d*i
2 楼
他平时爪子中间会有些小肿块,但是没有这次这么严重.以前用双氧水就消下去了
但是这次没用,肿的特别厉害,还破了,他一直舔爪子.
请问有什么药可以上吗?斗牛是不是爪子都有这种毛病?
但是这次没用,肿的特别厉害,还破了,他一直舔爪子.
请问有什么药可以上吗?斗牛是不是爪子都有这种毛病?
i*0
3 楼
最近有发现一个现象。mESCs，用一个gene 的shRNA 处理以后，通过RNA-seq， 发现整
个X 染色体上的gene 都被silence了 （程度不一，但是都在shRNA treated ESCs
samples，都有2-8倍数的reduction）。 这种现象说明了什么？
有没有做X染色体transcription牛牛来说说看？
个X 染色体上的gene 都被silence了 （程度不一，但是都在shRNA treated ESCs
samples，都有2-8倍数的reduction）。 这种现象说明了什么？
有没有做X染色体transcription牛牛来说说看？
h*k
4 楼
想起了英国的苏珊大妈
t*g
5 楼
哎呀，不知道
看着好痛
bless bless！
看着好痛
bless bless！
t*k
6 楼
X chromesome silence？
T*U
7 楼
大叔这是在唱歌还是口技？
m*h
8 楼
看医生吧
【在 d*****i 的大作中提到】
: 他平时爪子中间会有些小肿块,但是没有这次这么严重.以前用双氧水就消下去了
: 但是这次没用,肿的特别厉害,还破了,他一直舔爪子.
: 请问有什么药可以上吗?斗牛是不是爪子都有这种毛病?
【在 d*****i 的大作中提到】
: 他平时爪子中间会有些小肿块,但是没有这次这么严重.以前用双氧水就消下去了
: 但是这次没用,肿的特别厉害,还破了,他一直舔爪子.
: 请问有什么药可以上吗?斗牛是不是爪子都有这种毛病?
l*i
9 楼
有意思。
是female mESC吗？是的话，先做两个实验：
1）H3K27me3 immunostaing：可能发现small dot in nucleus.
2)qRT-PCR测Xist的表达，或者用FISH。
证实的话，就说明出现X chormosome inactivation了。
几个问题：
3) mESC的培养条件？serum,还是2i/LIF?
1）knockdown的mESC是否仍保持未分化状态，还是开始分化了？如果未分化，那么很有
可能你发现了一个新的调节X reactivation/inactivation的因子，做深了，至少是
cell stem cell.如果细胞分化了，那么X chromosome上的genes表达下调不奇怪，有多
大新意取决于你的这个gene
2）看一下这个基因的功能，是否已有先关报道，与X chromosome reactivation有关。
是histone modifier, TF还是在X chromsome上的新lncRNA?
是female mESC吗？是的话，先做两个实验：
1）H3K27me3 immunostaing：可能发现small dot in nucleus.
2)qRT-PCR测Xist的表达，或者用FISH。
证实的话，就说明出现X chormosome inactivation了。
几个问题：
3) mESC的培养条件？serum,还是2i/LIF?
1）knockdown的mESC是否仍保持未分化状态，还是开始分化了？如果未分化，那么很有
可能你发现了一个新的调节X reactivation/inactivation的因子，做深了，至少是
cell stem cell.如果细胞分化了，那么X chromosome上的genes表达下调不奇怪，有多
大新意取决于你的这个gene
2）看一下这个基因的功能，是否已有先关报道，与X chromosome reactivation有关。
是histone modifier, TF还是在X chromsome上的新lncRNA?
s*h
10 楼
主持人有毛病……申犯人呢？
s*M
11 楼
以我的心理承受能力，都可以加慎入二字在标题里了
我觉得赶紧看vet，避免恶化感染
我觉得赶紧看vet，避免恶化感染
i*0
12 楼
我明天确认一下是不是female 的ESCs。
对于其他的问题：
几个问题：
3) mESC的培养条件？serum,还是2i/LIF?
