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germline specific Cre mediated KO 求教

germline specific Cre mediated KO 求教# Biology - 生物学

A*r2013-04-01 07:04

1 楼

愿普天下父亲们都健康快乐！（搬家看来还是有好处的。）
勤儿：你好。
时代发展，科技进步，强大的通讯网络拉近了世界各地的距
离，直接进行语言交流，使我们之间大有天涯咫尺之感。便捷的
通讯形式几乎取代了文字通信，这大概是写信很少的原因吧。
虽然能经常听到你的声音，但你只身在美求学，我们无时不
在想念。君子务本，本立而道生。既来之，则安之，学有所成或
学有所得。学有进步乃我们之所盼也，此其一也，有个健康的体
魄才是最重要的。只身在外，一定要自己管理好饮食起居，调整
好精神状态，遇到困难，既不可低沉，更不可自暴自弃。遇到困
难要拿出勇气去克服，决不可失去信心。只要有坚定的信念就没
有过不去的坎。事实上人生本来就是没穷尽无终点的马拉松赛跑，
路程很长很长。君子敏于事而慎于言，就有道而正焉。好人一生
平安。
家里还是老样子，一切都好，请放心。今随信寄去保险公司
所要证件两份。
务要珍重身体，学业进步，专嘱。
永远爱你的父母

b*g2013-04-01 07:04

2 楼

新人求教我在做一个基因的oocyte specific KO 拿到正确genotype的老鼠后去做
staining 那个蛋白居然还在... 请问会是些什么原因呢我的mating scheme如下
Cre+ ; fl/+ male x fl/fl female 得到 Cre+ fl/fl female
现在想到的问题有一下几个 1.可能蛋白在Cre前就已经表达了
2. 同时excise 两个有loxP的allele是不是不够efficient阿? 由于我做的是oocyte 所
以尽量选择让公老鼠carry Cre, 因为是homozygous lethal 我不是不是需要一步一步
的去除基因呢
请问大家我该如何着手解决这个问题? 谢谢了!

s*s2013-04-01 07:04

3 楼

哇～～～～你父母好有才啊！！

【在 A*********r 的大作中提到】

: 愿普天下父亲们都健康快乐！（搬家看来还是有好处的。）
: 勤儿：你好。
: 时代发展，科技进步，强大的通讯网络拉近了世界各地的距
: 离，直接进行语言交流，使我们之间大有天涯咫尺之感。便捷的
: 通讯形式几乎取代了文字通信，这大概是写信很少的原因吧。
: 虽然能经常听到你的声音，但你只身在美求学，我们无时不
: 在想念。君子务本，本立而道生。既来之，则安之，学有所成或
: 学有所得。学有进步乃我们之所盼也，此其一也，有个健康的体
: 魄才是最重要的。只身在外，一定要自己管理好饮食起居，调整
: 好精神状态，遇到困难，既不可低沉，更不可自暴自弃。遇到困

D*a2013-04-01 07:04

4 楼

cre刚切完还有蛋白也是可能的。flox/flox我觉得不影响cre的效率的，cre好用的话一
个两个都无所谓，不好用的话就是不好用了。
你做oocyte 的 genotype了么，是什么结果？直接上staining看蛋白了？当然oocyte
特异PCR不好做，但是你自己想办法看见带吧。
如果cre f/f的母老鼠跟+/- 公老鼠交配，后代应该是一半纯和致死的，你观察到了么？
你现在的信息说这个cre好用不好用都太早。

v*Y2013-04-01 07:04

5 楼

龍飛鳳舞，是很有才
我其實還是很喜歡手寫的信的
比如，情書就應該手寫才夠誠意
所以這樣的家書也包含了父母濃濃的掛念
贊~！！！

f*n2013-04-01 07:04

6 楼

有几种可能：
1. cre不行，你没说是哪个cre，帮不了你；
2. 抗体不行，识别的根本不是你的这个蛋白，做过western blot吗？
3. 抗体识别残余的蛋白，那就做RT-PCR验证，看看mRNA的那一段还在不在；
4. genotyping有问题，那就不说啥了。

