary cell 如何保存，和病毒质粒转染

求助两个问题，primary cell 如何保存，和病毒质粒转染# Biology - 生物学

c*i2012-11-20 08:11

1 楼

小人了解840pro是绝对比840强的，但是主要因为刚有个840 500G的deal，看着挺心动
的，所以想了解一下840pro会比840强多少，是否840差到完全不能用。
我是因为现在这个电脑硬盘看着要完蛋，所以想换个SSD。主要是科研工作使用，最复
杂的软件也就是ArcGIS,MATLAB之类的了。但是因为经常写东西所以喜欢多个窗口同开。
谢谢各位了！

K*R2012-11-20 08:11

2 楼

求助各位大侠两个问题，很着急，谢谢了！
1 我提取原代细胞后加入5% DMSO 和medium 放入-80 冰箱过夜，在放入液氮，这样方
法对吗？应为样品及其宝贵
2 第二部有个逆转录载体质粒，我不想包装了，可以用普通lipofectamiane2000 等试
剂来转染吗？
效率一般是多少，
多谢大家了！

J*n2012-11-20 08:11

3 楼

MLC VS TLC
主要区别就是这个，TLC写入次数比MLC小一个数量级。
TLC = Triple-Level Cell，即3bit/cell，它的寿命短，速度慢，约500－1000次擦写
寿命。

开。

【在 c****i 的大作中提到】

: 小人了解840pro是绝对比840强的，但是主要因为刚有个840 500G的deal，看着挺心动
: 的，所以想了解一下840pro会比840强多少，是否840差到完全不能用。
: 我是因为现在这个电脑硬盘看着要完蛋，所以想换个SSD。主要是科研工作使用，最复
: 杂的软件也就是ArcGIS,MATLAB之类的了。但是因为经常写东西所以喜欢多个窗口同开。
: 谢谢各位了！

l*y2012-11-20 08:11

4 楼

要缓慢降温，1度／分钟。买个冻细胞用的IPA 罐子，或者自己用泡沫塑料盒子做一个。

【在 K**R 的大作中提到】

: 求助各位大侠两个问题，很着急，谢谢了！
: 1 我提取原代细胞后加入5% DMSO 和medium 放入-80 冰箱过夜，在放入液氮，这样方
: 法对吗？应为样品及其宝贵
: 2 第二部有个逆转录载体质粒，我不想包装了，可以用普通lipofectamiane2000 等试
: 剂来转染吗？
: 效率一般是多少，
: 多谢大家了！

w*f2012-11-20 08:11

5 楼

Reliability!

开。

【在 c****i 的大作中提到】

C*42012-11-20 08:11

6 楼

怎么那么多实验室都没有细胞冻纯盒啊？很便宜的，一个几十美元，里面灌满异丙醇。
自制的不知道好用不。找个塑料盒子，里面内衬一层海绵，装满异丙醇，把冻存管放EP
试管架里，使试管架下部浸入异丙醇里，
那么珍贵的样品，不如买一个或者借一个冻存盒咯。细胞在冻存盒里面在－80度大于4
个小时，就可以转入液氮了。
最好用90%的血清＋10%的DMSO冻细胞，这样对细胞的保护作用最好，复苏后几乎没有死
细胞。

【在 K**R 的大作中提到】

c*i2012-11-20 08:11

7 楼

了解了，谢谢两位的解答，看来便宜真没好货。。。我再观望一下吧。。。。

w*r2012-11-20 08:11

8 楼

primary cell难道不是要现用么？
冻起来再传几代谁知道里面变成什么样子了...

t*t2012-11-20 08:11

9 楼

840和840Pro是有本质区别的。
840是TLC的闪存，一般USB用的，所以便宜。
840Pro是MLC的，SSD一般用的。

开。

【在 c****i 的大作中提到】

C*42012-11-20 08:11

10 楼

可以冻存。
比如，李文辉乙肝受体的文章，树鼩原代肝细胞都是一次灌注出来，冻起来
慢慢用的。
每次都取原代，太麻烦了啊

【在 w********r 的大作中提到】

: primary cell难道不是要现用么？
: 冻起来再传几代谁知道里面变成什么样子了...

