如何提高蛋白质SDS-PAGE胶的分辨率？# Biology - 生物学
g*s
1 楼
一般电话面试答完题目后,interviewer一般会问"do you have any questions for me?"
每次都很尴尬,实在不知道问什么啊！！只好问一下timeline就完了。。。汗。。
每次都很尴尬,实在不知道问什么啊！！只好问一下timeline就完了。。。汗。。
z*t
2 楼
股市也回复很多了.在这里陪大家经历股市罕见的动荡,
我想我会终身难忘...疏于对这里的管理和照顾,希望
大家多原谅,我毕业,搬家到新的地方开始工作,还要
照顾家里的很小的小孩,能腾出来的时间实在不多.
中远期我觉得可以适当的看牛了.入手Solid的公司,
build position,应该还有很多机会.
未来的时间里,希望大家都能有所得,这个可以是股市
盈利,可以是交到朋友,甚至是亏了钱,但是能得到心得,
都可以是好事情,来日方长呀.也希望大家多配合yyber
版主做好将来的工作.虽然有很多华人的股市论坛,
但是我还是最喜欢这里,可能是把这里当根据地和家了.
希望这里能更好.股市不疯狂了,人也不疯了,这里就
稳定了,就有更稳定的用户,能提出更多更广的信息和点子.
我想我会终身难忘...疏于对这里的管理和照顾,希望
大家多原谅,我毕业,搬家到新的地方开始工作,还要
照顾家里的很小的小孩,能腾出来的时间实在不多.
中远期我觉得可以适当的看牛了.入手Solid的公司,
build position,应该还有很多机会.
未来的时间里,希望大家都能有所得,这个可以是股市
盈利,可以是交到朋友,甚至是亏了钱,但是能得到心得,
都可以是好事情,来日方长呀.也希望大家多配合yyber
版主做好将来的工作.虽然有很多华人的股市论坛,
但是我还是最喜欢这里,可能是把这里当根据地和家了.
希望这里能更好.股市不疯狂了,人也不疯了,这里就
稳定了,就有更稳定的用户,能提出更多更广的信息和点子.
v*a
3 楼
我们现在都是用的invitrogen的precast胶做WB
用的BUFFER也是Invitrogen的
但是跑出来的带
每个人之间区别很大
有人也许或说样品处理不一样
但是同样的marker，不同的人，在同一块胶上跑出来却有很大差异
有些人跑出来的marker，像公司的广告一样
有些人跑出来的marker，像国内实验室时那样的熊样
请问，如何能提高蛋白质SDS-PAGE胶的分辨率呢？
求大神指点。
谢谢。
用的BUFFER也是Invitrogen的
但是跑出来的带
每个人之间区别很大
有人也许或说样品处理不一样
但是同样的marker，不同的人，在同一块胶上跑出来却有很大差异
有些人跑出来的marker，像公司的广告一样
有些人跑出来的marker，像国内实验室时那样的熊样
请问，如何能提高蛋白质SDS-PAGE胶的分辨率呢？
求大神指点。
谢谢。
H*7
4 楼
同关注。我也有这个困扰
T*t
5 楼
同家公司的胶的质量也会参差不齐的。其实自己配的胶，只要手熟，不比预制胶差，除
非一定要用梯度胶。
电压不要太高，100V就好了，空白lane也加loading buffer，试试看会不会好一些。另
外注意内电泳槽不要漏buffer。我用Biorad的电泳槽，用久了之后内电泳槽密封不好，
会漏液到外面，如果不注意，跑一半电流就断掉了。所以我都把内外的buffer加到液面
相平。
非一定要用梯度胶。
电压不要太高，100V就好了，空白lane也加loading buffer，试试看会不会好一些。另
外注意内电泳槽不要漏buffer。我用Biorad的电泳槽，用久了之后内电泳槽密封不好，
会漏液到外面，如果不注意，跑一半电流就断掉了。所以我都把内外的buffer加到液面
相平。
c*2
6 楼
Safe things to ask:
1) (further) clarifications about the technicals of the position and/or the
major areas the team/group work on, the platforms(linux/windows),
programming Languages/Tools, etc....
2) culture of the company
3) geography area info if not locally
4) something special about the company and/or something they are proud of.
(new tech, new market, etc.)
Note: they always ask that, but you need to know whether they really want
some questions. For example, the interview is schdeuled for 45 mins, and you
already talked over 1 hour, better not ask any question further since both
of you are tired.
