shRNA promoter能用来表达蛋白么？# Biology - 生物学
b*k
1 楼
搜了很久也没有找到。记得小时候到餐馆里吃饭，蛋花汤都是非常薄的飘带， 很漂亮
。 就是怎么做都做不出来。很郁闷。
有大厨知道做鸡蛋汤如何能让鸡蛋成飘带状吗? 最好有能复制出来的比例。
。 就是怎么做都做不出来。很郁闷。
有大厨知道做鸡蛋汤如何能让鸡蛋成飘带状吗? 最好有能复制出来的比例。
d*b
2 楼
搞到现在，除了偷信息，搞噱头外，这几年发布的操作系统都没有一个可以超越xp的，
我老眼盘windows 10应该是windows最后一个操作系统了。对丫的区别是早死还是晚死
，哪天apple要是让mac随便可以在pc上安装，这天估计就是microsoft的下葬日。
我老眼盘windows 10应该是windows最后一个操作系统了。对丫的区别是早死还是晚死
，哪天apple要是让mac随便可以在pc上安装，这天估计就是microsoft的下葬日。
s*y
3 楼
我们本来是想做一个可诱导表达的蛋白载体，在同事们中问了一圈，只有一个人有一个
tetracyclin-inducible vector for shRNA (Tet-On pLKO) ,而且promoter 是H1。 我
想问的是，假如
我用这个来表达一个很小的蛋白（10kd)行不行？
tetracyclin-inducible vector for shRNA (Tet-On pLKO) ,而且promoter 是H1。 我
想问的是，假如
我用这个来表达一个很小的蛋白（10kd)行不行？
d*e
4 楼
加淀粉
h*g
5 楼
不停的补丁补丁，使用起来比mac复杂太多了，还要装杀病毒木马的软件，早死早超生
【在 d*b 的大作中提到】
: 搞到现在，除了偷信息，搞噱头外，这几年发布的操作系统都没有一个可以超越xp的，
: 我老眼盘windows 10应该是windows最后一个操作系统了。对丫的区别是早死还是晚死
: ，哪天apple要是让mac随便可以在pc上安装，这天估计就是microsoft的下葬日。
w*3
6 楼
不行。
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.0.1
【在 s******y 的大作中提到】
: 我们本来是想做一个可诱导表达的蛋白载体，在同事们中问了一圈，只有一个人有一个
: tetracyclin-inducible vector for shRNA (Tet-On pLKO) ,而且promoter 是H1。 我
: 想问的是，假如
: 我用这个来表达一个很小的蛋白（10kd)行不行？
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.0.1
【在 s******y 的大作中提到】
: 我们本来是想做一个可诱导表达的蛋白载体，在同事们中问了一圈，只有一个人有一个
: tetracyclin-inducible vector for shRNA (Tet-On pLKO) ,而且promoter 是H1。 我
: 想问的是，假如
: 我用这个来表达一个很小的蛋白（10kd)行不行？
b*k
7 楼
加了， 还是不行。蛋里加温水也不行。
【在 d***e 的大作中提到】
: 加淀粉
【在 d***e 的大作中提到】
: 加淀粉
c*t
8 楼
等Mac的收益占的比重越来越少的时候，这个还是很有可能的
【在 d*b 的大作中提到】
: 搞到现在，除了偷信息，搞噱头外，这几年发布的操作系统都没有一个可以超越xp的，
: 我老眼盘windows 10应该是windows最后一个操作系统了。对丫的区别是早死还是晚死
: ，哪天apple要是让mac随便可以在pc上安装，这天估计就是microsoft的下葬日。
【在 d*b 的大作中提到】
: 搞到现在，除了偷信息，搞噱头外，这几年发布的操作系统都没有一个可以超越xp的，
: 我老眼盘windows 10应该是windows最后一个操作系统了。对丫的区别是早死还是晚死
: ，哪天apple要是让mac随便可以在pc上安装，这天估计就是microsoft的下葬日。
s*y
9 楼
哦。。。能不能说说为什么呢？
【在 w*********3 的大作中提到】
: 不行。
:
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.0.1
【在 w*********3 的大作中提到】
: 不行。
:
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.0.1
l*s
10 楼
水不能滚开
要冒小泡泡时候把蛋液倒入，自然烫成蛋花
要冒小泡泡时候把蛋液倒入，自然烫成蛋花
t*o
11 楼
行为艺术么？osx那个让用户负责bug检测的风格和兼容性， 还是安心当个位数市场占
有率的小众系统的好，现在Win10 的市场占有率已经基本超过osx了吧
【在 d*b 的大作中提到】
: 搞到现在，除了偷信息，搞噱头外，这几年发布的操作系统都没有一个可以超越xp的，
: 我老眼盘windows 10应该是windows最后一个操作系统了。对丫的区别是早死还是晚死
: ，哪天apple要是让mac随便可以在pc上安装，这天估计就是microsoft的下葬日。
有率的小众系统的好，现在Win10 的市场占有率已经基本超过osx了吧
【在 d*b 的大作中提到】
: 搞到现在，除了偷信息，搞噱头外，这几年发布的操作系统都没有一个可以超越xp的，
: 我老眼盘windows 10应该是windows最后一个操作系统了。对丫的区别是早死还是晚死