s*g2012-11-20 08:11

11 楼

就是840，你玩命用也用不坏的。

s*s2012-11-20 08:11

12 楼

和我的做法一样，主要是懒，一种freezing medium全搞定。
这个其实还是取决于细胞，有的就算这么小心，化出来还是
大多数死掉，说不定直接-80还死的少点

EP
4

【在 C********4 的大作中提到】

: 怎么那么多实验室都没有细胞冻纯盒啊？很便宜的，一个几十美元，里面灌满异丙醇。
: 自制的不知道好用不。找个塑料盒子，里面内衬一层海绵，装满异丙醇，把冻存管放EP
: 试管架里，使试管架下部浸入异丙醇里，
: 那么珍贵的样品，不如买一个或者借一个冻存盒咯。细胞在冻存盒里面在－80度大于4
: 个小时，就可以转入液氮了。
: 最好用90%的血清＋10%的DMSO冻细胞，这样对细胞的保护作用最好，复苏后几乎没有死
: 细胞。

K*R2012-11-20 08:11

13 楼

谢谢你，好像我们有那种小方盒子。感谢！

个。

【在 l***y 的大作中提到】

: 要缓慢降温，1度／分钟。买个冻细胞用的IPA 罐子，或者自己用泡沫塑料盒子做一个。

K*R2012-11-20 08:11

14 楼

谢谢！
不知道你说的那个盒子是不是一个塑料小方盒子？您的方法很详细啊！对了你说90%
血清是全部FBS，还是DMEM +FBS？谢谢！
在 Cosimo2014 (柯希莫) 的大作中提到: 】
EP
4

K*R2012-11-20 08:11

15 楼

是这样的，一次用不完，还要根据实验结果调整呢，你说的是个问题，但是没办法只
有尝试

【在 w********r 的大作中提到】

: primary cell难道不是要现用么？
: 冻起来再传几代谁知道里面变成什么样子了...

C*42012-11-20 08:11

16 楼

我喜欢用90%纯血清+10%DMSO
这样比掺杂了DMEM的对细胞的保护更好

【在 K**R 的大作中提到】

: 谢谢！
: 不知道你说的那个盒子是不是一个塑料小方盒子？您的方法很详细啊！对了你说90%
: 血清是全部FBS，还是DMEM +FBS？谢谢！
: 在 Cosimo2014 (柯希莫) 的大作中提到: 】
: EP
: 4

j*x2012-11-20 08:11

17 楼

根据我个人的经验，人原代肝细胞一般还是不推荐冻存，质量会差很多，很多marker都
太不正常，用来做体外感染实验的话效率也会低很多。
不过最近有人向我推荐Karolinska Institute开发出来的一种新方法用于冻存人原代肝
细胞，我也准备近期试一下看看。
只是只是，发表的杂志太那个什么了。。。
http://www.wjgnet.com/1948-5182/full/v4/i5/176.htm
Improved cryopreservation of human hepatocytes using a new xeno free
cryoprotectant solution
另外一种可供参考的方法
http://www.springerprotocols.com/Pdf/doi/10.1007/978-1-59745-20
An Optimised Method for Cryopreservation of Human Hepatocytes

【在 C********4 的大作中提到】

: 可以冻存。
: 比如，李文辉乙肝受体的文章，树鼩原代肝细胞都是一次灌注出来，冻起来
: 慢慢用的。
: 每次都取原代，太麻烦了啊

a*72012-11-20 08:11

18 楼

没有冻存盒可以试试：
4度20分钟
-20度30分钟
-80度过夜
第二天放到液氮里
90-95%FBS+10-5%DMSO