serum + LIF的培养条件
1）knockdown的mESC是否仍保持未分化状态，还是开始分化了？如果未分化，那么很有
可能你发现了一个新的调节X reactivation/inactivation的因子，做深了，至少是
cell stem cell.如果细胞分化了，那么X chromosome上的genes表达下调不奇怪，有多
大新意取决于你的这个gene
如果要看Oct4等gene的表达的话，RNA 水平上看到降低，Protein水平上有20%左右的降
低。但是这些pluripotency的gene在蛋白水平还维持在一个高的状态。
2）看一下这个基因的功能，是否已有先关报道，与X chromosome reactivation有关。
是histone modifier, TF还是在X chromsome上的新lncRNA?
该gene目前的功能还不清楚。另外，我看到Xist gene在shRNA处理想样品中，在RNA水
平上有3倍数的降低。
【在 l*******i 的大作中提到】
: 有意思。
: 是female mESC吗？是的话，先做两个实验：
: 1）H3K27me3 immunostaing：可能发现small dot in nucleus.
: 2)qRT-PCR测Xist的表达，或者用FISH。
: 证实的话，就说明出现X chormosome inactivation了。
: 几个问题：
: 3) mESC的培养条件？serum,还是2i/LIF?
: 1）knockdown的mESC是否仍保持未分化状态，还是开始分化了？如果未分化，那么很有
: 可能你发现了一个新的调节X reactivation/inactivation的因子，做深了，至少是
: cell stem cell.如果细胞分化了，那么X chromosome上的genes表达下调不奇怪，有多
对于其他的问题：
几个问题：
3) mESC的培养条件？serum,还是2i/LIF?
serum + LIF的培养条件
1）knockdown的mESC是否仍保持未分化状态，还是开始分化了？如果未分化，那么很有
可能你发现了一个新的调节X reactivation/inactivation的因子，做深了，至少是
cell stem cell.如果细胞分化了，那么X chromosome上的genes表达下调不奇怪，有多
大新意取决于你的这个gene
如果要看Oct4等gene的表达的话，RNA 水平上看到降低，Protein水平上有20%左右的降
低。但是这些pluripotency的gene在蛋白水平还维持在一个高的状态。
2）看一下这个基因的功能，是否已有先关报道，与X chromosome reactivation有关。
是histone modifier, TF还是在X chromsome上的新lncRNA?
该gene目前的功能还不清楚。另外，我看到Xist gene在shRNA处理想样品中，在RNA水
平上有3倍数的降低。
【在 l*******i 的大作中提到】
: 有意思。
: 是female mESC吗？是的话，先做两个实验：
: 1）H3K27me3 immunostaing：可能发现small dot in nucleus.
: 2)qRT-PCR测Xist的表达，或者用FISH。
: 证实的话，就说明出现X chormosome inactivation了。
: 几个问题：
: 3) mESC的培养条件？serum,还是2i/LIF?
: 1）knockdown的mESC是否仍保持未分化状态，还是开始分化了？如果未分化，那么很有
: 可能你发现了一个新的调节X reactivation/inactivation的因子，做深了，至少是
: cell stem cell.如果细胞分化了，那么X chromosome上的genes表达下调不奇怪，有多
i*i
13 楼
那个胖子评委一口官腔，额滴神
【在 s*********h 的大作中提到】
: 主持人有毛病……申犯人呢？
【在 s*********h 的大作中提到】
: 主持人有毛病……申犯人呢？
s*i
14 楼
yaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa, one of my favorite dogs!!!!!!!!!! so so so
cute. big bless to him/her~~~~
cute. big bless to him/her~~~~
l*i
15 楼
Xist下调是RNA-seq的结果，还是qPCR结果？这一点比较奇怪，与X chromosome
inactivation不一致。
按理说，在mESC中，X chromosome是active的，即XaXa，Xist应该不表达才对。Xist表
达时，会把其中一条X chromosome“包裹”起来，这条chromosome进而失活。X
inactivation一般指发生在female mEpiSC与分化的细胞中.