: ，哪天apple要是让mac随便可以在pc上安装，这天估计就是microsoft的下葬日。
j*x
12 楼
没polyA呗
【在 s******y 的大作中提到】
: 哦。。。能不能说说为什么呢？
【在 s******y 的大作中提到】
: 哦。。。能不能说说为什么呢？
s*9
13 楼
先把鸡蛋打散，就是用筷子用力打几下就行了。水开的时候边慢慢倒蛋液，另一只手拿
着筷子在锅里蛋液下去的地方搅动，想穗子大就慢搅，想小穗子就快速。保证马到功成
。
着筷子在锅里蛋液下去的地方搅动，想穗子大就慢搅，想小穗子就快速。保证马到功成
。
d*u
14 楼
醒醒，该去刷试管了
【在 d*b 的大作中提到】
: 搞到现在，除了偷信息，搞噱头外，这几年发布的操作系统都没有一个可以超越xp的，
: 我老眼盘windows 10应该是windows最后一个操作系统了。对丫的区别是早死还是晚死
: ，哪天apple要是让mac随便可以在pc上安装，这天估计就是microsoft的下葬日。
【在 d*b 的大作中提到】
: 搞到现在，除了偷信息，搞噱头外，这几年发布的操作系统都没有一个可以超越xp的，
: 我老眼盘windows 10应该是windows最后一个操作系统了。对丫的区别是早死还是晚死
: ，哪天apple要是让mac随便可以在pc上安装，这天估计就是microsoft的下葬日。
s*y
15 楼
PolyA 以及ribosome binding site我们可以自己加啊。
我比较担心的是RNA pol III 是不是不能转录比较长的RNA? 或者转录出来的头部结构
不对所以核糖体结合不上去？
【在 j****x 的大作中提到】
: 没polyA呗
我比较担心的是RNA pol III 是不是不能转录比较长的RNA? 或者转录出来的头部结构
不对所以核糖体结合不上去？
【在 j****x 的大作中提到】
: 没polyA呗
y*a
16 楼
汤先勾芡！
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.6
【在 b***k 的大作中提到】
: 搜了很久也没有找到。记得小时候到餐馆里吃饭，蛋花汤都是非常薄的飘带， 很漂亮
: 。 就是怎么做都做不出来。很郁闷。
: 有大厨知道做鸡蛋汤如何能让鸡蛋成飘带状吗? 最好有能复制出来的比例。
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.6
【在 b***k 的大作中提到】
: 搜了很久也没有找到。记得小时候到餐馆里吃饭，蛋花汤都是非常薄的飘带， 很漂亮
: 。 就是怎么做都做不出来。很郁闷。
: 有大厨知道做鸡蛋汤如何能让鸡蛋成飘带状吗? 最好有能复制出来的比例。
P*C
17 楼
就没Mac软件哪个可用性，除了装逼基本上干不了正事。说他安全，估计是闭着眼睛说
的。
的。
a*a
18 楼
只知道polIII不能太长，最多一百多个碱基
【在 s******y 的大作中提到】
: PolyA 以及ribosome binding site我们可以自己加啊。
: 我比较担心的是RNA pol III 是不是不能转录比较长的RNA? 或者转录出来的头部结构
: 不对所以核糖体结合不上去？
【在 s******y 的大作中提到】
: PolyA 以及ribosome binding site我们可以自己加啊。
: 我比较担心的是RNA pol III 是不是不能转录比较长的RNA? 或者转录出来的头部结构
: 不对所以核糖体结合不上去？
O*d
19 楼
汤里要加淀粉。 水要开着，把打好的鸡蛋慢慢到入汤中。
【在 b***k 的大作中提到】
: 搜了很久也没有找到。记得小时候到餐馆里吃饭，蛋花汤都是非常薄的飘带， 很漂亮
: 。 就是怎么做都做不出来。很郁闷。
: 有大厨知道做鸡蛋汤如何能让鸡蛋成飘带状吗? 最好有能复制出来的比例。
【在 b***k 的大作中提到】
: 搜了很久也没有找到。记得小时候到餐馆里吃饭，蛋花汤都是非常薄的飘带， 很漂亮
: 。 就是怎么做都做不出来。很郁闷。
: 有大厨知道做鸡蛋汤如何能让鸡蛋成飘带状吗? 最好有能复制出来的比例。
d*a
20 楼
Mac的确不像PC那样频繁update
【在 P**C 的大作中提到】
: 就没Mac软件哪个可用性，除了装逼基本上干不了正事。说他安全，估计是闭着眼睛说
: 的。
【在 P**C 的大作中提到】
: 就没Mac软件哪个可用性，除了装逼基本上干不了正事。说他安全，估计是闭着眼睛说
: 的。
j*x
21 楼
首先你需要5'的mG cap，这个是核糖体结合的识别信号对吧？U6/H1都没戏。当然你可
以搞个IRES，但是效率是个问题。polyA自己加？这个不现实吧，合并IRES，基本上就
超过POL III的理想转录本长度范围了，何必冒险呢，既然要做表达载体，这么折腾没
任何意义啊，你要的这类载体满天飞，不行几百块买一个或者直接序列合成了
【在 s******y 的大作中提到】
: PolyA 以及ribosome binding site我们可以自己加啊。
: 我比较担心的是RNA pol III 是不是不能转录比较长的RNA? 或者转录出来的头部结构
: 不对所以核糖体结合不上去？
以搞个IRES，但是效率是个问题。polyA自己加？这个不现实吧，合并IRES，基本上就
超过POL III的理想转录本长度范围了，何必冒险呢，既然要做表达载体，这么折腾没
任何意义啊，你要的这类载体满天飞，不行几百块买一个或者直接序列合成了
【在 s******y 的大作中提到】
