CD34+ Progenitor Cells 好养吗？ - 未名空间MITBBS历史存档

CD34+ Progenitor Cells 好养吗？# Biology - 生物学

s*e2013-09-20 07:09

1 楼

最近每天都觉得非常的烦躁，实验室的研究进展很顺利，最发愁的就是funding，如果
今年没有新的grant进来，实验室的人员就会出问题。十月份交了4个NIH grants，还有
其他很多别的。
每天都发愁，最近收到动物房的账单都头大，开支吓人。手里一个几十万的联邦政府，
加上学校的两个grant，工业界一个，最近几乎所有的小grant账户都花超了。
实验室的科研做到现在，有点超出我开始的预料，这点真的是很开心。但是这反而把自
己压力搞的更大，因为总会觉得如果拿到更多的funding，这样我们可以把文章做的更
大，后面也许很多年都会不一样。
感慨自己就是有限的能力（屌丝本质）和无限的无望（渴望成为高富帅）。不过还是觉
得年轻的时候应该尽力一搏，我现在绝大多数时候是我们系来得最早，走的最晚的那个
人。
就是抱怨一下，每天头皮发麻。

l*g2013-09-20 07:09

2 楼

looking to do refi.

g*52013-09-20 07:09

3 楼

能向293一样增殖吗？

f*m2013-09-20 07:09

4 楼

如果不担心科研上的杂事就要处理家里的杂事，我情愿担心多点科研上的杂事。放轻松
，散个步游个泳去

【在 s**********e 的大作中提到】

: 最近每天都觉得非常的烦躁，实验室的研究进展很顺利，最发愁的就是funding，如果
: 今年没有新的grant进来，实验室的人员就会出问题。十月份交了4个NIH grants，还有
: 其他很多别的。
: 每天都发愁，最近收到动物房的账单都头大，开支吓人。手里一个几十万的联邦政府，
: 加上学校的两个grant，工业界一个，最近几乎所有的小grant账户都花超了。
: 实验室的科研做到现在，有点超出我开始的预料，这点真的是很开心。但是这反而把自
: 己压力搞的更大，因为总会觉得如果拿到更多的funding，这样我们可以把文章做的更
: 大，后面也许很多年都会不一样。
: 感慨自己就是有限的能力（屌丝本质）和无限的无望（渴望成为高富帅）。不过还是觉
: 得年轻的时候应该尽力一搏，我现在绝大多数时候是我们系来得最早，走的最晚的那个

b*d2013-09-20 07:09

5 楼

我可以做加州的贷款,我的联系电话是: 626-893-9760.
谢谢!

【在 l****g 的大作中提到】

: looking to do refi.

l*a2013-09-20 07:09

6 楼

建议你先读读stem cell的basic，如果你们lab没有经验，不建议handle stem cells。

【在 g*********5 的大作中提到】

: 能向293一样增殖吗？

I*s2013-09-20 07:09

7 楼

开源节流开源暂时做不了可以考虑考虑节流

【在 s**********e 的大作中提到】

: 最近每天都觉得非常的烦躁，实验室的研究进展很顺利，最发愁的就是funding，如果
: 今年没有新的grant进来，实验室的人员就会出问题。十月份交了4个NIH grants，还有
: 其他很多别的。
: 每天都发愁，最近收到动物房的账单都头大，开支吓人。手里一个几十万的联邦政府，
: 加上学校的两个grant，工业界一个，最近几乎所有的小grant账户都花超了。
: 实验室的科研做到现在，有点超出我开始的预料，这点真的是很开心。但是这反而把自
: 己压力搞的更大，因为总会觉得如果拿到更多的funding，这样我们可以把文章做的更
: 大，后面也许很多年都会不一样。
: 感慨自己就是有限的能力（屌丝本质）和无限的无望（渴望成为高富帅）。不过还是觉
: 得年轻的时候应该尽力一搏，我现在绝大多数时候是我们系来得最早，走的最晚的那个

z*t2013-09-20 07:09

8 楼

不能养。。。

【在 g*********5 的大作中提到】

: 能向293一样增殖吗？

p*g2013-09-20 07:09

9 楼

我心目中你是个挺扎实的人，说一句让你开心的话
我从大学时代到现在，一直是来的最早，走的最晚的，无论是学校，还是公司，我还不
是faculty，也不是头儿
现在你感觉好点了吗