【在 b*****g 的大作中提到】

: 新人求教我在做一个基因的oocyte specific KO 拿到正确genotype的老鼠后去做
: staining 那个蛋白居然还在... 请问会是些什么原因呢我的mating scheme如下
: Cre+ ; fl/+ male x fl/fl female 得到 Cre+ fl/fl female
: 现在想到的问题有一下几个 1.可能蛋白在Cre前就已经表达了
: 2. 同时excise 两个有loxP的allele是不是不够efficient阿? 由于我做的是oocyte 所
: 以尽量选择让公老鼠carry Cre, 因为是homozygous lethal 我不是不是需要一步一步
: 的去除基因呢
: 请问大家我该如何着手解决这个问题? 谢谢了!

v*Y2013-04-01 07:04

7 楼

突然發現，竟然還是我最愛的繁體~
可以問下lz是哪裡的，還有爸爸寫的還是媽媽寫的？太強了

b*g2013-04-01 07:04

8 楼

谢谢,
1. 我用的是ZP3-Cre
2. 做western有点不太现实, 蛋白表达度很低, 而且卵子那么小... 需要至少250以上
的卵细胞才能detectable, 需要很多的老鼠, 目前没有那么多.
3.恩打算下步试试这个RT, 请问从zp3-cre从表达到我做实验应该至少有25+的时间
这个蛋白稳定性很好?
4. 这个应该没有错把... 不然太....耸了...pool了3只老鼠的卵子染色的每个都有
specific staining pattern 跟control一样...
哎头疼

【在 f*******n 的大作中提到】

: 有几种可能：
: 1. cre不行，你没说是哪个cre，帮不了你；
: 2. 抗体不行，识别的根本不是你的这个蛋白，做过western blot吗？
: 3. 抗体识别残余的蛋白，那就做RT-PCR验证，看看mRNA的那一段还在不在；
: 4. genotyping有问题，那就不说啥了。

w*o2013-04-01 07:04

9 楼

好字！

【在 A*********r 的大作中提到】

b*g2013-04-01 07:04

10 楼

谢谢拉~
oocyte genotype没有做太费尽了..本来想涂个捷径的
反过来的交配也没有做呢不好意思打错了, 不是lethal, 是offspring存活率很差.

么？

【在 D*a 的大作中提到】

: cre刚切完还有蛋白也是可能的。flox/flox我觉得不影响cre的效率的，cre好用的话一
: 个两个都无所谓，不好用的话就是不好用了。
: 你做oocyte 的 genotype了么，是什么结果？直接上staining看蛋白了？当然oocyte
: 特异PCR不好做，但是你自己想办法看见带吧。
: 如果cre f/f的母老鼠跟+/- 公老鼠交配，后代应该是一半纯和致死的，你观察到了么？
: 你现在的信息说这个cre好用不好用都太早。

f*n2013-04-01 07:04

11 楼

家庭教育还是很重要的，这个信写得太好了!
赞，君子务本，本立而道生。。。

D*a2013-04-01 07:04

12 楼

也就是说P1的应该都有存活了？那么我建议你养四五只母老鼠交配一下看看，是不是后
代出现+/-和-/-的比例大概是一比一，-/-的genotype带是不是纯的，如果表型很独特
的话还可以看看它们是不是显示-/-的表型。虽然四五只母老鼠也不多，但是比例不应
该太离谱，如果你的oocyte理论上能100%敲除的话，有条件多养几只准确性会更高点。
这个不一定比你提卵子麻烦的，而且老鼠也死不了。我倒是好奇怎么提卵子啊，取卵巢
还是superovulation？感觉卵巢里面很难分离卵子啊，而且你的cre在active的里面表
达还是所有卵子都表达啊
我暂时也想不起来更好的检验办法了，对这个cre也不熟

