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求助，表达eGFP融合蛋白

求助，表达eGFP融合蛋白# Biology - 生物学

r*92014-03-14 07:03

1 楼

有谁知道怎么弄最安全方便么

W*o2014-03-14 07:03

2 楼

表达eGFP融合蛋白，破碎细胞之后，融合蛋白总是有很大一部分是不可溶的。如何提高
表达可溶eGFP蛋白？

r*e2014-03-14 07:03

3 楼

违法公司规定么

【在 r******9 的大作中提到】

: 有谁知道怎么弄最安全方便么

T*u2014-03-14 07:03

4 楼

低温 such as 16度，20度 etc
降低诱导浓度
让细菌有足够时间去折叠

【在 W*****o 的大作中提到】

: 表达eGFP融合蛋白，破碎细胞之后，融合蛋白总是有很大一部分是不可溶的。如何提高
: 表达可溶eGFP蛋白？

r*92014-03-14 07:03

5 楼

我工作需要 export license的
以前给自己的邮箱发code 被老大提醒过后来就不敢了

c*b2014-03-14 07:03

6 楼

E.coli?
Try this:
http://www.mitbbs.com/article/Biology/31580259_0.html

【在 W*****o 的大作中提到】

: 表达eGFP融合蛋白，破碎细胞之后，融合蛋白总是有很大一部分是不可溶的。如何提高
: 表达可溶eGFP蛋白？

h*62014-03-14 07:03

7 楼

拔掉网线U盘拷

b*22014-03-14 07:03

8 楼

学习了。能不能提供一篇相关的您的文章，以后我发文章的时候可以引用。如果您不愿
意公开的话，能否站内私信一下。

【在 c********b 的大作中提到】

: E.coli?
: Try this:
: http://www.mitbbs.com/article/Biology/31580259_0.html

f*y2014-03-14 07:03

9 楼

小心违反规定。我以前把contacts 打印出来，老实话干了这么多年，从来没有想到要
找以前的email.

m*y2014-03-14 07:03

10 楼

我在E Coli里表达过挺多的EGFP蛋白，一般都是16-18度0.2mMIPTG低温诱导，在破碎细
胞后加入1%的Triton x-100然后超速离心，GFP融合蛋白都在上清里溶着，看着很漂亮

z*d2014-03-14 07:03

11 楼

看你公司管理的方式了

b*22014-03-14 07:03

12 楼

有的时候如果融合了特殊的序列，就会进到pellet里面去。我们曾经遇到过。把pellet
用2M urea加1% triton溶1h就出来了。但是也遇到过一次RFP的需要用8M urea才能溶的
，那一次纯化出来效果非常差。所以刚才centuribob贴出这个方法后，我觉得非常有用
，很可能可以用在我们的inclusion body上面。

【在 m***y 的大作中提到】

: 我在E Coli里表达过挺多的EGFP蛋白，一般都是16-18度0.2mMIPTG低温诱导，在破碎细
: 胞后加入1%的Triton x-100然后超速离心，GFP融合蛋白都在上清里溶着，看着很漂亮