想利用polyA trap 做基因打靶:long arm-PGK-neo-ires-EGFPFlpe-SD-short arm ,
target 细胞以前整合有Frt-stop-Frt RFP表达盒,平时不表达RFP. 如果转染FLPE表达
质粒,可以切掉stop片段而表达红色萤光。现在想利用polyA trap打靶方法将PGK-neo-
ires-EGFPFlpe-SD片段knockin到目的基因的内含子内. 如果打靶成功,该细胞将可以
表达双荧光,我想尽量减少我筛选打靶事件的工作
转入的片段尽管没有polyA,但启动子和融合蛋白的编码区是完整的,
questions: 那随机整合或瞬时转染会不会也能转录出mRNA(缺少polyA)?如能转录
,这个缺失polyA的mRNA会不会翻译出有功能的EGFPFlpe融合蛋白,并有可能激活红色
荧光蛋白的表达呢?