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293FT 换media大部分被冲掉怎么办？？

293FT 换media大部分被冲掉怎么办？？# Biology - 生物学

j*e2013-02-27 08:02

1 楼

AP relocation。现在手里已经有offer，对方学校和现在学校差不多，薪水也差不多，
但因个人原因我想离开现在的学校，funding也可以带走。问题是对方学校催得很紧，
我还有2个onsite没有去，其中一个比现在学校好很多。有没有什么办法拖延offer？
谢谢！

s*k2013-02-27 08:02

2 楼

想大概了解下这个投入程度算是多吗？也好多公司前景稍微多一点判断

c*t2013-02-27 08:02

3 楼

【以下文字转载自 LeisureTime 讨论区】
发信人: chipmunklit (花栗鼠), 信区: LeisureTime
标题: 还珠鼠鼠 (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Nov 1 13:43:10 2010, 美东)
发信人: Powerstation (彼岸§风云皆荡), 信区: PKU
标题: 还珠鼠鼠
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Nov 1 13:31:59 2010, 美东)
最后那张的演员还在拿草梗通鼻孔...

j*g2013-02-27 08:02

4 楼

国内朋友要买，但是怕异地店里不能按时取得到,万一取不到可以退款吗？或者送到异
地店.比如本来纽约的店取貨，送到旧金山店里.

d*i2013-02-27 08:02

5 楼

准备用293FT做lentiviral production，12well刚换了media发现大部分cell都被冲掉
了。。。有啥建议啊？谢谢

a*92013-02-27 08:02

6 楼

这个真没什么办法, 对方学校也不是傻子, 玩几个小花样拖延, 意思不大. 直接和人家
说需要更多时间, 如果人家非要你不可, 可能会答应; 人家不爽, 可能就不答应. 在这
种选择上, 没什么两全其美的方法. 我当年申请AP, onsite完最后一个, 就withdraw了
, 因为前面的offer需要答复. 后来跳槽, 类似的原因, 回绝了两个onsite, 还都是AAU
的学校. 这种事情, 自己选择吧...

s*v2013-02-27 08:02

7 楼

阿，那是个怎样的startup阿

【在 s********k 的大作中提到】

: 想大概了解下这个投入程度算是多吗？也好多公司前景稍微多一点判断

T*U2013-02-27 08:02

8 楼

这么胖。

m*a2013-02-27 08:02

9 楼

问客服，这种问题这儿怎么会知道

【在 j******g 的大作中提到】

: 国内朋友要买，但是怕异地店里不能按时取得到,万一取不到可以退款吗？或者送到异
: 地店.比如本来纽约的店取貨，送到旧金山店里.

c*z2013-02-27 08:02

10 楼

沿着壁，慢慢加
用移液管可能比枪好使

s*y2013-02-27 08:02

11 楼

我想问下你为什么不在onsite完最后一个后立刻让学校给一个估计。就说有学校在催，
能不能给一个答复？尤其是你是最后一个面试人的话？

AAU

【在 a***9 的大作中提到】

: 这个真没什么办法, 对方学校也不是傻子, 玩几个小花样拖延, 意思不大. 直接和人家
: 说需要更多时间, 如果人家非要你不可, 可能会答应; 人家不爽, 可能就不答应. 在这
: 种选择上, 没什么两全其美的方法. 我当年申请AP, onsite完最后一个, 就withdraw了
: , 因为前面的offer需要答复. 后来跳槽, 类似的原因, 回绝了两个onsite, 还都是AAU
: 的学校. 这种事情, 自己选择吧...

w*z2013-02-27 08:02

12 楼

linked IPO 才175M！

l*e2013-02-27 08:02

13 楼

这个好好笑

N*32013-02-27 08:02

14 楼

apple的政策不清楚，但是如果是bestbuy之类的，如果网上下单时选择local店里取但
最终又不去取的话，自动取消订单并退全款。

v*22013-02-27 08:02

15 楼

293FT 贴必不牢，不要等到100% confluence再分，保持在70-80%confluence即可，如
果仍有麻烦，处理如同悬浮细胞

a*92013-02-27 08:02

16 楼

我是第一个去面试的...任何积极的"估计", 都不如一张paper offer实在, 所以我不会
寄希望在口头承诺或者评估上.

