RTqPCR 大牛看过来吧# Biology - 生物学
Q*Q
1 楼
网上看到的图，挺可爱的，想山寨一个
里面应该是个戚风
小熊的脸是用什么做的？打发的heavy whipping cream+巧克力酱？
小熊的线条是用什么做的？巧克力酱？
什么样的巧克力酱？
里面应该是个戚风
小熊的脸是用什么做的？打发的heavy whipping cream+巧克力酱？
小熊的线条是用什么做的？巧克力酱？
什么样的巧克力酱？
c*y
2 楼
【 以下文字转载自 Working 讨论区 】
发信人: cumboy (cumboy), 信区: Working
标 题: 急问！Laid off之后还能做H1 transfer么？
发信站: BBS 未名空间站 (Sun May 22 16:13:26 2011, 美东)
上周被laid off，公司说大概2周后通知移民局
现在有个新公司可能给offer,但他们可以做transfer不想从新申请。那现在移民局还不
知道我H1失效了，如果此时申请是应该做transfer还是new application呢？
另外，公司也没说哪天只是给个大概的时间，如果可以transfer那这个可以做transfer
的最后期限是哪天?
发信人: cumboy (cumboy), 信区: Working
标 题: 急问！Laid off之后还能做H1 transfer么？
发信站: BBS 未名空间站 (Sun May 22 16:13:26 2011, 美东)
上周被laid off，公司说大概2周后通知移民局
现在有个新公司可能给offer,但他们可以做transfer不想从新申请。那现在移民局还不
知道我H1失效了，如果此时申请是应该做transfer还是new application呢？
另外，公司也没说哪天只是给个大概的时间，如果可以transfer那这个可以做transfer
的最后期限是哪天?
a*a
3 楼
有个问题需要大牛的智慧。
两个病毒载体，一个是商业卖的做浓度标准曲线（用A序列的primers来测定）；一个是
自己构建的。主要骨架一样，只是我们自己做的除了有A序列之外，还有自己的靶基因B
序列。因此自己构建的载体，除了可以用A序列的primers之外，还可以用B序列的
primers来测浓度。
唯一的问题就是，B序列的测定因为GC成分高，所以primers反应浓度要高于A序列
primers的浓度。
作出来的标准曲线（同一个96孔板），用B序列的primers做的，Ct values要比用A序列
的primers迟上5-6个Ct。作出来的曲线，efficiency （都在90%-100%之间）和R
square（都在0.99以上）都类似。
但是作出来的EQUATION在Y-axis上的截距就不一样，差了有6的样子。这样用B作出来
的equation计算出来的样品浓度就比用A作出来的equation计算出来的样品浓度要高10
倍。
有什么看法吗？
这个B序列的primers反应浓度已经高得太离奇了，2um final concentration，低了就
更加出不了什么好的标准曲线了。针对B序列，这个primers已经是我们设计找到的最好
的primers了，因为这个序列的特殊性。
挠脑袋中。。。
两个病毒载体，一个是商业卖的做浓度标准曲线（用A序列的primers来测定）；一个是
自己构建的。主要骨架一样，只是我们自己做的除了有A序列之外，还有自己的靶基因B
序列。因此自己构建的载体，除了可以用A序列的primers之外，还可以用B序列的
primers来测浓度。
唯一的问题就是，B序列的测定因为GC成分高，所以primers反应浓度要高于A序列
primers的浓度。
作出来的标准曲线（同一个96孔板），用B序列的primers做的，Ct values要比用A序列
的primers迟上5-6个Ct。作出来的曲线，efficiency （都在90%-100%之间）和R
square（都在0.99以上）都类似。
但是作出来的EQUATION在Y-axis上的截距就不一样，差了有6的样子。这样用B作出来
的equation计算出来的样品浓度就比用A作出来的equation计算出来的样品浓度要高10
倍。
有什么看法吗？
这个B序列的primers反应浓度已经高得太离奇了，2um final concentration，低了就
更加出不了什么好的标准曲线了。针对B序列，这个primers已经是我们设计找到的最好
的primers了，因为这个序列的特殊性。
挠脑袋中。。。
B*n
4 楼
@薯条妈 是行家
感觉线条是巧克力酱
里面的填充也可能是栗子泥，搜栗子蒙布朗
感觉线条是巧克力酱
里面的填充也可能是栗子泥，搜栗子蒙布朗
y*i
5 楼
你自己重新设计一个高GC低效率的A primer跟B match上不就好了
因B
【在 a******a 的大作中提到】