: PolyA 以及ribosome binding site我们可以自己加啊。
: 我比较担心的是RNA pol III 是不是不能转录比较长的RNA? 或者转录出来的头部结构
: 不对所以核糖体结合不上去？
J*K
22 楼
先在蛋液里加几滴油然后搅啊搅慢慢加到锅里
k*h
23 楼
mac好用，安全都是吹出来的。mac air上mit惨不忍睹。硬件兼容性就更弱了，不说各
种硬件组合，采集卡，USB外设的支持，就连显示器scale都只能简单double。那么多人
连windows 25%一级的scale都嫌不够用，还要改注册表，搞出160%，170%这种scale。
最近osx连安全这块都守不住了，爆出好多漏洞，病毒可以直接attack firmware，格硬
盘都没用。以前只是用的人太少，黑客来的搞而已。
mac的优势就在封闭，所以才能避免很多问题。如果osx变成windows一样的草地鸡，只
会有更多的病。
【在 d*b 的大作中提到】
: 搞到现在，除了偷信息，搞噱头外，这几年发布的操作系统都没有一个可以超越xp的，
: 我老眼盘windows 10应该是windows最后一个操作系统了。对丫的区别是早死还是晚死
: ，哪天apple要是让mac随便可以在pc上安装，这天估计就是microsoft的下葬日。
种硬件组合，采集卡，USB外设的支持，就连显示器scale都只能简单double。那么多人
连windows 25%一级的scale都嫌不够用，还要改注册表，搞出160%，170%这种scale。
最近osx连安全这块都守不住了，爆出好多漏洞，病毒可以直接attack firmware，格硬
盘都没用。以前只是用的人太少，黑客来的搞而已。
mac的优势就在封闭，所以才能避免很多问题。如果osx变成windows一样的草地鸡，只
会有更多的病。
【在 d*b 的大作中提到】
: 搞到现在，除了偷信息，搞噱头外，这几年发布的操作系统都没有一个可以超越xp的，
: 我老眼盘windows 10应该是windows最后一个操作系统了。对丫的区别是早死还是晚死
: ，哪天apple要是让mac随便可以在pc上安装，这天估计就是microsoft的下葬日。
s*y
24 楼
哦， 那就不行了。
【在 a*******a 的大作中提到】
: 只知道polIII不能太长，最多一百多个碱基
【在 a*******a 的大作中提到】
: 只知道polIII不能太长，最多一百多个碱基
s*a
25 楼
美国卖的淀粉里面很可能有致癌的chemical, 少吃为妙。
【在 d***e 的大作中提到】
: 加淀粉
【在 d***e 的大作中提到】
: 加淀粉
c*t
26 楼
我这个果黑都看不过去了，在OSX面前win的scale就是一坨屎，OSX高分屏不是只能
double，scale级别由小到大都做得很好
【在 k*h 的大作中提到】
: mac好用，安全都是吹出来的。mac air上mit惨不忍睹。硬件兼容性就更弱了，不说各
: 种硬件组合，采集卡，USB外设的支持，就连显示器scale都只能简单double。那么多人
: 连windows 25%一级的scale都嫌不够用，还要改注册表，搞出160%，170%这种scale。
: 最近osx连安全这块都守不住了，爆出好多漏洞，病毒可以直接attack firmware，格硬
: 盘都没用。以前只是用的人太少，黑客来的搞而已。
: mac的优势就在封闭，所以才能避免很多问题。如果osx变成windows一样的草地鸡，只
: 会有更多的病。
double，scale级别由小到大都做得很好
【在 k*h 的大作中提到】
: mac好用，安全都是吹出来的。mac air上mit惨不忍睹。硬件兼容性就更弱了，不说各
: 种硬件组合，采集卡，USB外设的支持，就连显示器scale都只能简单double。那么多人
: 连windows 25%一级的scale都嫌不够用，还要改注册表，搞出160%，170%这种scale。
: 最近osx连安全这块都守不住了，爆出好多漏洞，病毒可以直接attack firmware，格硬
: 盘都没用。以前只是用的人太少，黑客来的搞而已。
: mac的优势就在封闭，所以才能避免很多问题。如果osx变成windows一样的草地鸡，只
: 会有更多的病。
X*n
27 楼
Addgene $65一个，买一个吧。我有的全是gateway的，你又不喜欢 ：）
【在 s******y 的大作中提到】
: 哦， 那就不行了。
【在 s******y 的大作中提到】
: 哦， 那就不行了。
l*a
28 楼
我也有这个疑问，一直都是这么做的，可是就不能做出那种特别薄的蛋花，到底诀窍是
啥？
【在 O*******d 的大作中提到】
: 汤里要加淀粉。 水要开着，把打好的鸡蛋慢慢到入汤中。
啥？
【在 O*******d 的大作中提到】
: 汤里要加淀粉。 水要开着，把打好的鸡蛋慢慢到入汤中。
j*m
29 楼
那你就安心和xp过一辈子呗，无需动怒
【在 d*b 的大作中提到】
: 搞到现在，除了偷信息，搞噱头外，这几年发布的操作系统都没有一个可以超越xp的，
: 我老眼盘windows 10应该是windows最后一个操作系统了。对丫的区别是早死还是晚死
: ，哪天apple要是让mac随便可以在pc上安装，这天估计就是microsoft的下葬日。
【在 d*b 的大作中提到】
: 搞到现在，除了偷信息，搞噱头外，这几年发布的操作系统都没有一个可以超越xp的，
: 我老眼盘windows 10应该是windows最后一个操作系统了。对丫的区别是早死还是晚死
