ChIP 中的sonication 导致蛋白降解 - 未名空间MITBBS历史存档

ChIP 中的sonication 导致蛋白降解# Biology - 生物学

j*i2014-07-01 07:07

1 楼

【以下文字转载自 Family 讨论区】
发信人: yesonse (totoro), 信区: Family
标题: 小声问下这里的jmm，老公一般隔几天洗澡
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Mar 28 23:33:41 2011, 美东)
我家老公总是不喜欢洗澡，一周洗澡一回就和扒皮一样痛苦。我的要求是既然一周洗澡
一次，那每天晚上都要洗屁屁，洗脸和洗脚；在我看来每天换内裤和袜子是必须的，特
受不了老公有时连洗脸洗脚都免了的那种，每次都要为这种事而交涉真不是一般的麻烦。
老公也是一肚子的气，我喜欢床上要干干净净的，每月至少洗床单被罩一次，他就开始
数落我。大家都是怎样处理这些事情的，还有我们结婚到现在一周年了，这些事情还是
没有协调过来。

H*n2014-07-01 07:07

2 楼

最近做一个Transcription Factor（120KD）的ChIP，很奇怪的事情，--
前面标准的1% formaldyhe RT 10min，0.125M Glycine RT 5 min, PBS wash,
裂解完细胞后，温和的sonication完后，input用western看发现原来条带的位置没有（
或者变的很淡），在下面有两条小的蛋白带。做了一下RNA pol-II的WB (>150kD <
200kD)也是类似的情况，原来条带的位置淡了很多，在底下出现了两三条size小的条带。
先后试了RIPA (0.1%SDS)和nuclear lysate(1%SDS)裂解，效果一样。只要有
sonication,即使是很温和的5个cycle 30s/30s (该条件下DNA shear都不完全200-
3000bp), 原来蛋白条带就会消失，取而代之的是底下出现的size小的条带。
请问这是sonication 导致大分子量的蛋白容易降解吗？要如何解决？

B*e2014-07-01 07:07

3 楼

俺这一辈子只洗过三次澡的说。。。

j*x2014-07-01 07:07

4 楼

降解之后，你的抗体还能认识片段的话，对ChIP似乎也没有大影响。

s*s2014-07-01 07:07

5 楼

哦原来你是法国国王啊
中文说的不错啊

【在 B********e 的大作中提到】

: 俺这一辈子只洗过三次澡的说。。。

m*52014-07-01 07:07

6 楼

protocol应该有问题，protein怎么处理western的？

【在 H****n 的大作中提到】

: 最近做一个Transcription Factor（120KD）的ChIP，很奇怪的事情，--
: 前面标准的1% formaldyhe RT 10min，0.125M Glycine RT 5 min, PBS wash,
: 裂解完细胞后，温和的sonication完后，input用western看发现原来条带的位置没有（
: 或者变的很淡），在下面有两条小的蛋白带。做了一下RNA pol-II的WB (>150kD <
: 200kD)也是类似的情况，原来条带的位置淡了很多，在底下出现了两三条size小的条带。
: 先后试了RIPA (0.1%SDS)和nuclear lysate(1%SDS)裂解，效果一样。只要有
: sonication,即使是很温和的5个cycle 30s/30s (该条件下DNA shear都不完全200-
: 3000bp), 原来蛋白条带就会消失，取而代之的是底下出现的size小的条带。
: 请问这是sonication 导致大分子量的蛋白容易降解吗？要如何解决？

x*a2014-07-01 07:07

7 楼

分床睡呗！

烦。

【在 j****i 的大作中提到】

: 【以下文字转载自 Family 讨论区】
: 发信人: yesonse (totoro), 信区: Family
: 标题: 小声问下这里的jmm，老公一般隔几天洗澡
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Mar 28 23:33:41 2011, 美东)
: 我家老公总是不喜欢洗澡，一周洗澡一回就和扒皮一样痛苦。我的要求是既然一周洗澡
: 一次，那每天晚上都要洗屁屁，洗脸和洗脚；在我看来每天换内裤和袜子是必须的，特
: 受不了老公有时连洗脸洗脚都免了的那种，每次都要为这种事而交涉真不是一般的麻烦。
: 老公也是一肚子的气，我喜欢床上要干干净净的，每月至少洗床单被罩一次，他就开始
: 数落我。大家都是怎样处理这些事情的，还有我们结婚到现在一周年了，这些事情还是
: 没有协调过来。

