quick-change总出现多余的引物序列# Biology - 生物学
l*m
1 楼
看到有Personal property的coverage。
如果房子被盗的话，赔偿么？ 还是一般的Home insurance只cover水灾火灾之类的造成
的property damaged的损失呢？
如果房子被盗的话，赔偿么？ 还是一般的Home insurance只cover水灾火灾之类的造成
的property damaged的损失呢？
f*y
2 楼
hotmail网页上都有search email的功能，查找以前收到的某一封email非常方便。可是
android上的hotmail官方应用里的search只查找contact。请问谁知道怎么在android上
查找hotmail的邮件，哪个application支持？当然网页除外。
android上的hotmail官方应用里的search只查找contact。请问谁知道怎么在android上
查找hotmail的邮件，哪个application支持？当然网页除外。
e*e
3 楼
最近用quick-change的方法构建library，测序后发现在靶向的位点都有突变，但是在
该位点后面都有多出来的引物重复序列。
我所使用的方法及引物的设计是按照Stratagene的QuickChange Site-directed
mutagenesis kit来做的，用的序列完全匹配的一对引物，突变位点在引物的中间。本
来用的是Phusion，后来换成Pfu，结果一样。
不知道有没有这方面的高手，可以分享一下经验。
谢谢！
该位点后面都有多出来的引物重复序列。
我所使用的方法及引物的设计是按照Stratagene的QuickChange Site-directed
mutagenesis kit来做的，用的序列完全匹配的一对引物，突变位点在引物的中间。本
来用的是Phusion，后来换成Pfu，结果一样。
不知道有没有这方面的高手，可以分享一下经验。
谢谢！
d*t
4 楼
包啊。可是你得有纪录你的东西值多少钱。家里如果有名表名画的记得提高保额。卖你
保险的也会问你你家会有什么值钱的电器，工具，首饰等等。
【在 l*******m 的大作中提到】
: 看到有Personal property的coverage。
: 如果房子被盗的话，赔偿么？ 还是一般的Home insurance只cover水灾火灾之类的造成
: 的property damaged的损失呢？
保险的也会问你你家会有什么值钱的电器，工具，首饰等等。
【在 l*******m 的大作中提到】
: 看到有Personal property的coverage。
: 如果房子被盗的话，赔偿么？ 还是一般的Home insurance只cover水灾火灾之类的造成
: 的property damaged的损失呢？
I*9
5 楼
co ask.
H*i
6 楼
引物二聚体吧，首先看看能不能重新设计引物，减少二聚体，要不最好换策略，因为构
建library，一个个测序费时费力，要么就是pcr中那些减少二聚体的方法，不过效果不
一定好
建library，一个个测序费时费力，要么就是pcr中那些减少二聚体的方法，不过效果不
一定好
r*e
7 楼
名贵包，和金银首饰的保险要单独买的。
火灾是包的。水灾，和地震要另加钱吧
火灾是包的。水灾，和地震要另加钱吧
e*e
8 楼
谢谢，我试了加DMSO，没有改善。不知还有没有别的方法。
【在 H*******i 的大作中提到】
: 引物二聚体吧，首先看看能不能重新设计引物，减少二聚体，要不最好换策略，因为构
: 建library，一个个测序费时费力，要么就是pcr中那些减少二聚体的方法，不过效果不
: 一定好
【在 H*******i 的大作中提到】
: 引物二聚体吧，首先看看能不能重新设计引物，减少二聚体，要不最好换策略，因为构
: 建library，一个个测序费时费力，要么就是pcr中那些减少二聚体的方法，不过效果不
: 一定好
r*e
9 楼
名贵包，和金银首饰的保险要单独买的。
火灾是包的。水灾，和地震要另加钱吧
火灾是包的。水灾，和地震要另加钱吧
H*i
10 楼
你可以把你设计的引物和周围序列发下么。
如果很难设计可以考虑用BsaI这种酶连接
如果很难设计可以考虑用BsaI这种酶连接
l*m
11 楼
这个纪录是一定要购买的reciept么？
比如房子的stove,冰箱被盗了呢？没有reciept就不给赔了？
【在 d******t 的大作中提到】
: 包啊。可是你得有纪录你的东西值多少钱。家里如果有名表名画的记得提高保额。卖你
: 保险的也会问你你家会有什么值钱的电器，工具，首饰等等。
比如房子的stove,冰箱被盗了呢？没有reciept就不给赔了？
【在 d******t 的大作中提到】
: 包啊。可是你得有纪录你的东西值多少钱。家里如果有名表名画的记得提高保额。卖你
: 保险的也会问你你家会有什么值钱的电器，工具，首饰等等。
e*e
12 楼
Forward primer: ggtgatcaacaccnnstaccacaccgaccgg
Reverse primer: ccggtcggtgtggtasnnggtgttgatcacc
(n stands for any dNTP, s stands for C or G)
周围序列：
ACCGCCCGCGAGCTGCACAAGCTGATCAAACGGGTCAGCCGCAAGCCGGTGCTGGAGGTGATCAACACCAACTACT