: ，哪天apple要是让mac随便可以在pc上安装，这天估计就是microsoft的下葬日。
s*y
30 楼
我们在Addgene翻了半天了，看到的可诱导系统都是需要两个vector 的，就是需要把那
个repressor 放在另外一个vector 上的。但是我们的细胞因为转了其他东西已经用掉
了两个marker 了(Neo/Kan 和GFP），所以希望弄一个单vector的系统。
另外，我的博士后们不肯用gateway。他们貌似对没有用过的东西都有戒心。我怎么说
都不行。麻烦啊。
【在 X******n 的大作中提到】
: Addgene $65一个，买一个吧。我有的全是gateway的，你又不喜欢 ：）
个repressor 放在另外一个vector 上的。但是我们的细胞因为转了其他东西已经用掉
了两个marker 了(Neo/Kan 和GFP），所以希望弄一个单vector的系统。
另外，我的博士后们不肯用gateway。他们貌似对没有用过的东西都有戒心。我怎么说
都不行。麻烦啊。
【在 X******n 的大作中提到】
: Addgene $65一个，买一个吧。我有的全是gateway的，你又不喜欢 ：）
o*m
31 楼
汤关火后再加鸡蛋，趁着汤的热气烧。
餐馆里鸡蛋都加很多水
【在 b***k 的大作中提到】
: 搜了很久也没有找到。记得小时候到餐馆里吃饭，蛋花汤都是非常薄的飘带， 很漂亮
: 。 就是怎么做都做不出来。很郁闷。
: 有大厨知道做鸡蛋汤如何能让鸡蛋成飘带状吗? 最好有能复制出来的比例。
餐馆里鸡蛋都加很多水
【在 b***k 的大作中提到】
: 搜了很久也没有找到。记得小时候到餐馆里吃饭，蛋花汤都是非常薄的飘带， 很漂亮
: 。 就是怎么做都做不出来。很郁闷。
: 有大厨知道做鸡蛋汤如何能让鸡蛋成飘带状吗? 最好有能复制出来的比例。
l*a
32 楼
人如其名！
【在 d*b 的大作中提到】
: 搞到现在，除了偷信息，搞噱头外，这几年发布的操作系统都没有一个可以超越xp的，
: 我老眼盘windows 10应该是windows最后一个操作系统了。对丫的区别是早死还是晚死
: ，哪天apple要是让mac随便可以在pc上安装，这天估计就是microsoft的下葬日。
【在 d*b 的大作中提到】
: 搞到现在，除了偷信息，搞噱头外，这几年发布的操作系统都没有一个可以超越xp的，
: 我老眼盘windows 10应该是windows最后一个操作系统了。对丫的区别是早死还是晚死
: ，哪天apple要是让mac随便可以在pc上安装，这天估计就是microsoft的下葬日。
X*n
33 楼
我的这些就在一个vector上。
哈哈，让他们把一个基因放到10个不同的vector里面，他们就知道了。
【在 s******y 的大作中提到】
: 我们在Addgene翻了半天了，看到的可诱导系统都是需要两个vector 的，就是需要把那
: 个repressor 放在另外一个vector 上的。但是我们的细胞因为转了其他东西已经用掉
: 了两个marker 了(Neo/Kan 和GFP），所以希望弄一个单vector的系统。
: 另外，我的博士后们不肯用gateway。他们貌似对没有用过的东西都有戒心。我怎么说
: 都不行。麻烦啊。
哈哈，让他们把一个基因放到10个不同的vector里面，他们就知道了。
【在 s******y 的大作中提到】
: 我们在Addgene翻了半天了，看到的可诱导系统都是需要两个vector 的，就是需要把那
: 个repressor 放在另外一个vector 上的。但是我们的细胞因为转了其他东西已经用掉
: 了两个marker 了(Neo/Kan 和GFP），所以希望弄一个单vector的系统。
: 另外，我的博士后们不肯用gateway。他们貌似对没有用过的东西都有戒心。我怎么说
: 都不行。麻烦啊。
b*k
34 楼
试过， 可能比例不对。 我需要的是那种像飘带一样的鸡蛋， 不是小花， 小云之类的
样子。 我看了看网上很多贴的照片， 没有一个是以前餐馆蛋汤的样子。
http://www.xiachufang.com/recipe/19114/dishes/
有做出带子装蛋汤成功的， 麻烦给个详细的步骤和比例。 如一勺淀粉， 3杯水， 一
个鸡蛋。。。 能复制的菜谱。 多谢。
【在 o*****m 的大作中提到】
: 汤关火后再加鸡蛋，趁着汤的热气烧。
: 餐馆里鸡蛋都加很多水
样子。 我看了看网上很多贴的照片， 没有一个是以前餐馆蛋汤的样子。
http://www.xiachufang.com/recipe/19114/dishes/
有做出带子装蛋汤成功的， 麻烦给个详细的步骤和比例。 如一勺淀粉， 3杯水， 一
个鸡蛋。。。 能复制的菜谱。 多谢。
【在 o*****m 的大作中提到】
: 汤关火后再加鸡蛋，趁着汤的热气烧。
: 餐馆里鸡蛋都加很多水
l*z
35 楼
呵呵．
【在 c****t 的大作中提到】
: 我这个果黑都看不过去了，在OSX面前win的scale就是一坨屎，OSX高分屏不是只能
: double，scale级别由小到大都做得很好
【在 c****t 的大作中提到】
: 我这个果黑都看不过去了，在OSX面前win的scale就是一坨屎，OSX高分屏不是只能
: double，scale级别由小到大都做得很好
X*n
36 楼
https://www.addgene.org/41394/
这个能找到合适的酶切位点不？
这个能找到合适的酶切位点不？
H*o
37 楼
鸡蛋只要蛋清。汤烧好，勾芡然后关火。然后把蛋清倒入，然后快速搅动汤。。就可以
了。
了。
l*z
38 楼