【在 b*****g 的大作中提到】

: 谢谢拉~
: oocyte genotype没有做太费尽了..本来想涂个捷径的
: 反过来的交配也没有做呢不好意思打错了, 不是lethal, 是offspring存活率很差.
:
: 么？

s*72013-04-01 07:04

13 楼

哇，原来是一年前的帖子，原来是七年前的家属
勤儿，这个名字好，天道酬勤！

b*g2013-04-01 07:04

14 楼

谢谢, 那个fl/+ 和 fl/fl的比例是大致1:1的现在就是要去研究它在卵子里面的表型
所以也是个未知数
卵子还是很好提取的先打激素催卵然后取卵巢把follicle一弄破里面的卵子就都跑
出来了
按理论上来说Cre 是在所有的卵子里面都表达的 ZP3 是zona pellucida 3 是用来制造
卵子外面一层的糖蛋白用于sperm egg interaction 但是得等到oocyte 发育到一定的
阶段才表达但是距里zp3表达到我做实验应该有1个月了哎就是不明白为什么还能看
到蛋白

【在 D*a 的大作中提到】

: 也就是说P1的应该都有存活了？那么我建议你养四五只母老鼠交配一下看看，是不是后
: 代出现+/-和-/-的比例大概是一比一，-/-的genotype带是不是纯的，如果表型很独特
: 的话还可以看看它们是不是显示-/-的表型。虽然四五只母老鼠也不多，但是比例不应
: 该太离谱，如果你的oocyte理论上能100%敲除的话，有条件多养几只准确性会更高点。
: 这个不一定比你提卵子麻烦的，而且老鼠也死不了。我倒是好奇怎么提卵子啊，取卵巢
: 还是superovulation？感觉卵巢里面很难分离卵子啊，而且你的cre在active的里面表
: 达还是所有卵子都表达啊
: 我暂时也想不起来更好的检验办法了，对这个cre也不熟

f*n2013-04-01 07:04

15 楼

呵呵，mm冰雪阿，不知道为啥被翻出来了，不过写得很棒。赞！

【在 s*******7 的大作中提到】

: 哇，原来是一年前的帖子，原来是七年前的家属
: 勤儿，这个名字好，天道酬勤！

f*n2013-04-01 07:04

16 楼

这个cre在growing follicle表达，看别人文章，效率还是不错的。每次实验要分离
oocyte，不能直接用ovary做，是挺麻烦的。可能还是抗体的特异性不好吧，如果是你
这个蛋白能在granulosa cells和oocyte之间转运，那你要发达了。

【在 b*****g 的大作中提到】

: 谢谢,
: 1. 我用的是ZP3-Cre
: 2. 做western有点不太现实, 蛋白表达度很低, 而且卵子那么小... 需要至少250以上
: 的卵细胞才能detectable, 需要很多的老鼠, 目前没有那么多.
: 3.恩打算下步试试这个RT, 请问从zp3-cre从表达到我做实验应该至少有25+的时间
: 这个蛋白稳定性很好?
: 4. 这个应该没有错把... 不然太....耸了...pool了3只老鼠的卵子染色的每个都有
: specific staining pattern 跟control一样...
: 哎头疼

s*72013-04-01 07:04

17 楼

多谢大师吉言啊
多亏sunshinings翻出好文，大家共赏啊

【在 f********n 的大作中提到】

: 呵呵，mm冰雪阿，不知道为啥被翻出来了，不过写得很棒。赞！

b*g2013-04-01 07:04

18 楼

哇一看就知道遇上行内人了
要是真这样的话我做梦都要笑醒了
我还是乖乖的去看看究竟没有没有在oocyte里recombine吧

【在 f*******n 的大作中提到】

: 这个cre在growing follicle表达，看别人文章，效率还是不错的。每次实验要分离
: oocyte，不能直接用ovary做，是挺麻烦的。可能还是抗体的特异性不好吧，如果是你
: 这个蛋白能在granulosa cells和oocyte之间转运，那你要发达了。

