D*y
2 楼
BRAND NEW iPhone 2G 8GB unlocked V3.0
You can use it with AT&T, T-mobile, Sprint or whatever carrier worldwide as
long as it's GSM.
Come with genuine headset, USB cable, and wall charger ONLY.
NO Box, NO manual, NO SIM card, NO SIM card tool.
300块以上报价都可以考虑。
Call/text/voicemail: 626-298-0360
or email: d*******[email protected]
Cash & pick up ONLY. I'm located in Rowland Heights, Fullerton & Colima
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m*D
3 楼
如果PCR的template里包含WT和mutant（十来个Nt不一样，包含一个酶切位点。），PCR
出来的产物有1Kb，mutation就在这个PCR产物的中间。PCR产物用这个酶切后，上gel,
mutant都是两个片段，跑得快；WT没切该不变。分离这些片断就可以sequence.
问题是，就算酶切完全，WT那个band里面会不会有一条链是WT，一条Mutant的DNA分子
？而这样的DNA正好不能被酶切。因为两条链差别不大，在PCR的变形/退火过程里可能
形成这样的一条链是WT，一条Mutant的DNA分子。这样送去sequence,这个WT可能因此不
能被confirm?
碰到了上面的问题，还在为是不是酶切不全，还是这种一条链是WT，一条Mutant的DNA
假设而烦恼。
出来的产物有1Kb，mutation就在这个PCR产物的中间。PCR产物用这个酶切后，上gel,
mutant都是两个片段，跑得快；WT没切该不变。分离这些片断就可以sequence.
问题是，就算酶切完全，WT那个band里面会不会有一条链是WT，一条Mutant的DNA分子
？而这样的DNA正好不能被酶切。因为两条链差别不大，在PCR的变形/退火过程里可能
形成这样的一条链是WT，一条Mutant的DNA分子。这样送去sequence,这个WT可能因此不
能被confirm?
碰到了上面的问题，还在为是不是酶切不全，还是这种一条链是WT，一条Mutant的DNA
假设而烦恼。
m*t
4 楼
站eb2立场会觉得天经地义，站eb3立场会觉得天理不容
【在 n**********1 的大作中提到】
: 美国是个市场经济. 不以立场为转移
【在 n**********1 的大作中提到】
: 美国是个市场经济. 不以立场为转移
D*y
5 楼
ding
s*r
6 楼
PCR结束难道额外做了一步变性退火，或者样品放太久了？新做的双链合成结束除非
polymerase error哪里来的hybrid。担心酶切不完全的要做的精细点吧band切出来做ta
cloning送去测序。大款的直接上miseq
PCR
,
DNA
【在 m*********D 的大作中提到】
: 如果PCR的template里包含WT和mutant（十来个Nt不一样，包含一个酶切位点。），PCR
: 出来的产物有1Kb，mutation就在这个PCR产物的中间。PCR产物用这个酶切后，上gel,
: mutant都是两个片段，跑得快；WT没切该不变。分离这些片断就可以sequence.
: 问题是，就算酶切完全，WT那个band里面会不会有一条链是WT，一条Mutant的DNA分子
: ？而这样的DNA正好不能被酶切。因为两条链差别不大，在PCR的变形/退火过程里可能
: 形成这样的一条链是WT，一条Mutant的DNA分子。这样送去sequence,这个WT可能因此不
: 能被confirm?
: 碰到了上面的问题，还在为是不是酶切不全，还是这种一条链是WT，一条Mutant的DNA
: 假设而烦恼。
polymerase error哪里来的hybrid。担心酶切不完全的要做的精细点吧band切出来做ta
cloning送去测序。大款的直接上miseq
PCR
,
DNA
【在 m*********D 的大作中提到】
: 如果PCR的template里包含WT和mutant（十来个Nt不一样，包含一个酶切位点。），PCR
: 出来的产物有1Kb，mutation就在这个PCR产物的中间。PCR产物用这个酶切后，上gel,
: mutant都是两个片段，跑得快；WT没切该不变。分离这些片断就可以sequence.