记得有一个软件叫ｍａｃｔｙｐｅ就是用ｍａｃ上面的渲染方式来渲染ｗｉｎ， 装上
后屏幕看上去好多了． 再一不用的话， 感觉ｗｉｎ的渲染就是一堆ｓｈｉｔ．
后屏幕看上去好多了． 再一不用的话， 感觉ｗｉｎ的渲染就是一堆ｓｈｉｔ．
s*y
39 楼
谢谢！！！这个好像也是gateway cloning吧？应该不需要关心酶切点吧？
【在 X******n 的大作中提到】
: https://www.addgene.org/41394/
: 这个能找到合适的酶切位点不？
【在 X******n 的大作中提到】
: https://www.addgene.org/41394/
: 这个能找到合适的酶切位点不？
l*e
40 楼
首先汤得勾芡。一个绝招是在一个大碗里把鸡蛋充分搅散，然后把热汤浇入。以前学校
食堂就是这么做的。
食堂就是这么做的。
B*r
41 楼
+1
据说总部要去某个盛产咖喱的国了，要跳的赶紧跳吧。
【在 d*b 的大作中提到】
: 搞到现在，除了偷信息，搞噱头外，这几年发布的操作系统都没有一个可以超越xp的，
: 我老眼盘windows 10应该是windows最后一个操作系统了。对丫的区别是早死还是晚死
: ，哪天apple要是让mac随便可以在pc上安装，这天估计就是microsoft的下葬日。
据说总部要去某个盛产咖喱的国了，要跳的赶紧跳吧。
【在 d*b 的大作中提到】
: 搞到现在，除了偷信息，搞噱头外，这几年发布的操作系统都没有一个可以超越xp的，
: 我老眼盘windows 10应该是windows最后一个操作系统了。对丫的区别是早死还是晚死
: ，哪天apple要是让mac随便可以在pc上安装，这天估计就是microsoft的下葬日。
X*n
42 楼
你也可以用酶切的，如果不喜gateway的话。
【在 s******y 的大作中提到】
: 谢谢！！！这个好像也是gateway cloning吧？应该不需要关心酶切点吧？
【在 s******y 的大作中提到】
: 谢谢！！！这个好像也是gateway cloning吧？应该不需要关心酶切点吧？
b*k
43 楼
上面这两个方法有意思， 下回试试
k*h
44 楼
刚试了下，还真的有很多scale level。不知道啥时候加的，以前没有。不过现在手上
只有mac air，没法实验其他scale的支持效果如何，回头找个来试试。
【在 c****t 的大作中提到】
: 我这个果黑都看不过去了，在OSX面前win的scale就是一坨屎，OSX高分屏不是只能
: double，scale级别由小到大都做得很好
只有mac air，没法实验其他scale的支持效果如何，回头找个来试试。
【在 c****t 的大作中提到】
: 我这个果黑都看不过去了，在OSX面前win的scale就是一坨屎，OSX高分屏不是只能
: double，scale级别由小到大都做得很好
a*d
45 楼
H1和U6 promotor 都不能用来过表达蛋白。
FUW TetO是常用的dox inducible overexpression lentivector.这个载体有多个酶切
位点，方便subcloning。我建议sunny老师找Stanford的Wernig lab要一下。
FUW TetO是常用的dox inducible overexpression lentivector.这个载体有多个酶切
位点，方便subcloning。我建议sunny老师找Stanford的Wernig lab要一下。
s*u
46 楼
多累呀
【在 b***k 的大作中提到】
: 搜了很久也没有找到。记得小时候到餐馆里吃饭，蛋花汤都是非常薄的飘带， 很漂亮
: 。 就是怎么做都做不出来。很郁闷。
: 有大厨知道做鸡蛋汤如何能让鸡蛋成飘带状吗? 最好有能复制出来的比例。
【在 b***k 的大作中提到】
: 搜了很久也没有找到。记得小时候到餐馆里吃饭，蛋花汤都是非常薄的飘带， 很漂亮
: 。 就是怎么做都做不出来。很郁闷。
: 有大厨知道做鸡蛋汤如何能让鸡蛋成飘带状吗? 最好有能复制出来的比例。
S*e
47 楼
俺觉得要是OS里加个鼠标右键进取Windows就真差不多完蛋了
【在 d*b 的大作中提到】
: 搞到现在，除了偷信息，搞噱头外，这几年发布的操作系统都没有一个可以超越xp的，
: 我老眼盘windows 10应该是windows最后一个操作系统了。对丫的区别是早死还是晚死
: ，哪天apple要是让mac随便可以在pc上安装，这天估计就是microsoft的下葬日。
【在 d*b 的大作中提到】
: 搞到现在，除了偷信息，搞噱头外，这几年发布的操作系统都没有一个可以超越xp的，
: 我老眼盘windows 10应该是windows最后一个操作系统了。对丫的区别是早死还是晚死
: ，哪天apple要是让mac随便可以在pc上安装，这天估计就是microsoft的下葬日。
X*n
48 楼
这个Addgene也有吧，我有一个就是这个改造的。
【在 a****d 的大作中提到】
: H1和U6 promotor 都不能用来过表达蛋白。
: FUW TetO是常用的dox inducible overexpression lentivector.这个载体有多个酶切
: 位点，方便subcloning。我建议sunny老师找Stanford的Wernig lab要一下。
【在 a****d 的大作中提到】
: H1和U6 promotor 都不能用来过表达蛋白。
: FUW TetO是常用的dox inducible overexpression lentivector.这个载体有多个酶切