【在 s****y 的大作中提到】

: 我想问下你为什么不在onsite完最后一个后立刻让学校给一个估计。就说有学校在催，
: 能不能给一个答复？尤其是你是最后一个面试人的话？
:
: AAU

t*d2013-02-27 08:02

17 楼

那是相当的多了。一般5年的话好的startup也就是3个round的funding，每个round能圈
个20-30M就很了不起了。

Z*e2013-02-27 08:02

18 楼

好肥啊

【在 c*********t 的大作中提到】

: 【以下文字转载自 LeisureTime 讨论区】
: 发信人: chipmunklit (花栗鼠), 信区: LeisureTime
: 标题: 还珠鼠鼠 (转载)
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Nov 1 13:43:10 2010, 美东)
: 发信人: Powerstation (彼岸§风云皆荡), 信区: PKU
: 标题: 还珠鼠鼠
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Nov 1 13:31:59 2010, 美东)
: 最后那张的演员还在拿草梗通鼻孔...

L*S2013-02-27 08:02

19 楼

three possible ways to solve this problem:
(1) Coat the 12-well-plates with vitrogen before plating cells:1/45 dilution
in 1X PBS overnight; 420μl/well;
vitrogen is from Advanced BioMatrix, Inc (5005-B)
Aspirate the nitrogen/PBS before plating cells
This will increase the adhesion.
(2) Collect used medium together with cells when you change medium, then
centrifuge at 1000 rpm (about 500 g, I am not sure, but any speed can pellet
cells without breaking should be ok) for 5 minutes, vacuum the medium, use
new medium resuspend the cell pellet, put them back to 12-well-plates.
(3) Use easy pipet/ pipet boy to vacuum used medium slowly by pointing the
serological pipet against the bottom of well, do not use electronic vacuum.
This still leads some loss of cells but most of them will still in wells.
Hope helps.

j*e2013-02-27 08:02

20 楼

确实是这样。尽量和对方学校坦白是比较好的办法。

c*72013-02-27 08:02

21 楼

这个粉喜欢。

d*i2013-02-27 08:02

22 楼

谢谢~是在transfection之前换media，不是要harvest或者split，vacuum后cell都还好
好的，加了media放平plate后都浮起来了，还没来得及加plasmid呢。。。
实验室有人建议poly-D-lysine coating，正在试

dilution
pellet
use

【在 L****S 的大作中提到】

: three possible ways to solve this problem:
: (1) Coat the 12-well-plates with vitrogen before plating cells:1/45 dilution
: in 1X PBS overnight; 420μl/well;
: vitrogen is from Advanced BioMatrix, Inc (5005-B)
: Aspirate the nitrogen/PBS before plating cells
: This will increase the adhesion.
: (2) Collect used medium together with cells when you change medium, then
: centrifuge at 1000 rpm (about 500 g, I am not sure, but any speed can pellet
: cells without breaking should be ok) for 5 minutes, vacuum the medium, use
: new medium resuspend the cell pellet, put them back to 12-well-plates.

S*C2013-02-27 08:02

23 楼

主要是配词和图画结合

【在 l*****e 的大作中提到】

: 这个好好笑

a*n2013-02-27 08:02

24 楼

transfection前不用换液试试

【在 d*****i 的大作中提到】

: 谢谢~是在transfection之前换media，不是要harvest或者split，vacuum后cell都还好
: 好的，加了media放平plate后都浮起来了，还没来得及加plasmid呢。。。
: 实验室有人建议poly-D-lysine coating，正在试
:
: dilution
: pellet
: use

c*72013-02-27 08:02

25 楼

第一个图片，改成
包子！！！！！！

【在 S*******C 的大作中提到】

: 主要是配词和图画结合

d*i2013-02-27 08:02

26 楼

之后harvest virus总也要换液啊

【在 a*****n 的大作中提到】

: transfection前不用换液试试

S*C2013-02-27 08:02

27 楼

....

【在 c*******7 的大作中提到】

: 第一个图片，改成
: 包子！！！！！！

w*r2013-02-27 08:02

28 楼

用poly-D-Lysin效果不错

c*72013-02-27 08:02

29 楼

我紧跟流行脉搏的，
最后一个可以叫。
橙子和猴子，哇咔咔

【在 S*******C 的大作中提到】

: ....

s*s2013-02-27 08:02

30 楼

介个介个。我也做过293FT, 没这么容易浮起来啊！
你是不是加了质粒以后时间太长了？隔多久换的medium

【在 d*****i 的大作中提到】

: 准备用293FT做lentiviral production，12well刚换了media发现大部分cell都被冲掉
: 了。。。有啥建议啊？谢谢

x*g2013-02-27 08:02

31 楼

很可爱的鼠鼠
比新版还珠看着好多了

d*i2013-02-27 08:02

32 楼

是在加质粒前换media，用的是12well，不知是不是和well大小也有关。seeding后过了
两天换media

【在 s******s 的大作中提到】

: 介个介个。我也做过293FT, 没这么容易浮起来啊！
: 你是不是加了质粒以后时间太长了？隔多久换的medium

S*C2013-02-27 08:02

33 楼

....