b*M2013-04-01 07:04

19 楼

写得很好。不过道理讲起来容易做起来难。
你应该把这信多复印几份裱起来家里每个门上贴一份，用来激励自己。

【在 A*********r 的大作中提到】

f*n2013-04-01 07:04

20 楼

是小同行啊，以后多交流。

【在 b*****g 的大作中提到】

: 哇一看就知道遇上行内人了
: 要是真这样的话我做梦都要笑醒了
: 我还是乖乖的去看看究竟没有没有在oocyte里recombine吧

f*n2013-04-01 07:04

21 楼

是啊，刚看了一下，还真是她给翻出来的，考古辛苦了！

【在 s*******7 的大作中提到】

: 多谢大师吉言啊
: 多亏sunshinings翻出好文，大家共赏啊

D*a2013-04-01 07:04

22 楼

fl/+ 和 fl/fl的比例应该是没什么疑问，因为你这一步只是剪尾巴看体细胞。但是现
在你对oocyte敲除有疑问，让被敲除掉的卵子受精看看是不是能长成-/-，我觉得这个
应该比pool卵子更有效一些。
如果你用收获的卵细胞来做PCR或者RT PCR，如果混有别的细胞，会有污染，到时候你
也不知道是因为体细胞污染，还是因为你的卵细胞敲除不完全。
如果这个蛋白敲除不影响卵子受精和胚胎发育，-/-的老鼠我觉得是最有说服力的。
genytype的问题毕竟还是用genotype最有说服力。这是我能想到的方法了，不知道其他
人都是怎么做的。
PS我突然想到卵细胞是单倍体啊，按你写的母鼠genoytpe，你的Cre应该只能进一半的
细胞里啊，所以你的卵细胞不是应该只有一半是KO的？还是Cre相当多没有allele的卵
子里面也会有Cre蛋白？反而你的细胞里都是flox单倍体，没有两个等位基因需要敲除
啊，跟两个flox还是一个flox的效率没关系啊。

【在 b*****g 的大作中提到】

: 谢谢, 那个fl/+ 和 fl/fl的比例是大致1:1的现在就是要去研究它在卵子里面的表型
: 所以也是个未知数
: 卵子还是很好提取的先打激素催卵然后取卵巢把follicle一弄破里面的卵子就都跑
: 出来了
: 按理论上来说Cre 是在所有的卵子里面都表达的 ZP3 是zona pellucida 3 是用来制造
: 卵子外面一层的糖蛋白用于sperm egg interaction 但是得等到oocyte 发育到一定的
: 阶段才表达但是距里zp3表达到我做实验应该有1个月了哎就是不明白为什么还能看
: 到蛋白

s*02013-04-01 07:04

23 楼

mm的父母很有才学呀。

【在 A*********r 的大作中提到】

D*a2013-04-01 07:04

24 楼

你说得距离ZP3表达有25天了，是说性成熟25天了吧，因为从打激素到取卵子应该等不
了25天吧，一个星期就得取了吧。
查了一下zona pellucida是在primordial变成primary才出现的吧？也就是楼上
followwen说得growing follicle里面，那么你的大量的静息卵子里面根本没有Cre蛋白
，也就没有KO，所以你如果打完激素就把老鼠切了，那么刚刚激活的卵子里面还有残留
蛋白应该也可以理解

【在 b*****g 的大作中提到】

f*n2013-04-01 07:04

25 楼

是这样，父母时常提点还是很重要，道理的实践就如学习，学而不思则邙，思而不学则
殆，需要时常自省的。

【在 b*******M 的大作中提到】

: 写得很好。不过道理讲起来容易做起来难。
: 你应该把这信多复印几份裱起来家里每个门上贴一份，用来激励自己。

b*g2013-04-01 07:04

26 楼

谢谢~ 你们都好热心
是这样的, 老鼠在出生后不久绝大多数的primary oocyte就开始生长了, 然后我只是在
25天左右的时候给激素, 2天后提取oocyte. 给激素的目的其实就是更进一步促进
follicle and oocyte growth 等到我提取的时候他们就是已经很成熟的meiotically
competent的卵子了所以我认为跟我打针后2天就取卵关系不大. zp3 应该出生后不久
就开始表达了倒是越到后来表达变多倒是很有可能.
那些静息的形态很明显, 这种的卵子和follicle之间还没有形成antrum 所以我是不会
用的.
然后哺乳动物的oogenesis比较奇特不是contineous process, arrest at prophase I
. 所以在我分离oocyte的时候他们还是在2倍体. 按理说如果cre 有效果的话就已经把2
个都切了
我想法子做个oocyte' genotype或者RT把, 如果不work的话我打算一个allele的敲做
老鼠genetics 真是费时间阿 T-T

