S35labeling+ IkBalpha IP, 这个实验非做不可嘛？# Biology - 生物学
l*a
1 楼
从fidelity smartcash往 boa 的账户转ACH没有收费，现在想从 boa 的账户往 fideli
ty smartcash 转钱 ACH，竟然BOA说有 3块钱fee？请问这个咋免掉？多谢
ty smartcash 转钱 ACH，竟然BOA说有 3块钱fee？请问这个咋免掉？多谢
H*7
2 楼
买来时筷子粗，长了一年，还是筷子粗。而且天一热太阳晒了叶子就变黄变绿最后变得
蜷曲干枯。昨天
用timmer割草还把丫的树皮刮了一大圈，估计上半截要完蛋了。
蜷曲干枯。昨天
用timmer割草还把丫的树皮刮了一大圈，估计上半截要完蛋了。
f*d
3 楼
我们想证明在某种treatment 条件下，NfkB pathway turned on by proteosome
degradation of IkBalpha. 老板说一定要S 35 labeling＋MG132，然后再IP，看
IkBalpha 的ubiquitination 才能证明它是走的那个pathway. 有什么办法可以绕过这
个实验，还是得到同样的结论呢？ 最近想生宝宝，实在不想做这种放射性的实验阿。
degradation of IkBalpha. 老板说一定要S 35 labeling＋MG132，然后再IP，看
IkBalpha 的ubiquitination 才能证明它是走的那个pathway. 有什么办法可以绕过这
个实验，还是得到同样的结论呢？ 最近想生宝宝，实在不想做这种放射性的实验阿。
F*n
4 楼
你从fid里转就是了.....
搞不懂为啥非要用boa
fideli
【在 l**a 的大作中提到】
: 从fidelity smartcash往 boa 的账户转ACH没有收费，现在想从 boa 的账户往 fideli
: ty smartcash 转钱 ACH，竟然BOA说有 3块钱fee？请问这个咋免掉？多谢
搞不懂为啥非要用boa
fideli
【在 l**a 的大作中提到】
: 从fidelity smartcash往 boa 的账户转ACH没有收费，现在想从 boa 的账户往 fideli
: ty smartcash 转钱 ACH，竟然BOA说有 3块钱fee？请问这个咋免掉？多谢
D*r
5 楼
那我家花盆里面那个牙签粗的什么时候能长成筷子粗的啊～
s*s
6 楼
不知道你的具体实验。不过S35比较弱，连表皮都穿不过，这玩意儿只要不吃下去
就没事。小心点就带个口罩，两层手套。
【在 f*******d 的大作中提到】
: 我们想证明在某种treatment 条件下，NfkB pathway turned on by proteosome
: degradation of IkBalpha. 老板说一定要S 35 labeling＋MG132，然后再IP，看
: IkBalpha 的ubiquitination 才能证明它是走的那个pathway. 有什么办法可以绕过这
: 个实验，还是得到同样的结论呢？ 最近想生宝宝，实在不想做这种放射性的实验阿。
就没事。小心点就带个口罩，两层手套。
【在 f*******d 的大作中提到】
: 我们想证明在某种treatment 条件下，NfkB pathway turned on by proteosome
: degradation of IkBalpha. 老板说一定要S 35 labeling＋MG132，然后再IP，看
: IkBalpha 的ubiquitination 才能证明它是走的那个pathway. 有什么办法可以绕过这
: 个实验，还是得到同样的结论呢？ 最近想生宝宝，实在不想做这种放射性的实验阿。
l*a
7 楼
啥叫从 fid 里转啊？
我的钱在 boa 账户里，所以我要从 boa往 fidelity转钱啊
【在 F****n 的大作中提到】
: 你从fid里转就是了.....
: 搞不懂为啥非要用boa
:
: fideli
我的钱在 boa 账户里，所以我要从 boa往 fidelity转钱啊
【在 F****n 的大作中提到】
: 你从fid里转就是了.....
: 搞不懂为啥非要用boa
:
: fideli
R*r
8 楼
古人曰：拔苗助长
【在 H******7 的大作中提到】
: 买来时筷子粗，长了一年，还是筷子粗。而且天一热太阳晒了叶子就变黄变绿最后变得
: 蜷曲干枯。昨天
: 用timmer割草还把丫的树皮刮了一大圈，估计上半截要完蛋了。
【在 H******7 的大作中提到】
: 买来时筷子粗，长了一年，还是筷子粗。而且天一热太阳晒了叶子就变黄变绿最后变得
: 蜷曲干枯。昨天
: 用timmer割草还把丫的树皮刮了一大圈，估计上半截要完蛋了。
r*e
9 楼
s35标记什么？是ubiquitin吗？能转染一个HA-ubi吗，这样直接用HA抗体检测 IP的
IKBa.
