做核蛋白乙酰化是不是需要多load一些蛋白才容易检测到？# Biology - 生物学
d*i
1 楼
最近在做p65的核内乙酰化，total的p65做得很好，但是乙酰化检测不到。抗体用的是
CST的。看到有的公司的western图片注解上说竟然用了180ug蛋白。。。。。。顺便请
大家推荐乙酰化p65抗体。谢谢！
CST的。看到有的公司的western图片注解上说竟然用了180ug蛋白。。。。。。顺便请
大家推荐乙酰化p65抗体。谢谢！
d*b
2 楼
http://www.springer.com/new+%26+forthcoming+titles+%28default%2
这本书里有很多乙酰化的测试方法，你可以找一找。
【在 d****i 的大作中提到】
: 最近在做p65的核内乙酰化，total的p65做得很好，但是乙酰化检测不到。抗体用的是
: CST的。看到有的公司的western图片注解上说竟然用了180ug蛋白。。。。。。顺便请
: 大家推荐乙酰化p65抗体。谢谢！
这本书里有很多乙酰化的测试方法，你可以找一找。
【在 d****i 的大作中提到】
: 最近在做p65的核内乙酰化，total的p65做得很好，但是乙酰化检测不到。抗体用的是
: CST的。看到有的公司的western图片注解上说竟然用了180ug蛋白。。。。。。顺便请
: 大家推荐乙酰化p65抗体。谢谢！
J*3
3 楼
非组蛋白乙酰化一般不大好检测， 最好先IP下来，再做WB。
【在 d****i 的大作中提到】
: 最近在做p65的核内乙酰化，total的p65做得很好，但是乙酰化检测不到。抗体用的是
: CST的。看到有的公司的western图片注解上说竟然用了180ug蛋白。。。。。。顺便请
: 大家推荐乙酰化p65抗体。谢谢！
【在 d****i 的大作中提到】
: 最近在做p65的核内乙酰化，total的p65做得很好，但是乙酰化检测不到。抗体用的是
: CST的。看到有的公司的western图片注解上说竟然用了180ug蛋白。。。。。。顺便请
: 大家推荐乙酰化p65抗体。谢谢！
d*i
4 楼
非常感谢两位！
A*y
5 楼
That's because the ac-p52 antibody is horrible. Same thing for Ac-Hsp90 etc
. It is the best to I.P. the protein and do acetyl-lysine antibody...the
problem is that acetyl-lysine ab is horrible, too.
【在 d****i 的大作中提到】
: 最近在做p65的核内乙酰化，total的p65做得很好，但是乙酰化检测不到。抗体用的是
: CST的。看到有的公司的western图片注解上说竟然用了180ug蛋白。。。。。。顺便请
: 大家推荐乙酰化p65抗体。谢谢！
. It is the best to I.P. the protein and do acetyl-lysine antibody...the
problem is that acetyl-lysine ab is horrible, too.
【在 d****i 的大作中提到】
: 最近在做p65的核内乙酰化，total的p65做得很好，但是乙酰化检测不到。抗体用的是
: CST的。看到有的公司的western图片注解上说竟然用了180ug蛋白。。。。。。顺便请
: 大家推荐乙酰化p65抗体。谢谢！
d*i
6 楼
etc
谢谢！是提取nuclear protein做乙酰化western好 还是 从total cell lysate 里IP
以后做乙酰化好？我需要比较各个时间点乙酰化程度的不同。。。。
【在 A******y 的大作中提到】
: That's because the ac-p52 antibody is horrible. Same thing for Ac-Hsp90 etc
: . It is the best to I.P. the protein and do acetyl-lysine antibody...the
: problem is that acetyl-lysine ab is horrible, too.
K*S
7 楼
do mass spec if you don't have good antibodies.
【在 d****i 的大作中提到】
: 最近在做p65的核内乙酰化，total的p65做得很好，但是乙酰化检测不到。抗体用的是
: CST的。看到有的公司的western图片注解上说竟然用了180ug蛋白。。。。。。顺便请
: 大家推荐乙酰化p65抗体。谢谢！
【在 d****i 的大作中提到】
: 最近在做p65的核内乙酰化，total的p65做得很好，但是乙酰化检测不到。抗体用的是
: CST的。看到有的公司的western图片注解上说竟然用了180ug蛋白。。。。。。顺便请
: 大家推荐乙酰化p65抗体。谢谢！
A*y
8 楼
Total lysate. If you want to do mass spec., find a good lab to teach you.
Too many horrible mass spec core facility or labs these days.
IP
【在 d****i 的大作中提到】
:
: etc
: 谢谢！是提取nuclear protein做乙酰化western好 还是 从total cell lysate 里IP
: 以后做乙酰化好？我需要比较各个时间点乙酰化程度的不同。。。。
Too many horrible mass spec core facility or labs these days.
IP
【在 d****i 的大作中提到】
:
: etc
: 谢谢！是提取nuclear protein做乙酰化western好 还是 从total cell lysate 里IP
: 以后做乙酰化好？我需要比较各个时间点乙酰化程度的不同。。。。
d*i
9 楼
非常感谢！ac-p65我试了abcam的抗体，能看见信号，就是很弱很弱。有个问题就是，
如果用total lysate就没法证明乙酰化的蛋白是核内起作用的。有人说乙酰化也可能发
生在胞浆。
【在 A******y 的大作中提到】
: Total lysate. If you want to do mass spec., find a good lab to teach you.
: Too many horrible mass spec core facility or labs these days.
:
: IP
d*i
10 楼
做mass spec没钱啊。。
d*i
11 楼
用nuclear lysate会不会更好？乙酰化应该是发生在核内。
【在 A******y 的大作中提到】
: Total lysate. If you want to do mass spec., find a good lab to teach you.
: Too many horrible mass spec core facility or labs these days.
:
: IP
相关阅读
包子求paper请教，核桃仁为什么长成大脑的样子？再求篇paper, thanks在找工作时隐瞒overqualify的事实会有什么后果？请你们搞生物的给我讲讲美国的农产品是怎么了？paper help大家用什么medium养hepg2cell为什么教授们都喜欢自己的博后走学术路线求paper, 包子酬谢!两篇一作，Assistant Prof at U of Mich (转载)有公司卖yeast display combinatorial peptides libraries？[Job Opening] 波士顿项目经理/管理编辑职位 (转载)有没有可以计算蛋白表达情况和癌症患者生存时间的网站？Betzig最新Science牛文，xiaowei可以心服口服了有人了解Albert Einstein 的Mark Czaja实验室吗？亲们的前途在哪里有没有autism exome database？哥大Irving cancer center有没关于酶机理的书推荐。求文章 多谢，