【在 s**********e 的大作中提到】

: 最近每天都觉得非常的烦躁，实验室的研究进展很顺利，最发愁的就是funding，如果
: 今年没有新的grant进来，实验室的人员就会出问题。十月份交了4个NIH grants，还有
: 其他很多别的。
: 每天都发愁，最近收到动物房的账单都头大，开支吓人。手里一个几十万的联邦政府，
: 加上学校的两个grant，工业界一个，最近几乎所有的小grant账户都花超了。
: 实验室的科研做到现在，有点超出我开始的预料，这点真的是很开心。但是这反而把自
: 己压力搞的更大，因为总会觉得如果拿到更多的funding，这样我们可以把文章做的更
: 大，后面也许很多年都会不一样。
: 感慨自己就是有限的能力（屌丝本质）和无限的无望（渴望成为高富帅）。不过还是觉
: 得年轻的时候应该尽力一搏，我现在绝大多数时候是我们系来得最早，走的最晚的那个

g*52013-09-20 07:09

10 楼

thanks, we don't have stem cell experience.

b*12013-09-20 07:09

11 楼

每到这个时候，就是你要收获的时候了，顶住，银子就在前面等着你。

【在 s**********e 的大作中提到】

: 最近每天都觉得非常的烦躁，实验室的研究进展很顺利，最发愁的就是funding，如果
: 今年没有新的grant进来，实验室的人员就会出问题。十月份交了4个NIH grants，还有
: 其他很多别的。
: 每天都发愁，最近收到动物房的账单都头大，开支吓人。手里一个几十万的联邦政府，
: 加上学校的两个grant，工业界一个，最近几乎所有的小grant账户都花超了。
: 实验室的科研做到现在，有点超出我开始的预料，这点真的是很开心。但是这反而把自
: 己压力搞的更大，因为总会觉得如果拿到更多的funding，这样我们可以把文章做的更
: 大，后面也许很多年都会不一样。
: 感慨自己就是有限的能力（屌丝本质）和无限的无望（渴望成为高富帅）。不过还是觉
: 得年轻的时候应该尽力一搏，我现在绝大多数时候是我们系来得最早，走的最晚的那个

g*52013-09-20 07:09

12 楼

看到公司有卖的，100,000 各细胞。
reviewer要求我做原代细胞，要求在原代细胞中敲出一个基因。
准备买些shRNA PARTICLE直接作。感染几天就行。
不过，100，000个细胞也太少了. 细胞培养的经验不少，但是原代的就两眼一摸黑，啥
子也不知道

s*e2013-09-20 07:09

13 楼

借你吉言。
今天是我老婆事业发展超级重要的一天，希望她运气超级好。

【在 b*********1 的大作中提到】

: 每到这个时候，就是你要收获的时候了，顶住，银子就在前面等着你。

z*t2013-09-20 07:09

14 楼

你要是看phenotype的话可以把细胞培养在semi-solid 的methylcelluose medium里，
CD34+ progenitors会在mixed的cytokine作用下分化成不同的终末分化细胞，长成不同
的colony.要是你的gene影响self-renewal或者differentiation可以在CFU上看出差别
来。 link在这里
http://www.stemcell.com/en/Products/Cell-type/Hematopoietic-ste
要是KD后拿DNA，RNA确实蛮痛苦的...跑几个RT-PCR没问题,要是做NGS就惨了

