请教： 35kb大片段DNA克隆# Biology - 生物学
i*l
1 楼
很多年前跟这位老师一起发过几篇文章（老板是通讯，我是一作或挂名）。收到这个邀
请感到有些惊讶。请问有没有类似规定说这种稿件不能审？
同时在这个帖子里问一下，怎样的关系不能审稿呢？比如我可以suggest我的前老板（
们）审我的稿子吗？谢谢！
请感到有些惊讶。请问有没有类似规定说这种稿件不能审？
同时在这个帖子里问一下，怎样的关系不能审稿呢？比如我可以suggest我的前老板（
们）审我的稿子吗？谢谢！
f*9
2 楼
可以等着股票暴富。万一公司失败了也可以找其他工作，因为在startup里成长的比大
公司快，等找其他工作的时候也有实力。
公司快，等找其他工作的时候也有实力。
hr
3 楼
同时想问加州David Yao 如何？
谢谢！
谢谢！
y*8
4 楼
想把一条细菌的代谢途径在拟南芥中表达， 该途径共有12 个酶， 总共35kb， 问题是
如何把这些基因克隆进同一个载体，能不能用重组的方法，传统的restriction enzyme
似乎不大行。
谢谢！！！
如何把这些基因克隆进同一个载体，能不能用重组的方法，传统的restriction enzyme
似乎不大行。
谢谢！！！
w*h
5 楼
有什么好惊讶的。。。就是人家建议你审的。。。
客观去审就行了。。。
【在 i****l 的大作中提到】
: 很多年前跟这位老师一起发过几篇文章（老板是通讯，我是一作或挂名）。收到这个邀
: 请感到有些惊讶。请问有没有类似规定说这种稿件不能审？
: 同时在这个帖子里问一下，怎样的关系不能审稿呢？比如我可以suggest我的前老板（
: 们）审我的稿子吗？谢谢！
客观去审就行了。。。
【在 i****l 的大作中提到】
: 很多年前跟这位老师一起发过几篇文章（老板是通讯，我是一作或挂名）。收到这个邀
: 请感到有些惊讶。请问有没有类似规定说这种稿件不能审？
: 同时在这个帖子里问一下，怎样的关系不能审稿呢？比如我可以suggest我的前老板（
: 们）审我的稿子吗？谢谢！
p*j
6 楼
are you kidding?
unless you are super niu..
unless you are super niu..
n*c
7 楼
ding yi xia
c*0
8 楼
gibson assembly
H*T
9 楼
想来也只有本校的不宜建议为reviewer了。
【在 w********h 的大作中提到】
: 有什么好惊讶的。。。就是人家建议你审的。。。
: 客观去审就行了。。。
【在 w********h 的大作中提到】
: 有什么好惊讶的。。。就是人家建议你审的。。。
: 客观去审就行了。。。
p*8
10 楼
也不一定吧 我就在START UP 我不牛 但是正好赶上了
b*e
11 楼
是姚新宇吗？不好，很糟糕！
C*e
12 楼
顶2楼的
我现在用Clontech的HD Fusion
挺好用的，不需要restriction enzyme
原理跟Gibson类似，不过一个是chew back 5'，一个是3'
另外35kb的话能不能放在两个质粒上？
enzyme
【在 y********8 的大作中提到】
: 想把一条细菌的代谢途径在拟南芥中表达， 该途径共有12 个酶， 总共35kb， 问题是
: 如何把这些基因克隆进同一个载体，能不能用重组的方法，传统的restriction enzyme
: 似乎不大行。
: 谢谢！！！
我现在用Clontech的HD Fusion
挺好用的，不需要restriction enzyme
原理跟Gibson类似，不过一个是chew back 5'，一个是3'
另外35kb的话能不能放在两个质粒上？
enzyme
【在 y********8 的大作中提到】
: 想把一条细菌的代谢途径在拟南芥中表达， 该途径共有12 个酶， 总共35kb， 问题是
: 如何把这些基因克隆进同一个载体，能不能用重组的方法，传统的restriction enzyme
: 似乎不大行。
: 谢谢！！！
i*l
13 楼
多谢ls两位。
另外，请问我审完以后跟前老板打个招呼，没有问题吧？不会违反什么规定吧？谢谢！
【在 H**T 的大作中提到】
: 想来也只有本校的不宜建议为reviewer了。
另外，请问我审完以后跟前老板打个招呼，没有问题吧？不会违反什么规定吧？谢谢！
【在 H**T 的大作中提到】
: 想来也只有本校的不宜建议为reviewer了。
b*a
14 楼
那请问那个张哲瑞的事务所怎么样？
多谢！
【在 b******e 的大作中提到】
: 是姚新宇吗？不好，很糟糕！
多谢！
【在 b******e 的大作中提到】
: 是姚新宇吗？不好，很糟糕！
X*n
15 楼
如果这12基因在细菌基因组中是连在一起的，直接用recombineering拉下来就行，搜一
下pKD46就行。
下pKD46就行。
s*t
16 楼
本科老板肯定是没关系的，如果是博士老板而且新AP独立不久的话就要当心是不是
COI
【在 i****l 的大作中提到】
: 很多年前跟这位老师一起发过几篇文章（老板是通讯，我是一作或挂名）。收到这个邀
: 请感到有些惊讶。请问有没有类似规定说这种稿件不能审？
: 同时在这个帖子里问一下，怎样的关系不能审稿呢？比如我可以suggest我的前老板（