: 问题是，就算酶切完全，WT那个band里面会不会有一条链是WT，一条Mutant的DNA分子
: ？而这样的DNA正好不能被酶切。因为两条链差别不大，在PCR的变形/退火过程里可能
: 形成这样的一条链是WT，一条Mutant的DNA分子。这样送去sequence,这个WT可能因此不
: 能被confirm?
: 碰到了上面的问题，还在为是不是酶切不全，还是这种一条链是WT，一条Mutant的DNA
: 假设而烦恼。
C*g
7 楼
降级EB3不一定导致EB3C排期落后。需要看EB3C的每年的需求量离2800究竟有多远。
【在 m*******t 的大作中提到】
: 站eb2立场会觉得天经地义，站eb3立场会觉得天理不容
【在 m*******t 的大作中提到】
: 站eb2立场会觉得天经地义，站eb3立场会觉得天理不容
q*x
8 楼
300以上3GS都可以买了， 虽然2手。
m*D
9 楼
到最后那个cycle,不会每个DNA strand都会被用来作template吧？我从gel下来了，送
seq,就那个mutation区间不清楚，所以有此一问。还在作第二次酶切呢。
不就是想省事么。mutant band到还行，没问题。这个不酶切的WT band让我头疼呢。
ta
【在 s******r 的大作中提到】
: PCR结束难道额外做了一步变性退火，或者样品放太久了？新做的双链合成结束除非
: polymerase error哪里来的hybrid。担心酶切不完全的要做的精细点吧band切出来做ta
: cloning送去测序。大款的直接上miseq
:
: PCR
: ,
: DNA
seq,就那个mutation区间不清楚，所以有此一问。还在作第二次酶切呢。
不就是想省事么。mutant band到还行，没问题。这个不酶切的WT band让我头疼呢。
ta
【在 s******r 的大作中提到】
: PCR结束难道额外做了一步变性退火，或者样品放太久了？新做的双链合成结束除非
: polymerase error哪里来的hybrid。担心酶切不完全的要做的精细点吧band切出来做ta
: cloning送去测序。大款的直接上miseq
:
: PCR
: ,
: DNA
w*t
10 楼
赞,最好是双赢.
【在 C********g 的大作中提到】
: 降级EB3不一定导致EB3C排期落后。需要看EB3C的每年的需求量离2800究竟有多远。
【在 C********g 的大作中提到】
: 降级EB3不一定导致EB3C排期落后。需要看EB3C的每年的需求量离2800究竟有多远。
D*y
11 楼
哥们，新的跟旧的差价至少一半我想这您肯定比我清楚吧，您觉得花300块买新的
iPhone 2g不如买旧的3gs，那同理干脆大家都别买2万的新Camry，改成同价的二手
Porsche得了。
萝卜青菜各有所爱，一代新iPhone市场价就是3、4百，就是很少有货了。肯定有人宁可
娶一房纯情丑媳妇，也不要那N婚的少妇
【在 q*x 的大作中提到】
: 300以上3GS都可以买了， 虽然2手。
iPhone 2g不如买旧的3gs，那同理干脆大家都别买2万的新Camry，改成同价的二手
Porsche得了。
萝卜青菜各有所爱，一代新iPhone市场价就是3、4百，就是很少有货了。肯定有人宁可
娶一房纯情丑媳妇，也不要那N婚的少妇
【在 q*x 的大作中提到】
: 300以上3GS都可以买了， 虽然2手。
s*r
12 楼
一般设计实验都是让想看的东西切出来，你设计成看不切的话就省不了事
不切的band是很可能不纯，直接送测吧，说不定就测出来了，fail的话就cloning才测呗
有十几个nt的差别弄两条不一样的pcr引物用pcr鉴定不是更简单直观，还整酶切干吗
【在 m*********D 的大作中提到】
: 到最后那个cycle,不会每个DNA strand都会被用来作template吧？我从gel下来了，送