【在 g*********5 的大作中提到】

: 看到公司有卖的，100,000 各细胞。
: reviewer要求我做原代细胞，要求在原代细胞中敲出一个基因。
: 准备买些shRNA PARTICLE直接作。感染几天就行。
: 不过，100，000个细胞也太少了. 细胞培养的经验不少，但是原代的就两眼一摸黑，啥
: 子也不知道

p*g2013-09-20 07:09

15 楼

我特意等了你十分钟，现在可以下结论了
笨熊发帖在我之后，他提到你马上要致富了，
我发帖在他之前，只提了我过去几十年一直早来晚走
你回复了致富的那个，无视了早来晚走的那个
为了不冤枉你，我等了你十分钟
我想说，如果你认为你的每分钟都应该兑换成cash才叫公平，我肯定不认为你适合做
faculty 这个职业，学术界是一个厚积薄发的属性

【在 s**********e 的大作中提到】

: 借你吉言。
: 今天是我老婆事业发展超级重要的一天，希望她运气超级好。

g*52013-09-20 07:09

16 楼

谢谢，如果做western呢？
不知道这些细胞增殖如何，看到公司说的可以增值到75-300倍
这些HSC能分裂多少代，还可以冻起来下次再用吗？

【在 z*t 的大作中提到】

: 你要是看phenotype的话可以把细胞培养在semi-solid 的methylcelluose medium里，
: CD34+ progenitors会在mixed的cytokine作用下分化成不同的终末分化细胞，长成不同
: 的colony.要是你的gene影响self-renewal或者differentiation可以在CFU上看出差别
: 来。 link在这里
: http://www.stemcell.com/en/Products/Cell-type/Hematopoietic-ste
: 要是KD后拿DNA，RNA确实蛮痛苦的...跑几个RT-PCR没问题,要是做NGS就惨了

z*c2013-09-20 07:09

17 楼

PI本来就是manager 去了公司也有相似的烦恼

★ 发自iPhone App: ChineseWeb 13

【在 s**********e 的大作中提到】

: 最近每天都觉得非常的烦躁，实验室的研究进展很顺利，最发愁的就是funding，如果
: 今年没有新的grant进来，实验室的人员就会出问题。十月份交了4个NIH grants，还有
: 其他很多别的。
: 每天都发愁，最近收到动物房的账单都头大，开支吓人。手里一个几十万的联邦政府，
: 加上学校的两个grant，工业界一个，最近几乎所有的小grant账户都花超了。
: 实验室的科研做到现在，有点超出我开始的预料，这点真的是很开心。但是这反而把自
: 己压力搞的更大，因为总会觉得如果拿到更多的funding，这样我们可以把文章做的更
: 大，后面也许很多年都会不一样。
: 感慨自己就是有限的能力（屌丝本质）和无限的无望（渴望成为高富帅）。不过还是觉
: 得年轻的时候应该尽力一搏，我现在绝大多数时候是我们系来得最早，走的最晚的那个

s*d2013-09-20 07:09

18 楼

CD34+主要从cord blood或bone marrow分离得到， cord blood增殖快，分化也快，也
就是说CD34阳性细胞会迅速转化成阴性细胞，用标准培养体系培养一周后可以从90%降
到10-20%。 Bone marrow 稍微慢一点，买这个细胞一般很贵，自己分离的话其实也不
难，但是没有经验自己摸索可能得费些时间。

s*y2013-09-20 07:09

19 楼

抱一下。不要给自己压力这么大。你一直做得很好，所以我坚信对于你，资金只是迟早
的问题。面包会有的，一切都会好起来的。
你们的领域是一个充满了未知问题和潜在惊喜的空间。好好做下去，一定有前途的。