k*e2014-07-01 07:07

8 楼

推搞笑了。我原来一天洗两次，早晚。床单一周一换。现在不行了。所以理解和人平均
卫生水平的痛苦。

烦。

【在 j****i 的大作中提到】

: 【以下文字转载自 Family 讨论区】
: 发信人: yesonse (totoro), 信区: Family
: 标题: 小声问下这里的jmm，老公一般隔几天洗澡
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Mar 28 23:33:41 2011, 美东)
: 我家老公总是不喜欢洗澡，一周洗澡一回就和扒皮一样痛苦。我的要求是既然一周洗澡
: 一次，那每天晚上都要洗屁屁，洗脸和洗脚；在我看来每天换内裤和袜子是必须的，特
: 受不了老公有时连洗脸洗脚都免了的那种，每次都要为这种事而交涉真不是一般的麻烦。
: 老公也是一肚子的气，我喜欢床上要干干净净的，每月至少洗床单被罩一次，他就开始
: 数落我。大家都是怎样处理这些事情的，还有我们结婚到现在一周年了，这些事情还是
: 没有协调过来。

d*f2014-07-01 07:07

9 楼

md,我一天洗三次，洗得都快秃顶了

烦。

【在 j****i 的大作中提到】

: 【以下文字转载自 Family 讨论区】
: 发信人: yesonse (totoro), 信区: Family
: 标题: 小声问下这里的jmm，老公一般隔几天洗澡
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Mar 28 23:33:41 2011, 美东)
: 我家老公总是不喜欢洗澡，一周洗澡一回就和扒皮一样痛苦。我的要求是既然一周洗澡
: 一次，那每天晚上都要洗屁屁，洗脸和洗脚；在我看来每天换内裤和袜子是必须的，特
: 受不了老公有时连洗脸洗脚都免了的那种，每次都要为这种事而交涉真不是一般的麻烦。
: 老公也是一肚子的气，我喜欢床上要干干净净的，每月至少洗床单被罩一次，他就开始
: 数落我。大家都是怎样处理这些事情的，还有我们结婚到现在一周年了，这些事情还是
: 没有协调过来。

t*g2014-07-01 07:07

10 楼

男人洗一次澡性欲就降低一次的。

烦。

【在 j****i 的大作中提到】

: 【以下文字转载自 Family 讨论区】
: 发信人: yesonse (totoro), 信区: Family
: 标题: 小声问下这里的jmm，老公一般隔几天洗澡
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Mar 28 23:33:41 2011, 美东)
: 我家老公总是不喜欢洗澡，一周洗澡一回就和扒皮一样痛苦。我的要求是既然一周洗澡
: 一次，那每天晚上都要洗屁屁，洗脸和洗脚；在我看来每天换内裤和袜子是必须的，特
: 受不了老公有时连洗脸洗脚都免了的那种，每次都要为这种事而交涉真不是一般的麻烦。
: 老公也是一肚子的气，我喜欢床上要干干净净的，每月至少洗床单被罩一次，他就开始
: 数落我。大家都是怎样处理这些事情的，还有我们结婚到现在一周年了，这些事情还是
: 没有协调过来。

c*e2014-07-01 07:07

11 楼

反了吧

【在 t******g 的大作中提到】

: 男人洗一次澡性欲就降低一次的。
:
: 烦。

c*72014-07-01 07:07

12 楼

降一次，洗一次？

【在 c********e 的大作中提到】

: 反了吧

x*a2014-07-01 07:07

13 楼

这思维能力，牛！

【在 c*******7 的大作中提到】

: 降一次，洗一次？

x*a2014-07-01 07:07

14 楼

你多久没洗了？

【在 c********e 的大作中提到】

: 反了吧

c*e2014-07-01 07:07

15 楼

恩，洗洗就恢复了

【在 c*******7 的大作中提到】

: 降一次，洗一次？

q*p2014-07-01 07:07

16 楼

你是闺蜜，你不知道？

【在 x*****a 的大作中提到】

: 你多久没洗了？

c*e2014-07-01 07:07

17 楼

闺蜜知道这个就成小蜜了。

【在 q***p 的大作中提到】

: 你是闺蜜，你不知道？

q*p2014-07-01 07:07

18 楼

你果然聪明伶俐啊

【在 c********e 的大作中提到】

: 闺蜜知道这个就成小蜜了。

d*82014-07-01 07:07

19 楼

很不错啦，我连牙都懒得刷

烦。

【在 j****i 的大作中提到】

: 【以下文字转载自 Family 讨论区】
: 发信人: yesonse (totoro), 信区: Family
: 标题: 小声问下这里的jmm，老公一般隔几天洗澡
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Mar 28 23:33:41 2011, 美东)
: 我家老公总是不喜欢洗澡，一周洗澡一回就和扒皮一样痛苦。我的要求是既然一周洗澡
: 一次，那每天晚上都要洗屁屁，洗脸和洗脚；在我看来每天换内裤和袜子是必须的，特
: 受不了老公有时连洗脸洗脚都免了的那种，每次都要为这种事而交涉真不是一般的麻烦。
: 老公也是一肚子的气，我喜欢床上要干干净净的，每月至少洗床单被罩一次，他就开始
: 数落我。大家都是怎样处理这些事情的，还有我们结婚到现在一周年了，这些事情还是
: 没有协调过来。