: 们）审我的稿子吗？谢谢！
COI
【在 i****l 的大作中提到】
: 很多年前跟这位老师一起发过几篇文章（老板是通讯，我是一作或挂名）。收到这个邀
: 请感到有些惊讶。请问有没有类似规定说这种稿件不能审？
: 同时在这个帖子里问一下，怎样的关系不能审稿呢？比如我可以suggest我的前老板（
: 们）审我的稿子吗？谢谢！
s*i
17 楼
如果这些酶在同一个mRNA上，在拟南芥里面会不会只有第一个基因表达，其他的没法表
达啊。
楼主还要考虑怎么同时表达的问题。
enzyme
【在 y********8 的大作中提到】
: 想把一条细菌的代谢途径在拟南芥中表达， 该途径共有12 个酶， 总共35kb， 问题是
: 如何把这些基因克隆进同一个载体，能不能用重组的方法，传统的restriction enzyme
: 似乎不大行。
: 谢谢！！！
达啊。
楼主还要考虑怎么同时表达的问题。
enzyme
【在 y********8 的大作中提到】
: 想把一条细菌的代谢途径在拟南芥中表达， 该途径共有12 个酶， 总共35kb， 问题是
: 如何把这些基因克隆进同一个载体，能不能用重组的方法，传统的restriction enzyme
: 似乎不大行。
: 谢谢！！！
f*u
18 楼
promoter什么的都不对，直接放到植物里肯定不行。
把这个cluster改造成能在植物里面表达的版本可够你做的。
enzyme
【在 y********8 的大作中提到】
: 想把一条细菌的代谢途径在拟南芥中表达， 该途径共有12 个酶， 总共35kb， 问题是
: 如何把这些基因克隆进同一个载体，能不能用重组的方法，传统的restriction enzyme
: 似乎不大行。
: 谢谢！！！
把这个cluster改造成能在植物里面表达的版本可够你做的。
enzyme
【在 y********8 的大作中提到】
: 想把一条细菌的代谢途径在拟南芥中表达， 该途径共有12 个酶， 总共35kb， 问题是
: 如何把这些基因克隆进同一个载体，能不能用重组的方法，传统的restriction enzyme
: 似乎不大行。
: 谢谢！！！
r*g
19 楼
用recombination把那个片段弄下来不行吗？
q*7
20 楼
估计你每一个基因的前面都要放一个启动子，建议最好放在不同的载体上，至少两个，
植物那一步可以进行双抗性筛选。
你们说的都是要PCR的，你如果能找到合适的酶切位点，建议还是用传统的方法。如果
３５K已经包括了所有的你需要的表达元件，建议用recommbineering。
用一下这个公司的PCR胶回收Kit，可以提高你克隆效率，而且便宜。具体请查看下面的
连接。
http://www.greenbioresearch.com/gel-extraction-pcr-purification
good luck
植物那一步可以进行双抗性筛选。
你们说的都是要PCR的，你如果能找到合适的酶切位点，建议还是用传统的方法。如果
３５K已经包括了所有的你需要的表达元件，建议用recommbineering。
用一下这个公司的PCR胶回收Kit，可以提高你克隆效率，而且便宜。具体请查看下面的
连接。
http://www.greenbioresearch.com/gel-extraction-pcr-purification
good luck
d*i
21 楼
ET CLONING
h*r
22 楼
要一个基因一个promoter一个terminator,可以考虑类似于biobrick的方法，或者其他
同尾酶。几个载体同时开工，最后放在两个或者更多，分布转化/整合到芥芥中去。
同尾酶。几个载体同时开工，最后放在两个或者更多，分布转化/整合到芥芥中去。
b*e
23 楼
扑哧～～ ：D
纯回复这个“芥芥”，真是可爱的称呼～
【在 h**********r 的大作中提到】
: 要一个基因一个promoter一个terminator,可以考虑类似于biobrick的方法，或者其他
: 同尾酶。几个载体同时开工，最后放在两个或者更多，分布转化/整合到芥芥中去。
纯回复这个“芥芥”，真是可爱的称呼～
【在 h**********r 的大作中提到】
: 要一个基因一个promoter一个terminator,可以考虑类似于biobrick的方法，或者其他
: 同尾酶。几个载体同时开工，最后放在两个或者更多，分布转化/整合到芥芥中去。
g*5
24 楼
why not IRES OR P2A?
q*8
25 楼
赞~~~学到好多~~~~
A*r
26 楼
me 2
【在 q*******8 的大作中提到】
: 赞~~~学到好多~~~~
【在 q*******8 的大作中提到】
: 赞~~~学到好多~~~~
s*y
27 楼
re
【在 f**u 的大作中提到】
: promoter什么的都不对，直接放到植物里肯定不行。
: 把这个cluster改造成能在植物里面表达的版本可够你做的。
:
: enzyme
【在 f**u 的大作中提到】
: promoter什么的都不对，直接放到植物里肯定不行。
: 把这个cluster改造成能在植物里面表达的版本可够你做的。
:
: enzyme
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