【在 s**********e 的大作中提到】

: 最近每天都觉得非常的烦躁，实验室的研究进展很顺利，最发愁的就是funding，如果
: 今年没有新的grant进来，实验室的人员就会出问题。十月份交了4个NIH grants，还有
: 其他很多别的。
: 每天都发愁，最近收到动物房的账单都头大，开支吓人。手里一个几十万的联邦政府，
: 加上学校的两个grant，工业界一个，最近几乎所有的小grant账户都花超了。
: 实验室的科研做到现在，有点超出我开始的预料，这点真的是很开心。但是这反而把自
: 己压力搞的更大，因为总会觉得如果拿到更多的funding，这样我们可以把文章做的更
: 大，后面也许很多年都会不一样。
: 感慨自己就是有限的能力（屌丝本质）和无限的无望（渴望成为高富帅）。不过还是觉
: 得年轻的时候应该尽力一搏，我现在绝大多数时候是我们系来得最早，走的最晚的那个

z*t2013-09-20 07:09

20 楼

HSC体外培养就分化了...冻起来是别想了...不过如楼上所说大概在一周之内还会有一
定数目的progenitor的，transduce之后sort cell不知道能拿多少细胞，我们lab有人
做过 1X105 HSC的western

【在 g*********5 的大作中提到】

: 谢谢，如果做western呢？
: 不知道这些细胞增殖如何，看到公司说的可以增值到75-300倍
: 这些HSC能分裂多少代，还可以冻起来下次再用吗？

w*e2013-09-20 07:09

21 楼

还真的欲望是不快乐之源，我现在第三年AP，正常上下班，周末也不敢加班，不然家里
小的能翻天。偶尔冒出一点成为高富帅的念头，就开始烦躁不安，郁郁不乐，赶紧花两
天时间掐灭这念头。顺其自然吧！

★ 发自iPhone App: ChineseWeb 1.0.6

【在 s**********e 的大作中提到】

: 最近每天都觉得非常的烦躁，实验室的研究进展很顺利，最发愁的就是funding，如果
: 今年没有新的grant进来，实验室的人员就会出问题。十月份交了4个NIH grants，还有
: 其他很多别的。
: 每天都发愁，最近收到动物房的账单都头大，开支吓人。手里一个几十万的联邦政府，
: 加上学校的两个grant，工业界一个，最近几乎所有的小grant账户都花超了。
: 实验室的科研做到现在，有点超出我开始的预料，这点真的是很开心。但是这反而把自
: 己压力搞的更大，因为总会觉得如果拿到更多的funding，这样我们可以把文章做的更
: 大，后面也许很多年都会不一样。
: 感慨自己就是有限的能力（屌丝本质）和无限的无望（渴望成为高富帅）。不过还是觉
: 得年轻的时候应该尽力一搏，我现在绝大多数时候是我们系来得最早，走的最晚的那个

l*a2013-09-20 07:09

22 楼

不是我打击你，我2楼之所以那么说是因为看你问的就知道你不是做细胞的，估计是材
料化学或者药化，那个stem cell很快就分化了，想看表型不容易。如果有人带着你或
者合作好一点，不然要suffer一阵子，而且很费钱。

【在 g*********5 的大作中提到】

: 能向293一样增殖吗？

C*X2013-09-20 07:09

23 楼

最烦的事莫过于情感上突然喜欢上了一博后或者学生。。

l*i2013-09-20 07:09

24 楼

确实，目前普通的培养体系不能支持CD34+细胞 self-renewal很长时间。我自己摸索优
化过培养体系，可以维持CD34+细胞两周左右的时间，然后纯度就会从刚分离的90%以上
降到80%左右。

【在 s*******d 的大作中提到】

: CD34+主要从cord blood或bone marrow分离得到， cord blood增殖快，分化也快，也
: 就是说CD34阳性细胞会迅速转化成阴性细胞，用标准培养体系培养一周后可以从90%降
: 到10-20%。 Bone marrow 稍微慢一点，买这个细胞一般很贵，自己分离的话其实也不
: 难，但是没有经验自己摸索可能得费些时间。