【在 D*a 的大作中提到】

: 你说得距离ZP3表达有25天了，是说性成熟25天了吧，因为从打激素到取卵子应该等不
: 了25天吧，一个星期就得取了吧。
: 查了一下zona pellucida是在primordial变成primary才出现的吧？也就是楼上
: followwen说得growing follicle里面，那么你的大量的静息卵子里面根本没有Cre蛋白
: ，也就没有KO，所以你如果打完激素就把老鼠切了，那么刚刚激活的卵子里面还有残留
: 蛋白应该也可以理解

s*72013-04-01 07:04

27 楼

学而不思则罔

学而不思则邙，思而不学则殆。

【在 f********n 的大作中提到】

: 是这样，父母时常提点还是很重要，道理的实践就如学习，学而不思则邙，思而不学则
: 殆，需要时常自省的。

D*a2013-04-01 07:04

28 楼

我课题涉及了一点小鼠生殖，知道个皮毛，肯定不全面。卵子计数从出生到性成熟是迅
速下降的，我理解的是那些出生后马上active的卵子都凋亡了，不会存活25天，所以那
些卵子就算被KO了也已经凋亡了，并不会在你取的里面吧。你取的时候正在active的卵
子仍然还是刚刚才被active的啊，也就是说对这些卵子来说zp3并没有一直活跃25天吧？

I
把2

【在 b*****g 的大作中提到】

: 谢谢~ 你们都好热心
: 是这样的, 老鼠在出生后不久绝大多数的primary oocyte就开始生长了, 然后我只是在
: 25天左右的时候给激素, 2天后提取oocyte. 给激素的目的其实就是更进一步促进
: follicle and oocyte growth 等到我提取的时候他们就是已经很成熟的meiotically
: competent的卵子了所以我认为跟我打针后2天就取卵关系不大. zp3 应该出生后不久
: 就开始表达了倒是越到后来表达变多倒是很有可能.
: 那些静息的形态很明显, 这种的卵子和follicle之间还没有形成antrum 所以我是不会
: 用的.
: 然后哺乳动物的oogenesis比较奇特不是contineous process, arrest at prophase I
: . 所以在我分离oocyte的时候他们还是在2倍体. 按理说如果cre 有效果的话就已经把2

f*n2013-04-01 07:04

29 楼

谢谢，找了半天没找到，哈哈~

【在 s*******7 的大作中提到】

: 学而不思则罔
:
: 学而不思则邙，思而不学则殆。

b*g2013-04-01 07:04

30 楼

不好意思这两天没得空
我认为没有死掉的那些就开始长了变成secondary- tertiary follicle 等等
然后给了激素后可能就是进一步的促进了antral follicle的形成我取的就是这种
follicle里面的卵子不排除有些可能表达zp3 的日子不多但是至少应该work了感觉
日后多多交流呀~~

吧？

【在 D*a 的大作中提到】

: 我课题涉及了一点小鼠生殖，知道个皮毛，肯定不全面。卵子计数从出生到性成熟是迅
: 速下降的，我理解的是那些出生后马上active的卵子都凋亡了，不会存活25天，所以那
: 些卵子就算被KO了也已经凋亡了，并不会在你取的里面吧。你取的时候正在active的卵
: 子仍然还是刚刚才被active的啊，也就是说对这些卵子来说zp3并没有一直活跃25天吧？
:
: I
: 把2

A*r2013-04-01 07:04

31 楼

呵呵，居然把去年的帖子的翻出来。谢谢美眉。

【在 s*********s 的大作中提到】

: 哇～～～～你父母好有才啊！！

a*32013-04-01 07:04

32 楼

兄弟，你得回去再读读ZP3 那篇文章，要用ZP3 CRE+ FLOX/+ 和WT MALE 杂过才行

【在 b*****g 的大作中提到】

A*r2013-04-01 07:04

33 楼

爸爸写的。

【在 v******Y 的大作中提到】

: 突然發現，竟然還是我最愛的繁體~
: 可以問下lz是哪裡的，還有爸爸寫的還是媽媽寫的？太強了

l*12013-04-01 07:04

34 楼

Mark!