Don't simply say "no question", say s.th like no further questions at this
point, implying you'll ask more if they give you onsite. :-)
1) (further) clarifications about the technicals of the position and/or the
major areas the team/group work on, the platforms(linux/windows),
programming Languages/Tools, etc....
2) culture of the company
3) geography area info if not locally
4) something special about the company and/or something they are proud of.
(new tech, new market, etc.)
Note: they always ask that, but you need to know whether they really want
some questions. For example, the interview is schdeuled for 45 mins, and you
already talked over 1 hour, better not ask any question further since both
of you are tired.
Don't simply say "no question", say s.th like no further questions at this
point, implying you'll ask more if they give you onsite. :-)
U*l
7 楼
Invitrogen marker放久了会degrade直接体现为分辨率下降smear band.
Load之前每个well先用running buffer冲一下有时有残余polyacrylamide
还有就是用invitrogen gradient gel反正价钱一样
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.2.2
【在 v********a 的大作中提到】
: 我们现在都是用的invitrogen的precast胶做WB
: 用的BUFFER也是Invitrogen的
: 但是跑出来的带
: 每个人之间区别很大
: 有人也许或说样品处理不一样
: 但是同样的marker，不同的人，在同一块胶上跑出来却有很大差异
: 有些人跑出来的marker，像公司的广告一样
: 有些人跑出来的marker，像国内实验室时那样的熊样
: 请问，如何能提高蛋白质SDS-PAGE胶的分辨率呢？
: 求大神指点。
Load之前每个well先用running buffer冲一下有时有残余polyacrylamide
还有就是用invitrogen gradient gel反正价钱一样
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.2.2
【在 v********a 的大作中提到】
: 我们现在都是用的invitrogen的precast胶做WB
: 用的BUFFER也是Invitrogen的
: 但是跑出来的带
: 每个人之间区别很大
: 有人也许或说样品处理不一样
: 但是同样的marker，不同的人，在同一块胶上跑出来却有很大差异
: 有些人跑出来的marker，像公司的广告一样
: 有些人跑出来的marker，像国内实验室时那样的熊样
: 请问，如何能提高蛋白质SDS-PAGE胶的分辨率呢？
: 求大神指点。
j*2
8 楼
我每次都喜欢问组里人得背景，是工程多还是business多。因为找的是这种交叉的部门
p*t
9 楼
降低电压试试，应该有用
v*a
10 楼
各位，我各种PAGE胶都跑过，什么native PAGE, Urea PAGE， SDS-PAGE。
蛋白质电泳，我都是用的Invitrogen Gradient gel
跑电泳之前，我都是用DPBS洗洗wells
我会用一点loading buffer pre-run 10分钟
自己感觉细节都注意到了。但是就是不明白为何跑不好。
最近在分离一个RNA结合蛋白，需要很高的分辨率，才能截获目的RNA。
多谢路过解答的各位。
蛋白质电泳，我都是用的Invitrogen Gradient gel
跑电泳之前，我都是用DPBS洗洗wells
我会用一点loading buffer pre-run 10分钟
自己感觉细节都注意到了。但是就是不明白为何跑不好。
最近在分离一个RNA结合蛋白，需要很高的分辨率，才能截获目的RNA。
多谢路过解答的各位。
i*l
11 楼
如果我要好看的胶 自己做
如果想省事，用Precast
【在 v********a 的大作中提到】
: 各位，我各种PAGE胶都跑过，什么native PAGE, Urea PAGE， SDS-PAGE。
: 蛋白质电泳，我都是用的Invitrogen Gradient gel
: 跑电泳之前，我都是用DPBS洗洗wells
