w*a
2 楼
一般Vector在酶切以后要进行去磷处理，以防ligation的时候自链。
那么我如果用PCR的方法扩增得到的blunt end的Vector的 PCR 产物，在进行ligation
插入insert之前，是不是最好也要进行去磷处理？？
谢谢！
那么我如果用PCR的方法扩增得到的blunt end的Vector的 PCR 产物，在进行ligation
插入insert之前，是不是最好也要进行去磷处理？？
谢谢！
z*e
3 楼
我的很好。
a*o
4 楼
没这么干过，不过是个很有意思的问题。如果你的引物没有磷酸化标记，pcr产物末端
应该也不会有5'-P, 应该不会自联。建议lz试试看，把结果通知大家一下
应该也不会有5'-P, 应该不会自联。建议lz试试看，把结果通知大家一下
b*n
5 楼
你的引物得在合成的时候让公司给5'端加磷酸
否则一般的Ligase没法连上
ligation
【在 w********a 的大作中提到】
: 一般Vector在酶切以后要进行去磷处理，以防ligation的时候自链。
: 那么我如果用PCR的方法扩增得到的blunt end的Vector的 PCR 产物，在进行ligation
: 插入insert之前，是不是最好也要进行去磷处理？？
: 谢谢！
否则一般的Ligase没法连上
ligation
【在 w********a 的大作中提到】
: 一般Vector在酶切以后要进行去磷处理，以防ligation的时候自链。
: 那么我如果用PCR的方法扩增得到的blunt end的Vector的 PCR 产物，在进行ligation
: 插入insert之前，是不是最好也要进行去磷处理？？
: 谢谢！
w*a
6 楼
OK. 那也就是说不用担心自链的问题了？？、、
【在 b******n 的大作中提到】
: 你的引物得在合成的时候让公司给5'端加磷酸
: 否则一般的Ligase没法连上
:
: ligation
【在 b******n 的大作中提到】
: 你的引物得在合成的时候让公司给5'端加磷酸
: 否则一般的Ligase没法连上
:
: ligation
s*s
7 楼
一般vector都不用去磷，因为严重影响连接效率。
我宁愿多screen几个colony
ligation
【在 w********a 的大作中提到】
: 一般Vector在酶切以后要进行去磷处理，以防ligation的时候自链。
: 那么我如果用PCR的方法扩增得到的blunt end的Vector的 PCR 产物，在进行ligation
: 插入insert之前，是不是最好也要进行去磷处理？？
: 谢谢！
我宁愿多screen几个colony
ligation
【在 w********a 的大作中提到】
: 一般Vector在酶切以后要进行去磷处理，以防ligation的时候自链。
: 那么我如果用PCR的方法扩增得到的blunt end的Vector的 PCR 产物，在进行ligation
: 插入insert之前，是不是最好也要进行去磷处理？？
: 谢谢！
d*l
8 楼
no
ligation
【在 w********a 的大作中提到】
: 一般Vector在酶切以后要进行去磷处理，以防ligation的时候自链。
: 那么我如果用PCR的方法扩增得到的blunt end的Vector的 PCR 产物，在进行ligation
: 插入insert之前，是不是最好也要进行去磷处理？？
: 谢谢！
ligation
【在 w********a 的大作中提到】
: 一般Vector在酶切以后要进行去磷处理，以防ligation的时候自链。
: 那么我如果用PCR的方法扩增得到的blunt end的Vector的 PCR 产物，在进行ligation
: 插入insert之前，是不是最好也要进行去磷处理？？
: 谢谢！
相关阅读
zz大学重商难出诺贝尔奖 基础学科坐冷板凳几个搞物理的跑去生物界搞搞成像 (转载)都是诺贝尔惹的祸袁隆平算是转基因大米之父了吧庄自然是大牛，但是领域内的人都知道Betzig才是leader小威这次没奖的原因，还是 Steve Chu 的圈子罩不到她。问个问题：什么是translational research?诺贝尔奖其实就是颁发给叼丝诺贝尔夫妻档，一起搞研究做实验很浪漫喔 (转载)Eric Betzig一直极度仇视小威吧Job Post: Manufacturing Associate in Maryland10几个氨基酸的peptide能进入活细胞吗？文献求助Betzig为什么在家里做原型机我手拿一把移液枪，走到哪里都不慌求助！paper review 机会(bioinformatics, GWAS, NGS)求证：Betzig也是科大女婿？Job Opening青蒿素今年也许有希望华中农业大学生命科学院波士顿招贤纳才 (转载)