【在 a***3 的大作中提到】

: 兄弟，你得回去再读读ZP3 那篇文章，要用ZP3 CRE+ FLOX/+ 和WT MALE 杂过才行

f*r2013-04-01 07:04

35 楼

勤儿妹妹，你可要当心被人肉

【在 A*********r 的大作中提到】

: 呵呵，居然把去年的帖子的翻出来。谢谢美眉。

D*a2013-04-01 07:04

36 楼

那这样的话也可能KO了但是残留蛋白还没除干净，所以只能搞PCR是最有说服力的。。。
我不知道active了的卵子能活多久，好像是迅速就antral了吧，小鼠四五天就一个
cycle啊

【在 b*****g 的大作中提到】

: 不好意思这两天没得空
: 我认为没有死掉的那些就开始长了变成secondary- tertiary follicle 等等
: 然后给了激素后可能就是进一步的促进了antral follicle的形成我取的就是这种
: follicle里面的卵子不排除有些可能表达zp3 的日子不多但是至少应该work了感觉
: 日后多多交流呀~~
:
: 吧？

A*r2013-04-01 07:04

37 楼

是啊。我现在应该一日三省之。

【在 b*******M 的大作中提到】

: 写得很好。不过道理讲起来容易做起来难。
: 你应该把这信多复印几份裱起来家里每个门上贴一份，用来激励自己。

b*g2013-04-01 07:04

38 楼

WT male?? 那个是测试交配吧?
如果正式实验中也那么用, 那岂不是都要有一个 WT allele了? 怎么delete呢? 不懂了
...

【在 a***3 的大作中提到】

: 兄弟，你得回去再读读ZP3 那篇文章，要用ZP3 CRE+ FLOX/+ 和WT MALE 杂过才行

A*r2013-04-01 07:04

39 楼

呵呵。没事，反正也很多人认识我。

【在 f***r 的大作中提到】

: 勤儿妹妹，你可要当心被人肉

b*g2013-04-01 07:04

40 楼

是呢我觉得这个的可能性很大要么就是我的抗体问题
4,5天一个cycle 其实只是它的follicle recruitment and growth 最后到ovulation的
过程所以只是folliculugenesis 的后面一段
primate 也是一样的真正一个follicle 从dormant primordial follicle 到 pre
ovulatory follicle 需要150天, 也就是5个mensus cycle那么长. 但每次的cycle中只
是recruit 一部分比较成熟的 secondary follicles 进一步成长所以还是存活时间相
当长的应该cre 算active了比较久的时间了可能就是蛋白先表达了
况且我给了激素等于ovarian over stimulation 本来那些要死掉的follicle 全部存
活下来了跟fertility clinic的促排差不多的道理

。。

【在 D*a 的大作中提到】

: 那这样的话也可能KO了但是残留蛋白还没除干净，所以只能搞PCR是最有说服力的。。。
: 我不知道active了的卵子能活多久，好像是迅速就antral了吧，小鼠四五天就一个
: cycle啊

f*r2013-04-01 07:04

41 楼

这么想得开？那你奔个好了，新年奔最吉利了

【在 A*********r 的大作中提到】

: 呵呵。没事，反正也很多人认识我。

f*o2013-04-01 07:04

42 楼

可以用gdf9cre， zp3primaryfolicle 表达，gdf9在primodiaal 就表达了，早不少，
尤其你的蛋白在卵泡发育早期就有的话，更要用gdf9,说不定有时候还要尝试在PGC中剔
除基因，western blot 完全可以测定，如果用18天小鼠，pmsg后一个老鼠可以娶到100
个gv oocyte, 用14天的你可以娶到200－300个growing oocytyes。

v*Y2013-04-01 07:04

43 楼

記得美眉字寫得不錯，原來是家庭遺傳？~

b*g2013-04-01 07:04

44 楼

谢谢, 这就是我们当时决策上的失误,当时没有好好考虑用了别人免费提供的zp3-cre
现在超级后悔....
我从来没有试过那么早做pmsg诶如果14天就去 pmsg能200-300个oocyte? 太振奋人心
了对了我的是B6 background 正题感觉比我用的B6X SJL F1要小很多的样子只要不做
功能性的实验应该不会有影响吧?