: 位点，方便subcloning。我建议sunny老师找Stanford的Wernig lab要一下。
T*B
49 楼
关火，离灶，然后下蛋液，中等匀速朝一个方向搅拌即可。做成飘带，从不失败。
l*8
50 楼
id被盗了？
【在 d*b 的大作中提到】
: 搞到现在，除了偷信息，搞噱头外，这几年发布的操作系统都没有一个可以超越xp的，
: 我老眼盘windows 10应该是windows最后一个操作系统了。对丫的区别是早死还是晚死
: ，哪天apple要是让mac随便可以在pc上安装，这天估计就是microsoft的下葬日。
【在 d*b 的大作中提到】
: 搞到现在，除了偷信息，搞噱头外，这几年发布的操作系统都没有一个可以超越xp的，
: 我老眼盘windows 10应该是windows最后一个操作系统了。对丫的区别是早死还是晚死
: ，哪天apple要是让mac随便可以在pc上安装，这天估计就是microsoft的下葬日。
a*d
51 楼
有deposit就再方便不过了
【在 X******n 的大作中提到】
: 这个Addgene也有吧，我有一个就是这个改造的。
【在 X******n 的大作中提到】
: 这个Addgene也有吧，我有一个就是这个改造的。
l*a
52 楼
能奔一个做好的飘带么，我也想知道飘带怎么做的！
【在 T*****B 的大作中提到】
: 关火，离灶，然后下蛋液，中等匀速朝一个方向搅拌即可。做成飘带，从不失败。
【在 T*****B 的大作中提到】
: 关火，离灶，然后下蛋液，中等匀速朝一个方向搅拌即可。做成飘带，从不失败。
g*n
53 楼
本来就不会再出单行版了，以后都是定期 update
j*7
55 楼
楼主说的飘带状是连在一起的那种吗？如果是想要鸡蛋连在一起的那种的话，水开了直
接下锅，但是不用勺子搅动，然后就会变成大块的了~~
反之，如果是想要一小片一小片飘在水里的那种的话，就水开了下锅以后使劲搅合，然
后就能是那种只放一个鸡蛋，但是汤里都是鸡蛋沫子的那种感觉了
接下锅，但是不用勺子搅动，然后就会变成大块的了~~
反之，如果是想要一小片一小片飘在水里的那种的话，就水开了下锅以后使劲搅合，然
后就能是那种只放一个鸡蛋，但是汤里都是鸡蛋沫子的那种感觉了
l*a
56 楼
windows out, doors in.
【在 d*b 的大作中提到】
: 搞到现在，除了偷信息，搞噱头外，这几年发布的操作系统都没有一个可以超越xp的，
: 我老眼盘windows 10应该是windows最后一个操作系统了。对丫的区别是早死还是晚死
: ，哪天apple要是让mac随便可以在pc上安装，这天估计就是microsoft的下葬日。
【在 d*b 的大作中提到】
: 搞到现在，除了偷信息，搞噱头外，这几年发布的操作系统都没有一个可以超越xp的，
: 我老眼盘windows 10应该是windows最后一个操作系统了。对丫的区别是早死还是晚死
: ，哪天apple要是让mac随便可以在pc上安装，这天估计就是microsoft的下葬日。
s*y
57 楼
我看看我能不能狠一点逼他们用这个gateway system. 他们现在都在得过且过的用传统
的酶切法。我看他们主要是怕麻烦而且懒得去学新技术。
【在 X******n 的大作中提到】
: 你也可以用酶切的，如果不喜gateway的话。
的酶切法。我看他们主要是怕麻烦而且懒得去学新技术。
【在 X******n 的大作中提到】
: 你也可以用酶切的，如果不喜gateway的话。
T*B
58 楼
好的，今晚是娃爱吃的西式蔬菜清汤，明天我来做紫菜飘带鸡蛋汤。
【在 l**a 的大作中提到】
: 能奔一个做好的飘带么，我也想知道飘带怎么做的！
N*3
59 楼
mac是软硬结合的公司
ms是软件公司
这已经决定了他们的优缺点。
ms是软件公司
这已经决定了他们的优缺点。
s*r
60 楼
内切酶比重组酶便宜
【在 s******y 的大作中提到】
: 我看看我能不能狠一点逼他们用这个gateway system. 他们现在都在得过且过的用传统
: 的酶切法。我看他们主要是怕麻烦而且懒得去学新技术。
【在 s******y 的大作中提到】
: 我看看我能不能狠一点逼他们用这个gateway system. 他们现在都在得过且过的用传统
: 的酶切法。我看他们主要是怕麻烦而且懒得去学新技术。
T*B
61 楼
好的，今晚是娃爱吃的西式蔬菜清汤，明天我来做紫菜飘带鸡蛋汤。
【在 l**a 的大作中提到】
: 能奔一个做好的飘带么，我也想知道飘带怎么做的！
a*a
62 楼
gibson呢？
我们实验室三个人花了两个月用gateway做了四千个表达质粒并且验证了表达，还是很
好用的。。
我现在不用gateway/gibson主要是贵， 有人出钱还不用真是。。。
【在 s******y 的大作中提到】
: 我看看我能不能狠一点逼他们用这个gateway system. 他们现在都在得过且过的用传统
: 的酶切法。我看他们主要是怕麻烦而且懒得去学新技术。
我们实验室三个人花了两个月用gateway做了四千个表达质粒并且验证了表达，还是很
好用的。。
我现在不用gateway/gibson主要是贵， 有人出钱还不用真是。。。
【在 s******y 的大作中提到】
: 我看看我能不能狠一点逼他们用这个gateway system. 他们现在都在得过且过的用传统
: 的酶切法。我看他们主要是怕麻烦而且懒得去学新技术。
s*y
63 楼
哦。。。贵很多么？我其实还没有亲自用过不知道有多贵
（大家别鄙视我。。。－－)
但是如果用酶切法的话在不同vector之间倒腾比较麻烦吧?