【在 f*******d 的大作中提到】
: 我们想证明在某种treatment 条件下，NfkB pathway turned on by proteosome
: degradation of IkBalpha. 老板说一定要S 35 labeling＋MG132，然后再IP，看
: IkBalpha 的ubiquitination 才能证明它是走的那个pathway. 有什么办法可以绕过这
: 个实验，还是得到同样的结论呢？ 最近想生宝宝，实在不想做这种放射性的实验阿。
IKBa.
【在 f*******d 的大作中提到】
: 我们想证明在某种treatment 条件下，NfkB pathway turned on by proteosome
: degradation of IkBalpha. 老板说一定要S 35 labeling＋MG132，然后再IP，看
: IkBalpha 的ubiquitination 才能证明它是走的那个pathway. 有什么办法可以绕过这
: 个实验，还是得到同样的结论呢？ 最近想生宝宝，实在不想做这种放射性的实验阿。
F*n
10 楼
打回去看普及贴
【在 l**a 的大作中提到】
: 啥叫从 fid 里转啊？
: 我的钱在 boa 账户里，所以我要从 boa往 fidelity转钱啊
【在 l**a 的大作中提到】
: 啥叫从 fid 里转啊？
: 我的钱在 boa 账户里，所以我要从 boa往 fidelity转钱啊
c*s
11 楼
才知道? 最好买blood good,真正的红叶。日本枫很多都是嫁接的，注意别把嫁接点搞
掉了。
【在 H******7 的大作中提到】
: 买来时筷子粗，长了一年，还是筷子粗。而且天一热太阳晒了叶子就变黄变绿最后变得
: 蜷曲干枯。昨天
: 用timmer割草还把丫的树皮刮了一大圈，估计上半截要完蛋了。
掉了。
【在 H******7 的大作中提到】
: 买来时筷子粗，长了一年，还是筷子粗。而且天一热太阳晒了叶子就变黄变绿最后变得
: 蜷曲干枯。昨天
: 用timmer割草还把丫的树皮刮了一大圈，估计上半截要完蛋了。
s*y
12 楼
不需要阿。
可以用cycloheximide + Westernblot
MG132 + 6xHis-ubiquitin pulldown
【在 f*******d 的大作中提到】
: 我们想证明在某种treatment 条件下，NfkB pathway turned on by proteosome
: degradation of IkBalpha. 老板说一定要S 35 labeling＋MG132，然后再IP，看
: IkBalpha 的ubiquitination 才能证明它是走的那个pathway. 有什么办法可以绕过这
: 个实验，还是得到同样的结论呢？ 最近想生宝宝，实在不想做这种放射性的实验阿。
可以用cycloheximide + Westernblot
MG132 + 6xHis-ubiquitin pulldown
【在 f*******d 的大作中提到】
: 我们想证明在某种treatment 条件下，NfkB pathway turned on by proteosome
: degradation of IkBalpha. 老板说一定要S 35 labeling＋MG132，然后再IP，看
: IkBalpha 的ubiquitination 才能证明它是走的那个pathway. 有什么办法可以绕过这
: 个实验，还是得到同样的结论呢？ 最近想生宝宝，实在不想做这种放射性的实验阿。
l*a
13 楼
求普及贴link，置底木看到
【在 F****n 的大作中提到】
: 打回去看普及贴
【在 F****n 的大作中提到】
: 打回去看普及贴
g*3
14 楼
My 3 little ones already died.
f*d
15 楼
不能转染，因为要用原代细胞。做western本来能看到IkBalpha已经下降了，但是敏感
度看不到unibiquitination. 所以老板说，要用S35 来提高敏感度。我是觉得，如果加
了MG132，能看到IkBalpha stabalization，那就说明它走的是proteosomal
degradation pathway阿， 为啥一定要看到ubiquitination呢。
度看不到unibiquitination. 所以老板说，要用S35 来提高敏感度。我是觉得，如果加
了MG132，能看到IkBalpha stabalization，那就说明它走的是proteosomal
degradation pathway阿， 为啥一定要看到ubiquitination呢。
F*n
16 楼
google....