: 有个问题需要大牛的智慧。
: 两个病毒载体，一个是商业卖的做浓度标准曲线（用A序列的primers来测定）；一个是
: 自己构建的。主要骨架一样，只是我们自己做的除了有A序列之外，还有自己的靶基因B
: 序列。因此自己构建的载体，除了可以用A序列的primers之外，还可以用B序列的
: primers来测浓度。
: 唯一的问题就是，B序列的测定因为GC成分高，所以primers反应浓度要高于A序列
: primers的浓度。
: 作出来的标准曲线（同一个96孔板），用B序列的primers做的，Ct values要比用A序列
: 的primers迟上5-6个Ct。作出来的曲线，efficiency （都在90%-100%之间）和R
: square（都在0.99以上）都类似。
因B
【在 a******a 的大作中提到】
: 有个问题需要大牛的智慧。
: 两个病毒载体，一个是商业卖的做浓度标准曲线（用A序列的primers来测定）；一个是
: 自己构建的。主要骨架一样，只是我们自己做的除了有A序列之外，还有自己的靶基因B
: 序列。因此自己构建的载体，除了可以用A序列的primers之外，还可以用B序列的
: primers来测浓度。
: 唯一的问题就是，B序列的测定因为GC成分高，所以primers反应浓度要高于A序列
: primers的浓度。
: 作出来的标准曲线（同一个96孔板），用B序列的primers做的，Ct values要比用A序列
: 的primers迟上5-6个Ct。作出来的曲线，efficiency （都在90%-100%之间）和R
: square（都在0.99以上）都类似。
A*a
6 楼
face ( the purple gray part) looks like taro sauce...
pipe out from the cake décor thing.
【在 Q**Q 的大作中提到】
: 网上看到的图，挺可爱的，想山寨一个
: 里面应该是个戚风
: 小熊的脸是用什么做的？打发的heavy whipping cream+巧克力酱？
: 小熊的线条是用什么做的？巧克力酱？
: 什么样的巧克力酱？
pipe out from the cake décor thing.
【在 Q**Q 的大作中提到】
: 网上看到的图，挺可爱的，想山寨一个
: 里面应该是个戚风
: 小熊的脸是用什么做的？打发的heavy whipping cream+巧克力酱？
: 小熊的线条是用什么做的？巧克力酱？
: 什么样的巧克力酱？
a*a
7 楼
这个是一种方案。另外一种方案是，我们也可以建造一个更全面的B载体浓度梯度监测
数据，选择这些数据来建立一个标准曲线。可以选不同的primers浓度来测试，优化曲
线。
问题是这个标准曲线右移和左移，样品浓度差了那么大，从数学意义上来说，怎么理解
好呢？我数学比较差，估计得想好几天。一下子想不出来。
【在 y****i 的大作中提到】
: 你自己重新设计一个高GC低效率的A primer跟B match上不就好了
:
: 因B
数据，选择这些数据来建立一个标准曲线。可以选不同的primers浓度来测试，优化曲
线。
问题是这个标准曲线右移和左移，样品浓度差了那么大，从数学意义上来说，怎么理解
好呢？我数学比较差，估计得想好几天。一下子想不出来。
【在 y****i 的大作中提到】
: 你自己重新设计一个高GC低效率的A primer跟B match上不就好了
:
: 因B
n*e
8 楼
qPCRd 的数据都是跟对照比较吧。。。直接用来quantification 绝对copy数很难吧。
。为什么不直接有B的plsamid扩增标准曲线
。为什么不直接有B的plsamid扩增标准曲线
a*a
9 楼
有的。
不过问题解决了，是我使用了一个错误的起始浓度来计算。现在问题解决了，都很符合
。两个标准曲线是重叠的。嘻嘻。
昨天回家路上挠脑袋，睡前刷牙的时候一下子就想到了。
【在 n********e 的大作中提到】
: qPCRd 的数据都是跟对照比较吧。。。直接用来quantification 绝对copy数很难吧。
: 。为什么不直接有B的plsamid扩增标准曲线
不过问题解决了，是我使用了一个错误的起始浓度来计算。现在问题解决了，都很符合
。两个标准曲线是重叠的。嘻嘻。
昨天回家路上挠脑袋，睡前刷牙的时候一下子就想到了。
【在 n********e 的大作中提到】
: qPCRd 的数据都是跟对照比较吧。。。直接用来quantification 绝对copy数很难吧。
: 。为什么不直接有B的plsamid扩增标准曲线
D*0
10 楼
这种情况我偏好用copy number来算
D*a
11 楼
老邢居然看上这帖子了？
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