【在 s******r 的大作中提到】
: 内切酶比重组酶便宜
（大家别鄙视我。。。－－)
但是如果用酶切法的话在不同vector之间倒腾比较麻烦吧?
【在 s******r 的大作中提到】
: 内切酶比重组酶便宜
X*n
64 楼
如果只做一个基因，确实是。如果经常把一个基因放到不同的载体里面，其实gateway
更便宜。
不要follow invitrogen的protocol，这个酶效率很高，可以降低到1／4
【在 s******r 的大作中提到】
: 内切酶比重组酶便宜
更便宜。
不要follow invitrogen的protocol，这个酶效率很高，可以降低到1／4
【在 s******r 的大作中提到】
: 内切酶比重组酶便宜
X*n
65 楼
你们自己做的PCR，还是买的entry clone？
很
【在 a*******a 的大作中提到】
: gibson呢？
: 我们实验室三个人花了两个月用gateway做了四千个表达质粒并且验证了表达，还是很
: 好用的。。
: 我现在不用gateway/gibson主要是贵， 有人出钱还不用真是。。。
很
【在 a*******a 的大作中提到】
: gibson呢？
: 我们实验室三个人花了两个月用gateway做了四千个表达质粒并且验证了表达，还是很
: 好用的。。
: 我现在不用gateway/gibson主要是贵， 有人出钱还不用真是。。。
a*a
66 楼
买的entry
自己做pcr就是神了。。。
【在 X******n 的大作中提到】
: 你们自己做的PCR，还是买的entry clone？
:
: 很
自己做pcr就是神了。。。
【在 X******n 的大作中提到】
: 你们自己做的PCR，还是买的entry clone？
:
: 很
a*a
67 楼
好像以前算过一个反应大概20-30刀吧，用这个是否划算主要看看系统稳定否。
我读博时候实验室所有的载体酶切位点顺序都是一样的，简单的换个载体什么的切了一
连也就是几RMB钱半天的labor，国内的博士生你懂的。
博后的话一天$100，克隆不稳定的实验室花一个星期去搞伐搞伐搞不出来就头疼了。
你那一周在实验室出现60小时就是勤快人了吧。。。
【在 s******y 的大作中提到】
: 哦。。。贵很多么？我其实还没有亲自用过不知道有多贵
: （大家别鄙视我。。。－－)
: 但是如果用酶切法的话在不同vector之间倒腾比较麻烦吧?
我读博时候实验室所有的载体酶切位点顺序都是一样的，简单的换个载体什么的切了一
连也就是几RMB钱半天的labor，国内的博士生你懂的。
博后的话一天$100，克隆不稳定的实验室花一个星期去搞伐搞伐搞不出来就头疼了。
你那一周在实验室出现60小时就是勤快人了吧。。。
【在 s******y 的大作中提到】
: 哦。。。贵很多么？我其实还没有亲自用过不知道有多贵
: （大家别鄙视我。。。－－)
: 但是如果用酶切法的话在不同vector之间倒腾比较麻烦吧?
g*5
68 楼
hi, Bro, you are boss!
【在 s******y 的大作中提到】
: 我看看我能不能狠一点逼他们用这个gateway system. 他们现在都在得过且过的用传统
: 的酶切法。我看他们主要是怕麻烦而且懒得去学新技术。
【在 s******y 的大作中提到】
: 我看看我能不能狠一点逼他们用这个gateway system. 他们现在都在得过且过的用传统
: 的酶切法。我看他们主要是怕麻烦而且懒得去学新技术。
s*y
69 楼
刚才跑到实验室去和他们说了，然后勉强同意了，然后仔细一查我们的库存，发现我们
没有Gateway entry vector... 悲剧了。。。
【在 g*********5 的大作中提到】
: hi, Bro, you are boss!
没有Gateway entry vector... 悲剧了。。。
【在 g*********5 的大作中提到】
: hi, Bro, you are boss!
X*n
70 楼
我寄给你吧
s*i
71 楼
找一个lenti的backbone, 把原来的MCS位点替换成 TRE-MCS-CMV-rtTA 就可以了。一劳
永逸。
【在 s******y 的大作中提到】
: 刚才跑到实验室去和他们说了，然后勉强同意了，然后仔细一查我们的库存，发现我们
: 没有Gateway entry vector... 悲剧了。。。
永逸。
【在 s******y 的大作中提到】
: 刚才跑到实验室去和他们说了，然后勉强同意了，然后仔细一查我们的库存，发现我们
: 没有Gateway entry vector... 悲剧了。。。
p*n
72 楼
gateway超好用的啊!