100

【在 f*******o 的大作中提到】

: 可以用gdf9cre， zp3primaryfolicle 表达，gdf9在primodiaal 就表达了，早不少，
: 尤其你的蛋白在卵泡发育早期就有的话，更要用gdf9,说不定有时候还要尝试在PGC中剔
: 除基因，western blot 完全可以测定，如果用18天小鼠，pmsg后一个老鼠可以娶到100
: 个gv oocyte, 用14天的你可以娶到200－300个growing oocytyes。

s*s2013-04-01 07:04

45 楼

哎呀呀～～美眉们，俺没有翻，绝对没有翻，我就是今天来了鹊桥版，看了前50个帖子
，首页上的，就点进去回复了，还以为是新帖子呢。
不过LZ的父母写字好漂亮，道理也说的很好，赞家教哦～～～

【在 s*******7 的大作中提到】

: 多谢大师吉言啊
: 多亏sunshinings翻出好文，大家共赏啊

f*o2013-04-01 07:04

46 楼

用cre之前要先测定你的蛋白表达谱，看是否在很早期表达，如果5天左右表达量就很
高，用zp3恐怕就晚了。不过你用不同的cre可以得到不同的结果，这样你研究更全面，
发文章档次也会上去，所以最好你两个都做，我看到有些人把zp3 cre, gdf9cre 甚至
cumulus cell里的基因都敲掉，然后放到一篇文章里。用b6 没有影响，在文章里表明
所用的种类即可。不同背景老鼠有时候，phenotype有些差别。
一般可以娶到280左右。

【在 b*****g 的大作中提到】

: 谢谢, 这就是我们当时决策上的失误,当时没有好好考虑用了别人免费提供的zp3-cre
: 现在超级后悔....
: 我从来没有试过那么早做pmsg诶如果14天就去 pmsg能200-300个oocyte? 太振奋人心
: 了对了我的是B6 background 正题感觉比我用的B6X SJL F1要小很多的样子只要不做
: 功能性的实验应该不会有影响吧?
:
: 100

w*42013-04-01 07:04

47 楼

天下的父母都是一样的。
赞贵父好文采。

【在 A*********r 的大作中提到】

b*g2013-04-01 07:04

48 楼

我比较惊讶的是在14天follicle就会respond to PMSG嘛? 可不可以丢一个reference
给我呀当然这些分离出来的oocyte应该不具备meiotic competence 对吧?

【在 f*******o 的大作中提到】

: 用cre之前要先测定你的蛋白表达谱，看是否在很早期表达，如果5天左右表达量就很
: 高，用zp3恐怕就晚了。不过你用不同的cre可以得到不同的结果，这样你研究更全面，
: 发文章档次也会上去，所以最好你两个都做，我看到有些人把zp3 cre, gdf9cre 甚至
: cumulus cell里的基因都敲掉，然后放到一篇文章里。用b6 没有影响，在文章里表明
: 所用的种类即可。不同背景老鼠有时候，phenotype有些差别。
: 一般可以娶到280左右。

c*l2013-04-01 07:04

49 楼

哇哈哈前两句好友意思
强大的网络。。。

【在 A*********r 的大作中提到】

f*o2013-04-01 07:04

50 楼

对不起，我没有说清楚，12－14天你取的是incompetent oocytes, 直径小一些，不能
用pmsg，要用胶原酶消化卵巢组织，可以娶到280左右。

reference

【在 b*****g 的大作中提到】

: 我比较惊讶的是在14天follicle就会respond to PMSG嘛? 可不可以丢一个reference
: 给我呀当然这些分离出来的oocyte应该不具备meiotic competence 对吧?

b*g2013-04-01 07:04

51 楼

不要紧就是用collegenase 消化对吧方便的话可以求一个protocol嘛? 非常感谢~!

【在 f*******o 的大作中提到】

: 对不起，我没有说清楚，12－14天你取的是incompetent oocytes, 直径小一些，不能
: 用pmsg，要用胶原酶消化卵巢组织，可以娶到280左右。
:
: reference

f*o2013-04-01 07:04

52 楼

no problem, i will send you protocal next week. have a nice weekend, could
you give me you email address?

【在 b*****g 的大作中提到】

: 不要紧就是用collegenase 消化对吧方便的话可以求一个protocol嘛? 非常感谢~!