: 我会用一点loading buffer pre-run 10分钟
: 自己感觉细节都注意到了。但是就是不明白为何跑不好。
: 最近在分离一个RNA结合蛋白，需要很高的分辨率，才能截获目的RNA。
: 多谢路过解答的各位。
如果想省事，用Precast
【在 v********a 的大作中提到】
: 各位，我各种PAGE胶都跑过，什么native PAGE, Urea PAGE， SDS-PAGE。
: 蛋白质电泳，我都是用的Invitrogen Gradient gel
: 跑电泳之前，我都是用DPBS洗洗wells
: 我会用一点loading buffer pre-run 10分钟
: 自己感觉细节都注意到了。但是就是不明白为何跑不好。
: 最近在分离一个RNA结合蛋白，需要很高的分辨率，才能截获目的RNA。
: 多谢路过解答的各位。
s*s
12 楼
你是都跑不好，还是只有这个蛋白跑不好？
我以前一个糖蛋白，gradiant胶上根本就是smear，自己做的胶是一条带
【在 v********a 的大作中提到】
: 各位，我各种PAGE胶都跑过，什么native PAGE, Urea PAGE， SDS-PAGE。
: 蛋白质电泳，我都是用的Invitrogen Gradient gel
: 跑电泳之前，我都是用DPBS洗洗wells
: 我会用一点loading buffer pre-run 10分钟
: 自己感觉细节都注意到了。但是就是不明白为何跑不好。
: 最近在分离一个RNA结合蛋白，需要很高的分辨率，才能截获目的RNA。
: 多谢路过解答的各位。
我以前一个糖蛋白，gradiant胶上根本就是smear，自己做的胶是一条带
【在 v********a 的大作中提到】
: 各位，我各种PAGE胶都跑过，什么native PAGE, Urea PAGE， SDS-PAGE。
: 蛋白质电泳，我都是用的Invitrogen Gradient gel
: 跑电泳之前，我都是用DPBS洗洗wells
: 我会用一点loading buffer pre-run 10分钟
: 自己感觉细节都注意到了。但是就是不明白为何跑不好。
: 最近在分离一个RNA结合蛋白，需要很高的分辨率，才能截获目的RNA。
: 多谢路过解答的各位。
l*b
13 楼
要好看的胶就得自己做。precast胶是给烂大街的protein的。你有没有reuse buffer？
precast胶用reused buffer一塌糊涂。
【在 v********a 的大作中提到】
: 各位，我各种PAGE胶都跑过，什么native PAGE, Urea PAGE， SDS-PAGE。
: 蛋白质电泳，我都是用的Invitrogen Gradient gel
: 跑电泳之前，我都是用DPBS洗洗wells
: 我会用一点loading buffer pre-run 10分钟
: 自己感觉细节都注意到了。但是就是不明白为何跑不好。
: 最近在分离一个RNA结合蛋白，需要很高的分辨率，才能截获目的RNA。
: 多谢路过解答的各位。
precast胶用reused buffer一塌糊涂。
【在 v********a 的大作中提到】
: 各位，我各种PAGE胶都跑过，什么native PAGE, Urea PAGE， SDS-PAGE。
: 蛋白质电泳，我都是用的Invitrogen Gradient gel
: 跑电泳之前，我都是用DPBS洗洗wells
: 我会用一点loading buffer pre-run 10分钟
: 自己感觉细节都注意到了。但是就是不明白为何跑不好。
: 最近在分离一个RNA结合蛋白，需要很高的分辨率，才能截获目的RNA。
: 多谢路过解答的各位。
y*m
14 楼
楼主是不是在做CLIP？
如果是，可能带RNA的蛋白就是一个smear。
【在 v********a 的大作中提到】
: 各位，我各种PAGE胶都跑过，什么native PAGE, Urea PAGE， SDS-PAGE。
: 蛋白质电泳，我都是用的Invitrogen Gradient gel
: 跑电泳之前，我都是用DPBS洗洗wells
: 我会用一点loading buffer pre-run 10分钟
: 自己感觉细节都注意到了。但是就是不明白为何跑不好。
: 最近在分离一个RNA结合蛋白，需要很高的分辨率，才能截获目的RNA。
: 多谢路过解答的各位。
如果是，可能带RNA的蛋白就是一个smear。
【在 v********a 的大作中提到】
: 各位，我各种PAGE胶都跑过，什么native PAGE, Urea PAGE， SDS-PAGE。
: 蛋白质电泳，我都是用的Invitrogen Gradient gel
: 跑电泳之前，我都是用DPBS洗洗wells
: 我会用一点loading buffer pre-run 10分钟
: 自己感觉细节都注意到了。但是就是不明白为何跑不好。
: 最近在分离一个RNA结合蛋白，需要很高的分辨率，才能截获目的RNA。
: 多谢路过解答的各位。
v*a
15 楼
是的，我做的CLIP。
我每次都是用fresh buffer，梯度胶。
谢谢各位解答。
【在 y****m 的大作中提到】
: 楼主是不是在做CLIP？
: 如果是，可能带RNA的蛋白就是一个smear。
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