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semi-dry western transfer 问题

semi-dry western transfer 问题# Biology - 生物学

j*y2013-06-17 07:06

1 楼

现在这些电视剧不好看也是必须的了，替身有点太多了，而且太明显了，那个面瘫脸的
小鲜肉杨洋不就是个典型的替身用的太多了吗，都已经被截图了，连侧面都是替身了。
真的还不如直接找替身来拍戏算了，以前替身都是一些武打的场面，或者比较危险的场
面，比如跳崖之类的，才会用专业的替身，毕竟演员不是专门学习武打的，所以这个可
以理解，还有一些在骑马的时候，骑的很快，所以背影一般都是替身，也可以理解。
然而现在的演员就连裸身的部分也是用的替身，还有的是吻戏也是用替身，那么既然如
此，还要演员干什么呢，干脆都是用替身算了，替身就这么不值钱，演员就这么金贵了
吗？实在是看不下去了。
就连《楚乔传》里的替身也是超级多，刚一上来第一集色诱宇文玥的那个女的，裸露后
背压在宇文玥身上的时候，不也就是替身么，截图还显示了后背是黑色的，脖子是白色
的，差别很大很大，这也太过分了，这是在把观众当成是傻子吗？
看人家汤唯，演那么大尺度的电影都没有用替身，《色戒》都不用替身的，平时的吻戏
算什么啊。

z*n2013-06-17 07:06

2 楼

话剧基本演墙，A片主要演床；灾难片里演房，偶像剧里演娘。

t*r2013-06-17 07:06

3 楼

【以下文字转载自 Military 讨论区】
发信人: trailblazer (开路者), 信区: Military
标题: 推荐一个纯无线磁力充电的运动蓝牙耳机for iPhone 7
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Apr 10 18:21:16 2017, 美东)
Joyful Heart JH-100 纯无线磁力充电的运动蓝牙耳机上图
http://www.amztk.com/b06wp3sy21
我看看有没有 discount code

n*e2013-06-17 07:06

4 楼

大家好，
有个western transfer的technical的问题。我们lab用的是一个很笨重的biorad的semi
-dry transfer 仪器。我刚开始做western，transfer的效率总是很差。
protein ladder用的是5ul，
manual上推荐mini gel，8.5cm x 5.5 cm，用10v-15v，30min
我开始用过25v，总是看到有的ladder 到了下面的filter paper上面，同时还有ladder
在gel上面，如果时间长点，gel上就看不到ladder。
后来我用15v，推荐的，40min-60min，还是看到有ladder在gel上面，但是没有在
filter paper上面。说明这个voltage很合适的，不会over transfer。但是高分子量的
ladder， 50kd以上的，总是转不完全。
我的protein只有20kd，理论上根据ladder来看，应该都转过去了。可是我的western跟
同样的sample，在其他lab做的，结果就不一样。抗体都是按照他们的catalog number
买的。但是detection limit少了一个数量级。
请问有用过semi dry transfer的人，有好的建议吗？
其他lab用的是wet transfer，我亲自做过，都是所有的ladder都转过去了，也看不到
over transfer，我们的membrane都是pvdf，一模一样的。
谢谢了

n*i2013-06-17 07:06

5 楼

哈哈，不错不错。

【在 z****n 的大作中提到】

: 话剧基本演墙，A片主要演床；灾难片里演房，偶像剧里演娘。

N*92013-06-17 07:06

6 楼

看着很粗笨

f*c2013-06-17 07:06

7 楼

你用的membrane的孔径会不会太大了，20KD可能都转出去了

semi
ladder

【在 n********e 的大作中提到】

: 大家好，
: 有个western transfer的technical的问题。我们lab用的是一个很笨重的biorad的semi
: -dry transfer 仪器。我刚开始做western，transfer的效率总是很差。
: protein ladder用的是5ul，
: manual上推荐mini gel，8.5cm x 5.5 cm，用10v-15v，30min
: 我开始用过25v，总是看到有的ladder 到了下面的filter paper上面，同时还有ladder
: 在gel上面，如果时间长点，gel上就看不到ladder。
: 后来我用15v，推荐的，40min-60min，还是看到有ladder在gel上面，但是没有在
: filter paper上面。说明这个voltage很合适的，不会over transfer。但是高分子量的
: ladder， 50kd以上的，总是转不完全。