【在 c*******7 的大作中提到】

: 我紧跟流行脉搏的，
: 最后一个可以叫。
: 橙子和猴子，哇咔咔

s*s2013-02-27 08:02

34 楼

12 well我就不知道了。我一般直接用10cm的

【在 d*****i 的大作中提到】

: 是在加质粒前换media，用的是12well，不知是不是和well大小也有关。seeding后过了
: 两天换media

c*t2013-02-27 08:02

35 楼

原来你做了这里的斑斑，橙子也回来做版大了，不吃到你俩给的包子都不知道，呵呵，
多谢了

【在 S*******C 的大作中提到】

: 主要是配词和图画结合

a*n2013-02-27 08:02

36 楼

you can also use regular 293t if you feel hard to handle 293ft
I usually use 293t for profucing lentiviruses. I do not change medium before
transfection but change medium 24hours after transfection.

【在 d*****i 的大作中提到】

: 是在加质粒前换media，用的是12well，不知是不是和well大小也有关。seeding后过了
: 两天换media

c*t2013-02-27 08:02

37 楼

哈哈

【在 x*****g 的大作中提到】

: 很可爱的鼠鼠
: 比新版还珠看着好多了

c*z2013-02-27 08:02

38 楼

方法（2）会把所有死细胞都收进去，做transfection还可以，做assay就可能有问题
293, 293T, 他们全家都是这样的
293FT还算好的，上面两个更容易冲掉，而且细胞之间binding更紧，容易cluster
如果电动pipet有blow out功能，要切换到flow out，沿着wall慢慢加，不行就用1mL
pipet加

dilution
pellet
use

【在 L****S 的大作中提到】

S*C2013-02-27 08:02

39 楼

呵呵客气我做板斧有一个月了：）

【在 c*********t 的大作中提到】

: 原来你做了这里的斑斑，橙子也回来做版大了，不吃到你俩给的包子都不知道，呵呵，
: 多谢了

d*i2013-02-27 08:02

40 楼

上来update下：现在的办法是头一天seeding，poly-D-lysine coating，第二天不换
media直接transfect。现在觉得还不错，cell基本不会被冲掉，GFP control发现
transfection efficiency大概90%，看来coating对transfection没啥影响~
多谢各位帮助！

c*t2013-02-27 08:02

41 楼

恭喜一个，呵呵

【在 S*******C 的大作中提到】

: 呵呵客气我做板斧有一个月了：）

c*e2013-02-27 08:02

42 楼

尔康这个很生动！

【在 S*******C 的大作中提到】

: 主要是配词和图画结合

c*e2013-02-27 08:02

43 楼

差点一激动就给m了。。。

力的人。当你在黑夜里向我伸出手的时候，被牵走的不是我的人，而是我的整个灵魂。

【在 c*******7 的大作中提到】

: 第一个图片，改成
: 包子！！！！！！

c*e2013-02-27 08:02

44 楼

才一个用？感觉好久了。

【在 S*******C 的大作中提到】

: 呵呵客气我做板斧有一个月了：）

c*72013-02-27 08:02

45 楼

就不能表扬一下我的那个包子很生动吗。。。我伤心的去发贴子了。。。

【在 c********e 的大作中提到】

: 尔康这个很生动！

S*C2013-02-27 08:02

46 楼

呵呵谢谢:)

【在 c*********t 的大作中提到】

: 恭喜一个，呵呵

c*e2013-02-27 08:02

47 楼

你仔细看！！

【在 c*******7 的大作中提到】

: 就不能表扬一下我的那个包子很生动吗。。。我伤心的去发贴子了。。。

S*C2013-02-27 08:02

48 楼

nod.

【在 c********e 的大作中提到】

: 尔康这个很生动！

S*C2013-02-27 08:02

49 楼

一个多月..

【在 c********e 的大作中提到】

: 才一个用？感觉好久了。