【在 s******y 的大作中提到】
: 我看看我能不能狠一点逼他们用这个gateway system. 他们现在都在得过且过的用传统
: 的酶切法。我看他们主要是怕麻烦而且懒得去学新技术。
【在 s******y 的大作中提到】
: 我看看我能不能狠一点逼他们用这个gateway system. 他们现在都在得过且过的用传统
: 的酶切法。我看他们主要是怕麻烦而且懒得去学新技术。
s*s
73 楼
原来实验室做了几十种promoter，几十种各式tag或者T2A
puro一类的，要表达啥，随便找个tag，promoter，然后去
网上或者facility的library里面挖个基因clone出来，一个礼拜
就搞定，两个礼拜细胞转染好，异常方便。
坏处是，gateway那个酶巨烂，绝对用不到十次。除非
每次做多个克隆，否则用过五六次就失活了，极端怀疑
life里面有猫腻，比如偷偷加了低浓度的蛋白酶一类
很
【在 a*******a 的大作中提到】
: gibson呢？
: 我们实验室三个人花了两个月用gateway做了四千个表达质粒并且验证了表达，还是很
: 好用的。。
: 我现在不用gateway/gibson主要是贵， 有人出钱还不用真是。。。
puro一类的，要表达啥，随便找个tag，promoter，然后去
网上或者facility的library里面挖个基因clone出来，一个礼拜
就搞定，两个礼拜细胞转染好，异常方便。
坏处是，gateway那个酶巨烂，绝对用不到十次。除非
每次做多个克隆，否则用过五六次就失活了，极端怀疑
life里面有猫腻，比如偷偷加了低浓度的蛋白酶一类
很
【在 a*******a 的大作中提到】
: gibson呢？
: 我们实验室三个人花了两个月用gateway做了四千个表达质粒并且验证了表达，还是很
: 好用的。。
: 我现在不用gateway/gibson主要是贵， 有人出钱还不用真是。。。
s*s
74 楼
entry不用买，网上无数library, 大多数不到100，省时省力。
我们学校facility以前做蛋白表达，自己都有全套的，全免费。
我看如果学校比较大，搞这么一套太方便了。
【在 X******n 的大作中提到】
: 你们自己做的PCR，还是买的entry clone？
:
: 很
我们学校facility以前做蛋白表达，自己都有全套的，全免费。
我看如果学校比较大，搞这么一套太方便了。
【在 X******n 的大作中提到】
: 你们自己做的PCR，还是买的entry clone？
:
: 很
X*n
75 楼
哪个公司有这么便宜的entry clone，能不能推荐一家？特别是一些比较长的基因如果
能在100块一下买来，那真可以省我不少时间？我通常都是自己PCR。
【在 s******s 的大作中提到】
: entry不用买，网上无数library, 大多数不到100，省时省力。
: 我们学校facility以前做蛋白表达，自己都有全套的，全免费。
: 我看如果学校比较大，搞这么一套太方便了。
能在100块一下买来，那真可以省我不少时间？我通常都是自己PCR。
【在 s******s 的大作中提到】
: entry不用买，网上无数library, 大多数不到100，省时省力。
: 我们学校facility以前做蛋白表达，自己都有全套的，全免费。
: 我看如果学校比较大，搞这么一套太方便了。
s*s
76 楼
不是公司的，是哪个学校或者研究所的，好像90一个，刚才翻了一下找不到bookmark了。
其实做的多，应该合起来买个ORFeomes的library，多爽啊
【在 X******n 的大作中提到】
: 哪个公司有这么便宜的entry clone，能不能推荐一家？特别是一些比较长的基因如果
: 能在100块一下买来，那真可以省我不少时间？我通常都是自己PCR。
其实做的多，应该合起来买个ORFeomes的library，多爽啊
【在 X******n 的大作中提到】
: 哪个公司有这么便宜的entry clone，能不能推荐一家？特别是一些比较长的基因如果
: 能在100块一下买来，那真可以省我不少时间？我通常都是自己PCR。
s*y
77 楼
哦，在哪里看到的？记起来之后跟我们分享一下吧！
了。
【在 s******s 的大作中提到】
: 不是公司的，是哪个学校或者研究所的，好像90一个，刚才翻了一下找不到bookmark了。
: 其实做的多，应该合起来买个ORFeomes的library，多爽啊
了。
【在 s******s 的大作中提到】
: 不是公司的，是哪个学校或者研究所的，好像90一个，刚才翻了一下找不到bookmark了。
: 其实做的多，应该合起来买个ORFeomes的library，多爽啊
s*s
78 楼
找到一个，$43一个clone，1600一个plate，够一般实验室用一阵子了
https://dnasu.org/DNASU/CloneCost.jsp
【在 s******y 的大作中提到】
: 哦，在哪里看到的？记起来之后跟我们分享一下吧！
:
: 了。
https://dnasu.org/DNASU/CloneCost.jsp
【在 s******y 的大作中提到】
: 哦，在哪里看到的？记起来之后跟我们分享一下吧！
:
: 了。
z*8
79 楼
Good
【在 s******s 的大作中提到】
: 找到一个，$43一个clone，1600一个plate，够一般实验室用一阵子了
: https://dnasu.org/DNASU/CloneCost.jsp
s*s
80 楼
话说这个省时省力，雇一个postdoc哼哧哼哧做一个礼拜，测序
说不定还是错的，不说人工，就是材料费也不值。一直想不通有
的PI就是不喜欢买，老想着去讨或者自己做
【在 z********8 的大作中提到】
:
: Good
说不定还是错的，不说人工，就是材料费也不值。一直想不通有
的PI就是不喜欢买，老想着去讨或者自己做
【在 z********8 的大作中提到】
:
: Good
X*n
81 楼
谢谢！
这个真是太便宜了。可惜我想要的几个基因没有。
提醒一下：Human Orfome 8.1里面大概有20％的基因不是全长或者是小的isoform。
再问个问题：如果有pLX304 lentivrial expression collection（大概13000个基因）
，你会用它来干什么呢？
【在 s******s 的大作中提到】
: 找到一个，$43一个clone，1600一个plate，够一般实验室用一阵子了
: https://dnasu.org/DNASU/CloneCost.jsp
这个真是太便宜了。可惜我想要的几个基因没有。
提醒一下：Human Orfome 8.1里面大概有20％的基因不是全长或者是小的isoform。
再问个问题：如果有pLX304 lentivrial expression collection（大概13000个基因）
，你会用它来干什么呢？
【在 s******s 的大作中提到】
: 找到一个，$43一个clone，1600一个plate，够一般实验室用一阵子了
: https://dnasu.org/DNASU/CloneCost.jsp
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