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求问细胞质内结合比较强的蛋白对。
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求问细胞质内结合比较强的蛋白对。# Biology - 生物学
c*i
1 楼
做了一个蛋白对，觉得可以用来检测protein－protein interaction。试了几个
reported
的蛋白对，正好实验室也有（split GFP和caspase9，阿apaf-1 的CARD domain），都
不行。不知一般都是用什么的，有没有比较经典的，结合力强的。对了，最好是在细胞
质中的。谢谢了。
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e*s
2 楼
一个蛋白怎么用来检测其他protein-protein interaction？ 当Reporter?

reported

【在 c**i 的大作中提到】
: 做了一个蛋白对，觉得可以用来检测protein－protein interaction。试了几个
: reported
: 的蛋白对，正好实验室也有（split GFP和caspase9，阿apaf-1 的CARD domain），都
: 不行。不知一般都是用什么的，有没有比较经典的，结合力强的。对了，最好是在细胞
: 质中的。谢谢了。
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c*i
3 楼
不好意思，没写清楚，是一个system，像酵母双杂交那样的。
PS:前几天也出了这个问题，给老板写信，写前面时有些地方没想好怎么写，就写个大
概，然后决定先写后面再改前面，结果后面写完就直接发了。

【在 e****s 的大作中提到】
: 一个蛋白怎么用来检测其他protein-protein interaction？ 当Reporter?
:
: reported
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m*5
4 楼
smad4 和smad23或者158。
什么系统啊楼主稍微展开一下

【在 c**i 的大作中提到】
: 不好意思，没写清楚，是一个system，像酵母双杂交那样的。
: PS:前几天也出了这个问题，给老板写信，写前面时有些地方没想好怎么写，就写个大
: 概，然后决定先写后面再改前面，结果后面写完就直接发了。
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c*i
5 楼
谢谢，我查查相关的内容。我们做的就像split GFP，split ubiquitin那种，特点是反
应（只能）是在细胞质中发生的。检测反应的同时，也定位了胞内的位置。
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s*x
6 楼
split gfp 需要特别稳定的结合，因为GFP 成熟特别慢。
建议用split luciferous ，不需成熟，立刻有function。
但是背景比split gfp 高，不适合测定subcellular的location。
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z*q
7 楼
既然split GFP成熟慢，那么用Fluorescence resonance energy transfer（FRET）是
不是灵敏度高点啊

【在 s********x 的大作中提到】
: split gfp 需要特别稳定的结合，因为GFP 成熟特别慢。
: 建议用split luciferous ，不需成熟，立刻有function。
: 但是背景比split gfp 高，不适合测定subcellular的location。
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e*s
8 楼
没做过Split GFP或者Luc。胞内的FRET和BRET灵敏度是不错，但背景很多时候都是一个
问题。
个人认为，这些方法还有一个共同的技术挑战，就是Negative control有时候是不好做
的。

【在 z****q 的大作中提到】
: 既然split GFP成熟慢，那么用Fluorescence resonance energy transfer（FRET）是
: 不是灵敏度高点啊
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c*i
9 楼
谢谢楼上各位，其实我是要找一对可以稳定结合的蛋白，我准备试试Myod和ID。split
GFP和split luciferase我都做过，split luciferase背景是高一点，但信号还是很强
的。
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c*i
10 楼
做了一个蛋白对，觉得可以用来检测protein－protein interaction。试了几个
reported
的蛋白对，正好实验室也有（split GFP和caspase9，阿apaf-1 的CARD domain），都
不行。不知一般都是用什么的，有没有比较经典的，结合力强的。对了，最好是在细胞
质中的。谢谢了。
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e*s
11 楼
一个蛋白怎么用来检测其他protein-protein interaction？ 当Reporter?

reported

【在 c**i 的大作中提到】
: 做了一个蛋白对，觉得可以用来检测protein－protein interaction。试了几个
: reported
: 的蛋白对，正好实验室也有（split GFP和caspase9，阿apaf-1 的CARD domain），都
: 不行。不知一般都是用什么的，有没有比较经典的，结合力强的。对了，最好是在细胞
: 质中的。谢谢了。
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c*i
12 楼
不好意思，没写清楚，是一个system，像酵母双杂交那样的。
PS:前几天也出了这个问题，给老板写信，写前面时有些地方没想好怎么写，就写个大
概，然后决定先写后面再改前面，结果后面写完就直接发了。

【在 e****s 的大作中提到】
: 一个蛋白怎么用来检测其他protein-protein interaction？ 当Reporter?
:
: reported
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m*5
13 楼
smad4 和smad23或者158。
什么系统啊楼主稍微展开一下

【在 c**i 的大作中提到】
: 不好意思，没写清楚，是一个system，像酵母双杂交那样的。
: PS:前几天也出了这个问题，给老板写信，写前面时有些地方没想好怎么写，就写个大
: 概，然后决定先写后面再改前面，结果后面写完就直接发了。
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c*i
14 楼
谢谢，我查查相关的内容。我们做的就像split GFP，split ubiquitin那种，特点是反
应（只能）是在细胞质中发生的。检测反应的同时，也定位了胞内的位置。
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s*x
15 楼
split gfp 需要特别稳定的结合，因为GFP 成熟特别慢。
建议用split luciferous ，不需成熟，立刻有function。
但是背景比split gfp 高，不适合测定subcellular的location。
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z*q
16 楼
既然split GFP成熟慢，那么用Fluorescence resonance energy transfer（FRET）是
不是灵敏度高点啊

【在 s********x 的大作中提到】
: split gfp 需要特别稳定的结合，因为GFP 成熟特别慢。
: 建议用split luciferous ，不需成熟，立刻有function。
: 但是背景比split gfp 高，不适合测定subcellular的location。
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e*s
17 楼
没做过Split GFP或者Luc。胞内的FRET和BRET灵敏度是不错，但背景很多时候都是一个
问题。
个人认为，这些方法还有一个共同的技术挑战，就是Negative control有时候是不好做
的。

【在 z****q 的大作中提到】
: 既然split GFP成熟慢，那么用Fluorescence resonance energy transfer（FRET）是
: 不是灵敏度高点啊
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c*i
18 楼
谢谢楼上各位，其实我是要找一对可以稳定结合的蛋白，我准备试试Myod和ID。split
GFP和split luciferase我都做过，split luciferase背景是高一点，但信号还是很强
的。
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g*5
19 楼
请问split luciferase 你用的是不是 pGL3 BASIC?
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c*i
20 楼
在addgene买的。分别和fkbp，frb融合。

★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.2.2

【在 g*********5 的大作中提到】
: 请问split luciferase 你用的是不是 pGL3 BASIC?
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