c*e
2 楼
已经有手机买网上物品用来刷卡的东东出来了，但是没看见周围的朋友用。这么fancy
的东东，本版有几个人买了用来刷信用卡的？
手机上网购物，现在到底流行不？
的东东，本版有几个人买了用来刷信用卡的？
手机上网购物，现在到底流行不？
h*r
3 楼
做一个基因的knockout,加两端同源臂到loxp-ura3-loxp，转化，挑克隆，提DNA，用
PCR鉴定。问题是上游片段能扩增出来（一个引物在5' flank用于做construct之外,反
向引物在ura3之内），然后下游片段（一个引物在3' flank用于做construct之外,正向
引物在ura3之内）怎么都不work。试了好几个克隆，也换了primer.别的基因knockout
都没问题。按道理上游能扩出来，就表明基因被knockout了。想double check,结果下
游就死活不work.
请教大家可能的原因。多谢！
PCR鉴定。问题是上游片段能扩增出来（一个引物在5' flank用于做construct之外,反
向引物在ura3之内），然后下游片段（一个引物在3' flank用于做construct之外,正向
引物在ura3之内）怎么都不work。试了好几个克隆，也换了primer.别的基因knockout
都没问题。按道理上游能扩出来，就表明基因被knockout了。想double check,结果下
游就死活不work.
请教大家可能的原因。多谢！
e*t
4 楼
nope
A*D
5 楼
你在说啥？
s*y
6 楼
估计是下游有比较古怪的二级结构。建议加大DMSO的量，或者换一个Taq polymerase
knockout
【在 h**********r 的大作中提到】
: 做一个基因的knockout,加两端同源臂到loxp-ura3-loxp，转化，挑克隆，提DNA，用
: PCR鉴定。问题是上游片段能扩增出来（一个引物在5' flank用于做construct之外,反
: 向引物在ura3之内），然后下游片段（一个引物在3' flank用于做construct之外,正向
: 引物在ura3之内）怎么都不work。试了好几个克隆，也换了primer.别的基因knockout
: 都没问题。按道理上游能扩出来，就表明基因被knockout了。想double check,结果下
: 游就死活不work.
: 请教大家可能的原因。多谢！
knockout
【在 h**********r 的大作中提到】
: 做一个基因的knockout,加两端同源臂到loxp-ura3-loxp，转化，挑克隆，提DNA，用
: PCR鉴定。问题是上游片段能扩增出来（一个引物在5' flank用于做construct之外,反
: 向引物在ura3之内），然后下游片段（一个引物在3' flank用于做construct之外,正向
: 引物在ura3之内）怎么都不work。试了好几个克隆，也换了primer.别的基因knockout
: 都没问题。按道理上游能扩出来，就表明基因被knockout了。想double check,结果下
: 游就死活不work.
: 请教大家可能的原因。多谢！
w*u
7 楼
是不是不需要enroll，11.24直接去买就行
m*d
8 楼
你说的是square吗？
fancy
【在 c*********e 的大作中提到】
: 已经有手机买网上物品用来刷卡的东东出来了，但是没看见周围的朋友用。这么fancy
: 的东东，本版有几个人买了用来刷信用卡的？
: 手机上网购物，现在到底流行不？
fancy
【在 c*********e 的大作中提到】
: 已经有手机买网上物品用来刷卡的东东出来了，但是没看见周围的朋友用。这么fancy
: 的东东，本版有几个人买了用来刷信用卡的？
: 手机上网购物，现在到底流行不？
z*n
9 楼
用上游construct 外的primer和下游construct 外primer pcr 和control 比看size 变
化，要是p 不出来就是下游引物有问题
化，要是p 不出来就是下游引物有问题
s*g
10 楼
nope
不enroll的话一分钱都不会给你
【在 w*****u 的大作中提到】
: 是不是不需要enroll，11.24直接去买就行
不enroll的话一分钱都不会给你
【在 w*****u 的大作中提到】
: 是不是不需要enroll，11.24直接去买就行
h*r
11 楼
因为ura3和要knockout的基因size差不多，所以不太好比。准备把ura3去掉之后，直接
比size.
比size.
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