CGAGCACACCGACCGGGCTGGCGGTAACGCCTACTGGAAGTCCA
谢谢帮忙分析
Reverse primer: ccggtcggtgtggtasnnggtgttgatcacc
(n stands for any dNTP, s stands for C or G)
周围序列：
ACCGCCCGCGAGCTGCACAAGCTGATCAAACGGGTCAGCCGCAAGCCGGTGCTGGAGGTGATCAACACCAACTACT
CGAGCACACCGACCGGGCTGGCGGTAACGCCTACTGGAAGTCCA
谢谢帮忙分析
p*t
13 楼
可以试试减少引物的用量，另外换High GC buffer也有可能有效。
e*e
14 楼
谢谢，我试一下。
【在 p****t 的大作中提到】
: 可以试试减少引物的用量，另外换High GC buffer也有可能有效。
【在 p****t 的大作中提到】
: 可以试试减少引物的用量，另外换High GC buffer也有可能有效。
H*i
15 楼
deltaG到不是很夸张，-10算是可以接受吧。 不过关键一点是你的序列是完全反相互补
的，其实这种设计个人觉得不好。最好是
---------------**********
****---------------
这种设计，保证两段引物和模板退火温度，还有两段引物重叠部分退火温度差不多（我
一般PCR设置退火用60-65）。
ACCGCCCGCGAGCTGCACAAGCTGATCAAACGGGTCAGCCGCAAGCCGGTGCTGGAGGTGATCAACACCAACTACT
【在 e*******e 的大作中提到】
: Forward primer: ggtgatcaacaccnnstaccacaccgaccgg
: Reverse primer: ccggtcggtgtggtasnnggtgttgatcacc
: (n stands for any dNTP, s stands for C or G)
: 周围序列：
: ACCGCCCGCGAGCTGCACAAGCTGATCAAACGGGTCAGCCGCAAGCCGGTGCTGGAGGTGATCAACACCAACTACT
: CGAGCACACCGACCGGGCTGGCGGTAACGCCTACTGGAAGTCCA
: 谢谢帮忙分析
的，其实这种设计个人觉得不好。最好是
---------------**********
****---------------
这种设计，保证两段引物和模板退火温度，还有两段引物重叠部分退火温度差不多（我
一般PCR设置退火用60-65）。
ACCGCCCGCGAGCTGCACAAGCTGATCAAACGGGTCAGCCGCAAGCCGGTGCTGGAGGTGATCAACACCAACTACT
【在 e*******e 的大作中提到】
: Forward primer: ggtgatcaacaccnnstaccacaccgaccgg
: Reverse primer: ccggtcggtgtggtasnnggtgttgatcacc
: (n stands for any dNTP, s stands for C or G)
: 周围序列：
: ACCGCCCGCGAGCTGCACAAGCTGATCAAACGGGTCAGCCGCAAGCCGGTGCTGGAGGTGATCAACACCAACTACT
: CGAGCACACCGACCGGGCTGGCGGTAACGCCTACTGGAAGTCCA
: 谢谢帮忙分析
e*e
16 楼
非常感谢，按照你的建议，我重新设计了部分互补的引物，正在测试中，并将会告知你
结果。
ACCGCCCGCGAGCTGCACAAGCTGATCAAACGGGTCAGCCGCAAGCCGGTGCTGGAGGTGATCAACACCAACTACT
【在 H*******i 的大作中提到】
: deltaG到不是很夸张，-10算是可以接受吧。 不过关键一点是你的序列是完全反相互补
: 的，其实这种设计个人觉得不好。最好是
: ---------------**********
: ****---------------
: 这种设计，保证两段引物和模板退火温度，还有两段引物重叠部分退火温度差不多（我
: 一般PCR设置退火用60-65）。
:
: ACCGCCCGCGAGCTGCACAAGCTGATCAAACGGGTCAGCCGCAAGCCGGTGCTGGAGGTGATCAACACCAACTACT
结果。
ACCGCCCGCGAGCTGCACAAGCTGATCAAACGGGTCAGCCGCAAGCCGGTGCTGGAGGTGATCAACACCAACTACT
【在 H*******i 的大作中提到】
: deltaG到不是很夸张，-10算是可以接受吧。 不过关键一点是你的序列是完全反相互补
: 的，其实这种设计个人觉得不好。最好是
: ---------------**********
: ****---------------
: 这种设计，保证两段引物和模板退火温度，还有两段引物重叠部分退火温度差不多（我
: 一般PCR设置退火用60-65）。
:
: ACCGCCCGCGAGCTGCACAAGCTGATCAAACGGGTCAGCCGCAAGCCGGTGCTGGAGGTGATCAACACCAACTACT
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