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请教stromal vascular fraction （SVF) from white adipose tissue 的几个问题

请教stromal vascular fraction （SVF) from white adipose tissue 的几个问题# Biology - 生物学

I*U2013-12-09 08:12

1 楼

最近要提取从白色脂肪里面提取SVF，根据protocol我确实看到了pellet，用TRI-
reagent也提取到了mRNA,nanodrop测出的浓度有800ng/ul，但是我试了cyclophilin，
gapdh，18s几个内参，都测不到CT值。已经重复几次了，郁闷的不行。请教各位，有什
么建议么？
SVF protocol
1）isolate WAT,
2) Incubate tissue @ 37C for 45min with shaking @ 80 rpm （Collagenase I，
1mg/ml）
3）300g for 10min
4) Dissolve pellet in Tri-reagent.

I*U2013-12-09 08:12

2 楼

希望有经验的大神们给点建议啊。

I*U2013-12-09 08:12

3 楼

继续。。。

z*u2013-12-09 08:12

4 楼

换一下酶。我个人感觉collagenase不够强。组织解离不够。我用collagenase 2mg/ml
+dispase. 或者直接上trypsin LE 都可以。

【在 I*******U 的大作中提到】

: 最近要提取从白色脂肪里面提取SVF，根据protocol我确实看到了pellet，用TRI-
: reagent也提取到了mRNA,nanodrop测出的浓度有800ng/ul，但是我试了cyclophilin，
: gapdh，18s几个内参，都测不到CT值。已经重复几次了，郁闷的不行。请教各位，有什
: 么建议么？
: SVF protocol
: 1）isolate WAT,
: 2) Incubate tissue @ 37C for 45min with shaking @ 80 rpm （Collagenase I，
: 1mg/ml）
: 3）300g for 10min
: 4) Dissolve pellet in Tri-reagent.

I*U2013-12-09 08:12

5 楼

现在不是组织解离不够，我能拿到细胞，也能测到RNA 浓度，可是housekeeping gene
18s，GAPDH和Cyclophilin都测不出，这个是什么原因？
楼上的你有没有测过SVF的gene表达呢？用什么housekeeping gene呢？谢谢

ml

【在 z****u 的大作中提到】

: 换一下酶。我个人感觉collagenase不够强。组织解离不够。我用collagenase 2mg/ml
: +dispase. 或者直接上trypsin LE 都可以。