你这个结果与理论相反，X chromosome基因下调时，Xist竟然也降低。Xist在对照和
knockdown细胞中的表达分别是多少(RPKM or CT value)？
另一个问题，由于你用的培养条件是serum+LIF,这会导致heterogeneity.建议你用2i/
LIF.
knockdown mESC分化明显吗？ colony morphology改变如何，还是依旧维持与WT一样的
形态？
如果你确定用的是female mESCs的话，建议先做H3K27me3 staining,看看X chromosome
是不是失活的。
【在 i*********0 的大作中提到】
: 我明天确认一下是不是female 的ESCs。
: 对于其他的问题：
: 几个问题：
: 3) mESC的培养条件？serum,还是2i/LIF?
: serum + LIF的培养条件
: 1）knockdown的mESC是否仍保持未分化状态，还是开始分化了？如果未分化，那么很有
: 可能你发现了一个新的调节X reactivation/inactivation的因子，做深了，至少是
: cell stem cell.如果细胞分化了，那么X chromosome上的genes表达下调不奇怪，有多
: 大新意取决于你的这个gene
: 如果要看Oct4等gene的表达的话，RNA 水平上看到降低，Protein水平上有20%左右的降
inactivation不一致。
按理说，在mESC中，X chromosome是active的，即XaXa，Xist应该不表达才对。Xist表
达时，会把其中一条X chromosome“包裹”起来，这条chromosome进而失活。X
inactivation一般指发生在female mEpiSC与分化的细胞中.
你这个结果与理论相反，X chromosome基因下调时，Xist竟然也降低。Xist在对照和
knockdown细胞中的表达分别是多少(RPKM or CT value)？
另一个问题，由于你用的培养条件是serum+LIF,这会导致heterogeneity.建议你用2i/
LIF.
knockdown mESC分化明显吗？ colony morphology改变如何，还是依旧维持与WT一样的
形态？
如果你确定用的是female mESCs的话，建议先做H3K27me3 staining,看看X chromosome
是不是失活的。
【在 i*********0 的大作中提到】
: 我明天确认一下是不是female 的ESCs。
: 对于其他的问题：
: 几个问题：
: 3) mESC的培养条件？serum,还是2i/LIF?
: serum + LIF的培养条件
: 1）knockdown的mESC是否仍保持未分化状态，还是开始分化了？如果未分化，那么很有
: 可能你发现了一个新的调节X reactivation/inactivation的因子，做深了，至少是
: cell stem cell.如果细胞分化了，那么X chromosome上的genes表达下调不奇怪，有多
: 大新意取决于你的这个gene
: 如果要看Oct4等gene的表达的话，RNA 水平上看到降低，Protein水平上有20%左右的降
s*h
16 楼
不过总觉得唱歌的哥们儿口型对不上
【在 i*i 的大作中提到】
: 那个胖子评委一口官腔，额滴神
【在 i*i 的大作中提到】
: 那个胖子评委一口官腔，额滴神
A*R
17 楼
looks pretty bad...better see vet asap.
i*0
18 楼
是RNA-seq的结果。我也觉得很奇怪，
这一点比较奇怪，与X chromosome
Xist在对照和
这个我要去问一下我们的搞生物信息学的。
ok！
分化不明显。
colony morphology改变如何，还是依旧维持与WT一样的
colony looks like the control shRNA clone。 shiny and clear boundary
【在 l*******i 的大作中提到】
: Xist下调是RNA-seq的结果，还是qPCR结果？这一点比较奇怪，与X chromosome
: inactivation不一致。
: 按理说，在mESC中，X chromosome是active的，即XaXa，Xist应该不表达才对。Xist表
: 达时，会把其中一条X chromosome“包裹”起来，这条chromosome进而失活。X
: inactivation一般指发生在female mEpiSC与分化的细胞中.
