生物牛人过来看看这篇Nature Biotechnology里的技术问题！# Biology - 生物学
q*d
1 楼
这篇文章的方法我怎么看不明白呢？如果我看明白了，就是它有明显的错误，但我相信
NBT是不可能有错误的，尤其是这位大神实验室经常出一些Nature, Science的，所以说
还是我没有看明白。现在还是直奔主题吧！问题幼稚，还望大神们多多指教！
文章链接在这里：http://www.nature.com/nbt/journal/v27/n3/full/nbt.1526.html
我们是想用它的方法进行细胞转座子分析，看看细胞内的转座子都跑哪里去了。因此我
想follow他们的LM-PCR方法。
原文272页的Pyrosequencing说到：把转座子的左边用BfaI切，右边用NlaIII切，然后
与合成的linker连接：引物的设计如下：
To make the BfaI linker, the following oligonucleotide sequences were
annealed together using standard protocols, top strand 5’-
GTAATACGACTCACTATAGGGCTCCGCTTAAGGGAC-3’ and bottom strand 5’-
TAGTCCCTTAAGCGGAG-3’. As for the NlaIII linker, the following oligo-
nucleotide sequences were annealed together using standard protocols, top
strand5’-GTAATACGACTCACTATAGGGCTCCGCTTAAGGGACCATG-3￠ and bottom strand 5’
- GTCCCTTAAGCGGAGCC-3’.
我分析了一下这两对引物，发现他们根本不可能和BfaI和NlaIII产生的缺口连接。结果
见图片：
另外，他们连接之后还要用BamHI或XhoI切一刀，不明白是啥意思？
第一轮PCR我能理解，就是从linker和转座子上面分别取一段PCR，但是第二段加什么
FusA barcode我就不理解了，并且原文也没有提供引物的序列！
牛人给讲解一下啊！我就是想用这个技术，所以本篇文章我只看方法这部分，医学这方
面我也不懂，麻烦了！
NBT是不可能有错误的，尤其是这位大神实验室经常出一些Nature, Science的，所以说
还是我没有看明白。现在还是直奔主题吧！问题幼稚，还望大神们多多指教！
文章链接在这里：http://www.nature.com/nbt/journal/v27/n3/full/nbt.1526.html
我们是想用它的方法进行细胞转座子分析，看看细胞内的转座子都跑哪里去了。因此我
想follow他们的LM-PCR方法。
原文272页的Pyrosequencing说到：把转座子的左边用BfaI切，右边用NlaIII切，然后
与合成的linker连接：引物的设计如下：
To make the BfaI linker, the following oligonucleotide sequences were
annealed together using standard protocols, top strand 5’-
GTAATACGACTCACTATAGGGCTCCGCTTAAGGGAC-3’ and bottom strand 5’-
TAGTCCCTTAAGCGGAG-3’. As for the NlaIII linker, the following oligo-
nucleotide sequences were annealed together using standard protocols, top
strand5’-GTAATACGACTCACTATAGGGCTCCGCTTAAGGGACCATG-3￠ and bottom strand 5’
- GTCCCTTAAGCGGAGCC-3’.
我分析了一下这两对引物，发现他们根本不可能和BfaI和NlaIII产生的缺口连接。结果
见图片：
另外，他们连接之后还要用BamHI或XhoI切一刀，不明白是啥意思？
第一轮PCR我能理解，就是从linker和转座子上面分别取一段PCR，但是第二段加什么
FusA barcode我就不理解了，并且原文也没有提供引物的序列！
牛人给讲解一下啊！我就是想用这个技术，所以本篇文章我只看方法这部分，医学这方
面我也不懂，麻烦了！