给包子我就给你找 :-)
【在 l**a 的大作中提到】
: 求普及贴link，置底木看到
给包子我就给你找 :-)
【在 l**a 的大作中提到】
: 求普及贴link，置底木看到
m*y
17 楼
Japanee maple有dwarf和semi-dwarf的特别品种 不会是买了用来专门做盆景的最大6'
的品种了吧？
的品种了吧？
s*y
18 楼
你的老板是对的，看到带升高未必就是走ubiquitin pathway, 不过倒也
不需要用S35 （用了也未必有说服力，因为高分子量的smear未必就是ubiquinylated
band，审稿者要挑毛病还是很容易的）
你可以在MG132 处理（以及对照）的情况下直接pulldown IkBalpha, 然后用anti-
ubiquitin直接来看pulldown product 上的ubiquitin signal。至于抗体，推荐你用
Millipore monoclonal anti-ubiquitin。 这个方法就比较无可挑剔了，也不涉及放射
性。
【在 f*******d 的大作中提到】
: 不能转染，因为要用原代细胞。做western本来能看到IkBalpha已经下降了，但是敏感
: 度看不到unibiquitination. 所以老板说，要用S35 来提高敏感度。我是觉得，如果加
: 了MG132，能看到IkBalpha stabalization，那就说明它走的是proteosomal
: degradation pathway阿， 为啥一定要看到ubiquitination呢。
不需要用S35 （用了也未必有说服力，因为高分子量的smear未必就是ubiquinylated
band，审稿者要挑毛病还是很容易的）
你可以在MG132 处理（以及对照）的情况下直接pulldown IkBalpha, 然后用anti-
ubiquitin直接来看pulldown product 上的ubiquitin signal。至于抗体，推荐你用
Millipore monoclonal anti-ubiquitin。 这个方法就比较无可挑剔了，也不涉及放射
性。
【在 f*******d 的大作中提到】
: 不能转染，因为要用原代细胞。做western本来能看到IkBalpha已经下降了，但是敏感
: 度看不到unibiquitination. 所以老板说，要用S35 来提高敏感度。我是觉得，如果加
: 了MG132，能看到IkBalpha stabalization，那就说明它走的是proteosomal
: degradation pathway阿， 为啥一定要看到ubiquitination呢。
l*a
19 楼
行啊，一个包子，你帮我找找吧，呵呵
【在 F****n 的大作中提到】
: google....
: 给包子我就给你找 :-)
【在 F****n 的大作中提到】
: google....
: 给包子我就给你找 :-)
c*o
20 楼
优胜劣汰，不要太在意
f*d
21 楼
恩，这个方法好！ 有啥IkBalpha 做 IP的抗体推荐吗？
【在 s******y 的大作中提到】
: 你的老板是对的，看到带升高未必就是走ubiquitin pathway, 不过倒也
: 不需要用S35 （用了也未必有说服力，因为高分子量的smear未必就是ubiquinylated
: band，审稿者要挑毛病还是很容易的）
: 你可以在MG132 处理（以及对照）的情况下直接pulldown IkBalpha, 然后用anti-
: ubiquitin直接来看pulldown product 上的ubiquitin signal。至于抗体，推荐你用
: Millipore monoclonal anti-ubiquitin。 这个方法就比较无可挑剔了，也不涉及放射
: 性。
【在 s******y 的大作中提到】
: 你的老板是对的，看到带升高未必就是走ubiquitin pathway, 不过倒也
: 不需要用S35 （用了也未必有说服力，因为高分子量的smear未必就是ubiquinylated
: band，审稿者要挑毛病还是很容易的）
: 你可以在MG132 处理（以及对照）的情况下直接pulldown IkBalpha, 然后用anti-
: ubiquitin直接来看pulldown product 上的ubiquitin signal。至于抗体，推荐你用
: Millipore monoclonal anti-ubiquitin。 这个方法就比较无可挑剔了，也不涉及放射
: 性。
F*n
22 楼
http://www.mitbbs.com/article_t0/Money/31725407.html
【在 l**a 的大作中提到】
: 行啊，一个包子，你帮我找找吧，呵呵
【在 l**a 的大作中提到】
: 行啊，一个包子，你帮我找找吧，呵呵