: 你这个结果与理论相反，X chromosome基因下调时，Xist竟然也降低。Xist在对照和
: knockdown细胞中的表达分别是多少(RPKM or CT value)？
: 另一个问题，由于你用的培养条件是serum+LIF,这会导致heterogeneity.建议你用2i/
: LIF.
: knockdown mESC分化明显吗？ colony morphology改变如何，还是依旧维持与WT一样的
s*y
19 楼
主持人sb啊
【在 l****f 的大作中提到】
【在 l****f 的大作中提到】
y*o
20 楼
小家伙看着好可怜啊，希望早日康复！！！！
【在 d*****i 的大作中提到】
: 他平时爪子中间会有些小肿块,但是没有这次这么严重.以前用双氧水就消下去了
: 但是这次没用,肿的特别厉害,还破了,他一直舔爪子.
: 请问有什么药可以上吗?斗牛是不是爪子都有这种毛病?
【在 d*****i 的大作中提到】
: 他平时爪子中间会有些小肿块,但是没有这次这么严重.以前用双氧水就消下去了
: 但是这次没用,肿的特别厉害,还破了,他一直舔爪子.
: 请问有什么药可以上吗?斗牛是不是爪子都有这种毛病?
o*i
21 楼
5 楼说得对.mESC XaXa的
我记得naive的mESC是 XaXa的到了primed阶段就变成了XaXi,自然X上的gene有差别.我
忘记这两者之间有哪个gene的变化了.但colony形态上会有差别.
我猜可能你哪个基因跟维持mESC 的naive状态相关.
我记得naive的mESC是 XaXa的到了primed阶段就变成了XaXi,自然X上的gene有差别.我
忘记这两者之间有哪个gene的变化了.但colony形态上会有差别.
我猜可能你哪个基因跟维持mESC 的naive状态相关.
l*f
22 楼
人后来有清唱
【在 s*********h 的大作中提到】
: 不过总觉得唱歌的哥们儿口型对不上
【在 s*********h 的大作中提到】
: 不过总觉得唱歌的哥们儿口型对不上
w*y
23 楼
看医生吧， 可能是什么东西扎进去了
o*i
24 楼
我觉得肯定是female的啊,不用看了.
如果是male的细胞.人家本来就一个x 您还给knockdown了 还让不让细胞活了.细胞没Y
活的好好的,没X死翘翘啊.
如果是male的细胞.人家本来就一个x 您还给knockdown了 还让不让细胞活了.细胞没Y
活的好好的,没X死翘翘啊.
q*x
25 楼
niuren
j*6
26 楼
看着好可怜啊，尤其结合第一张的脸，快去看医生吧.
big bless!
big bless!
s*r
27 楼
你的RNAseq是strand specific的？
不是的话应该没法区分xist和tsix因为它俩有一部分互为antisense，需要做specific
region的qPCR来验证是哪个的变化，可能降低的是tsix那是会激活xi的
【在 i*********0 的大作中提到】
:
: 是RNA-seq的结果。我也觉得很奇怪，
: 这一点比较奇怪，与X chromosome
: Xist在对照和
: 这个我要去问一下我们的搞生物信息学的。
: ok！
: 分化不明显。
: colony morphology改变如何，还是依旧维持与WT一样的
: colony looks like the control shRNA clone。 shiny and clear boundary
不是的话应该没法区分xist和tsix因为它俩有一部分互为antisense，需要做specific
region的qPCR来验证是哪个的变化，可能降低的是tsix那是会激活xi的
【在 i*********0 的大作中提到】
:
: 是RNA-seq的结果。我也觉得很奇怪，
: 这一点比较奇怪，与X chromosome
: Xist在对照和
: 这个我要去问一下我们的搞生物信息学的。
: ok！
: 分化不明显。