r*32014-07-01 07:07

20 楼

xxoo也不洗洗？

Z*l2014-07-01 07:07

21 楼

不给XO，就不洗澡。

【在 r*******3 的大作中提到】

: xxoo也不洗洗？

O*s2014-07-01 07:07

22 楼

kao，一周一次，那大部分时间都是馊的

v*32014-07-01 07:07

23 楼

搞积分制，洗一次澡10分，积到100分就xxoo一次。

y*n2014-07-01 07:07

24 楼

如果是冷的地方也凑合。热的地方，一周洗一次那味道估计跟homeless有的一拼了。

P*k2014-07-01 07:07

25 楼

好是好，不过这样太费水了

【在 v*******3 的大作中提到】

: 搞积分制，洗一次澡10分，积到100分就xxoo一次。

b*e2014-07-01 07:07

26 楼

按中国人习惯，那要10天才能ooxx一次

【在 v*******3 的大作中提到】

: 搞积分制，洗一次澡10分，积到100分就xxoo一次。

l*k2014-07-01 07:07

27 楼

离

烦。

【在 j****i 的大作中提到】

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: 发信人: yesonse (totoro), 信区: Family
: 标题: 小声问下这里的jmm，老公一般隔几天洗澡
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Mar 28 23:33:41 2011, 美东)
: 我家老公总是不喜欢洗澡，一周洗澡一回就和扒皮一样痛苦。我的要求是既然一周洗澡
: 一次，那每天晚上都要洗屁屁，洗脸和洗脚；在我看来每天换内裤和袜子是必须的，特
: 受不了老公有时连洗脸洗脚都免了的那种，每次都要为这种事而交涉真不是一般的麻烦。
: 老公也是一肚子的气，我喜欢床上要干干净净的，每月至少洗床单被罩一次，他就开始
: 数落我。大家都是怎样处理这些事情的，还有我们结婚到现在一周年了，这些事情还是
: 没有协调过来。

g*d2014-07-01 07:07

28 楼

这么脏也有人要
最少也得每两天洗一次啊

【以下文字转载自 Family 讨论区】
发信人: yesonse (totoro), 信区: Family
标题: 小声问下这里的jmm，老公一般隔几天洗澡
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Mar 28 23:33:41 2011, 美东)
我家老公总是不喜欢洗澡，一周洗澡一回就和扒皮一样痛苦。我的要求是既然一周洗澡
一次，那每天晚上都要洗屁屁，洗脸和洗脚；在我看来每天换内裤和袜子是必须的，特
受不了老公有时连洗脸洗脚都免了的那种，每次都要为这种事而交涉真不是一般的麻烦。
老公也是一肚子的气，我喜欢床上要干干净净的，每月至少洗床单被罩一次，他就开始
数落我。大家都是怎样处理这些事情的，还有我们结婚到现在一周年了，这些事情还是
没有协调过来。

【在 j****i 的大作中提到】

: 【以下文字转载自 Family 讨论区】
: 发信人: yesonse (totoro), 信区: Family
: 标题: 小声问下这里的jmm，老公一般隔几天洗澡
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Mar 28 23:33:41 2011, 美东)
: 我家老公总是不喜欢洗澡，一周洗澡一回就和扒皮一样痛苦。我的要求是既然一周洗澡
: 一次，那每天晚上都要洗屁屁，洗脸和洗脚；在我看来每天换内裤和袜子是必须的，特
: 受不了老公有时连洗脸洗脚都免了的那种，每次都要为这种事而交涉真不是一般的麻烦。
: 老公也是一肚子的气，我喜欢床上要干干净净的，每月至少洗床单被罩一次，他就开始
: 数落我。大家都是怎样处理这些事情的，还有我们结婚到现在一周年了，这些事情还是
: 没有协调过来。

f*l2014-07-01 07:07

29 楼

按照中医理论/中国传说，洗澡伤身？

【在 c********e 的大作中提到】

: 反了吧

s*l2014-07-01 07:07

30 楼

不算什么。人家苏麻喇姑一年就一盆水洗洗，洗完了还把水喝了，照样活到90多岁。