m*2
23 楼
到某个新买房的老中那里搞一棵，估计不光不花钱，还能挣俩。
【在 H******7 的大作中提到】
: 买来时筷子粗，长了一年，还是筷子粗。而且天一热太阳晒了叶子就变黄变绿最后变得
: 蜷曲干枯。昨天
: 用timmer割草还把丫的树皮刮了一大圈，估计上半截要完蛋了。
【在 H******7 的大作中提到】
: 买来时筷子粗，长了一年，还是筷子粗。而且天一热太阳晒了叶子就变黄变绿最后变得
: 蜷曲干枯。昨天
: 用timmer割草还把丫的树皮刮了一大圈，估计上半截要完蛋了。
s*y
24 楼
应该有人做过的吧，这个貌似是很经典的一个降解蛋白了。
【在 f*******d 的大作中提到】
: 恩，这个方法好！ 有啥IkBalpha 做 IP的抗体推荐吗？
【在 f*******d 的大作中提到】
: 恩，这个方法好！ 有啥IkBalpha 做 IP的抗体推荐吗？
l*a
25 楼
这个和ACH有什么关系？？
【在 F****n 的大作中提到】
: http://www.mitbbs.com/article_t0/Money/31725407.html
【在 F****n 的大作中提到】
: http://www.mitbbs.com/article_t0/Money/31725407.html
H*7
26 楼
这么小怎么可能嫁接。我是15元钱买了三棵，看seller的花圃照片长大了是很好看的。
其实春天时叶子
是很红很艳那种，不是一般的暗红，只是到了夏天就不行了。
种下去才知道原来是日本枫不喜阳。
【在 c**s 的大作中提到】
: 才知道? 最好买blood good,真正的红叶。日本枫很多都是嫁接的，注意别把嫁接点搞
: 掉了。
其实春天时叶子
是很红很艳那种，不是一般的暗红，只是到了夏天就不行了。
种下去才知道原来是日本枫不喜阳。
【在 c**s 的大作中提到】
: 才知道? 最好买blood good,真正的红叶。日本枫很多都是嫁接的，注意别把嫁接点搞
: 掉了。
F*p
27 楼
S35 is not necessary, only make things complicated.
MG132+IP+Ubi western is enough
MG132+IP+Ubi western is enough
F*n
28 楼
FAQ #1
累死我了
【在 l**a 的大作中提到】
: 这个和ACH有什么关系？？
累死我了
【在 l**a 的大作中提到】
: 这个和ACH有什么关系？？
t*M
29 楼
我家的这个冬天都红红的，特好看
q*x
30 楼
pull from fidelity side.
fideli
【在 l**a 的大作中提到】
: 从fidelity smartcash往 boa 的账户转ACH没有收费，现在想从 boa 的账户往 fideli
: ty smartcash 转钱 ACH，竟然BOA说有 3块钱fee？请问这个咋免掉？多谢
fideli
【在 l**a 的大作中提到】
: 从fidelity smartcash往 boa 的账户转ACH没有收费，现在想从 boa 的账户往 fideli
: ty smartcash 转钱 ACH，竟然BOA说有 3块钱fee？请问这个咋免掉？多谢
m*y
31 楼
l*a
32 楼
我弱智，我没看懂faq 1，但是给你一个包子
【在 F****n 的大作中提到】
: FAQ #1
: 累死我了
【在 F****n 的大作中提到】
: FAQ #1
: 累死我了
l*a
33 楼
……总算明白了，多谢，一个包子
【在 q****x 的大作中提到】
: pull from fidelity side.
:
: fideli
【在 q****x 的大作中提到】
: pull from fidelity side.
:
: fideli
F*n
34 楼
你从Fidelity里把boa的checking加进去，然后在Fidelity里ach
boa收手续费你是boa的事，Fidelity不收费.
【在 l**a 的大作中提到】
: 我弱智，我没看懂faq 1，但是给你一个包子
boa收手续费你是boa的事，Fidelity不收费.
【在 l**a 的大作中提到】
: 我弱智，我没看懂faq 1，但是给你一个包子
l*a
35 楼
多谢
【在 F****n 的大作中提到】
: 你从Fidelity里把boa的checking加进去，然后在Fidelity里ach
: boa收手续费你是boa的事，Fidelity不收费.
【在 F****n 的大作中提到】
: 你从Fidelity里把boa的checking加进去，然后在Fidelity里ach
: boa收手续费你是boa的事，Fidelity不收费.
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