: colony morphology改变如何，还是依旧维持与WT一样的
: colony looks like the control shRNA clone。 shiny and clear boundary
s*a
28 楼
同意
主持人表现的很弱智
评委表现更弱智
攻击性的态度对待大叔
一份高高在上的口气
【在 s****y 的大作中提到】
: 主持人sb啊
主持人表现的很弱智
评委表现更弱智
攻击性的态度对待大叔
一份高高在上的口气
【在 s****y 的大作中提到】
: 主持人sb啊
i*0
29 楼
谢谢大家的comment。我再读一下paper，好好的消化一下，再和大家讨论。
i*a
30 楼
这个是真牛
【在 l****f 的大作中提到】
: 人后来有清唱
【在 l****f 的大作中提到】
: 人后来有清唱
a*h
31 楼
这主持人忒SB了
A*r
32 楼
赞！
【在 l****f 的大作中提到】
: 人后来有清唱
【在 l****f 的大作中提到】
: 人后来有清唱
e*3
33 楼
这唱的太牛逼了！唱的驼铃简直和原唱一样，而且最牛的就是讲话一口山东口音，但是
唱歌特标准的普通话。
【在 l****f 的大作中提到】
: 人后来有清唱
唱歌特标准的普通话。
【在 l****f 的大作中提到】
: 人后来有清唱
i*o
34 楼
主持人和评委全市sb，鉴定完毕
b*a
35 楼
樵字仿佛念的是焦
【在 e********3 的大作中提到】
: 这唱的太牛逼了！唱的驼铃简直和原唱一样，而且最牛的就是讲话一口山东口音，但是
: 唱歌特标准的普通话。
【在 e********3 的大作中提到】
: 这唱的太牛逼了！唱的驼铃简直和原唱一样，而且最牛的就是讲话一口山东口音，但是
: 唱歌特标准的普通话。
s*e
36 楼
主持人大SB
L*L
37 楼
出口不凡，真的是秒杀
w*n
38 楼
为毛评委都介么二逼呢。
p*t
39 楼
评委那就是配角，配角的2B衬托主角的NB
h*y
40 楼
没觉得评委有啥太不好的,只不过想含蓄的说他唱的专业吧,口气也是开玩笑的吧
f*l
41 楼
嗯。故意装做吃惊不相信的样子。
【在 h*********y 的大作中提到】
: 没觉得评委有啥太不好的,只不过想含蓄的说他唱的专业吧,口气也是开玩笑的吧
【在 h*********y 的大作中提到】
: 没觉得评委有啥太不好的,只不过想含蓄的说他唱的专业吧,口气也是开玩笑的吧
m*n
42 楼
很赞！
主持人评委都该来出去喂野狗！
【在 l****f 的大作中提到】
: 人后来有清唱
h*y
43 楼
怎么都这么没有幽默感,这还是joke版吗
D*a
44 楼
评委还能再2点么
S*r
45 楼
恩，我也觉得是
【在 f*******l 的大作中提到】
: 嗯。故意装做吃惊不相信的样子。
【在 f*******l 的大作中提到】
: 嗯。故意装做吃惊不相信的样子。
相关阅读
Michael Greenberg会跟自己培养的PI竞争么？我的师兄和师太ZZ有没有人发过薄厚电话面试 面筋之类的啊what do you think about second "co author" on paper?关于同位素， Chamgrape (香槟葡萄)同学来来来，我说你几句怎样对付实验室里的Golden Student/postdoc， 请勿置顶欧洲的生物研究（3）---生物研究一定要做苦行僧吗？好坏老板各三条特点生物PhD们为什么不回国？Synergistic activity wanted有谁用过non-reversible photoswitching or bleaching fluorescence probe最近掉鱼体会: 水深王八多在美国做千老，其实有一个优势好老板？坏老板？算算你的老板评价指数［请教］yale的一位教授欧洲的生物研究（０）－－－所谓欧洲药用蛋白如何纯化新鲜分离培养的淋巴细胞才过夜培养怎么会得支原体污染的？paper help + link论文时态的语法问题