: seq,就那个mutation区间不清楚，所以有此一问。还在作第二次酶切呢。
: 不就是想省事么。mutant band到还行，没问题。这个不酶切的WT band让我头疼呢。
:
: ta
不切的band是很可能不纯，直接送测吧，说不定就测出来了，fail的话就cloning才测呗
有十几个nt的差别弄两条不一样的pcr引物用pcr鉴定不是更简单直观，还整酶切干吗
【在 m*********D 的大作中提到】
: 到最后那个cycle,不会每个DNA strand都会被用来作template吧？我从gel下来了，送
: seq,就那个mutation区间不清楚，所以有此一问。还在作第二次酶切呢。
: 不就是想省事么。mutant band到还行，没问题。这个不酶切的WT band让我头疼呢。
:
: ta
z*r
13 楼
EB3升级的时候，EB2也没觉得天理不容啊
D*y
14 楼
昨天花了大半天给所有一代存货升级到了3.1.3并全部解锁。
3.1.3的2g在功能上和3.1.3的3g一模一样，没什么区别，相当于花更少的钱，买了部解
锁的3.1.3的iPhone 3g。
3.1.3的2g在功能上和3.1.3的3g一模一样，没什么区别，相当于花更少的钱，买了部解
锁的3.1.3的iPhone 3g。
D*a
15 楼
PCR永远不会纯，如果是sanger测序法，你一条500的，和一条250的，都会形成sanger
测序的产物。最好你酶切完了跑完胶之后，再nest pcr一下，这样你的酶切断的DNA就
不会形成带，终产物就纯了。而且你没发现pcr都会形成一条亮带么，那就是乱七八糟
的扩增出来的东西。
不过，如果你要用这种方法，不要用35 cycles的终产物稀释n倍，用十来个cycle的产
物，不要跑胶，直接拿去切，切完了直接nest pcr，然后跑胶纯化nest pcr的产物。这
样是为了防止你的pcr造成几个突变分子，而你稀释太多倍就很可能恰好碰到那几个突
变分子。
我们做过类似的测序，不过我们没有酶切这一步。所以酶切这一步是我理论上觉得应该
是这样，如考虑不全面请指正。但是其他的nest pcr和减少cycle都是我们做过的。
测序的产物。最好你酶切完了跑完胶之后，再nest pcr一下，这样你的酶切断的DNA就
不会形成带，终产物就纯了。而且你没发现pcr都会形成一条亮带么，那就是乱七八糟
的扩增出来的东西。
不过，如果你要用这种方法，不要用35 cycles的终产物稀释n倍，用十来个cycle的产
物，不要跑胶，直接拿去切，切完了直接nest pcr，然后跑胶纯化nest pcr的产物。这
样是为了防止你的pcr造成几个突变分子，而你稀释太多倍就很可能恰好碰到那几个突
变分子。
我们做过类似的测序，不过我们没有酶切这一步。所以酶切这一步是我理论上觉得应该
是这样，如考虑不全面请指正。但是其他的nest pcr和减少cycle都是我们做过的。
m*n
16 楼
那是因为PERM走了一茬，直接就耗掉8个月多，再加上140，都错开一年去了。高大上的
EB2早拿卡了，人不Care了。
而且EB3C一年份的全都升级才多少，我可以说不到500，连家属1000
要是EB3C不PERM直接升而且同时485，你看EB2不哼哼？
EB2早拿卡了，人不Care了。
而且EB3C一年份的全都升级才多少，我可以说不到500，连家属1000
要是EB3C不PERM直接升而且同时485，你看EB2不哼哼？
g*e
17 楼
200的话，还成
D*a
18 楼
ps 测pcr产物，需要多送几个样品，因为虽然只有少数几个分子有随机突变，不会看出
来，但是因为如果这几个突变恰好在第一二个cycle，你就哭了...
我现在已经忘了当时用的是什么酶了，但是应该不是高保真的酶，因为我们平常做
genotype就用那个，没有新买，而且我记得我老板还特别说过一句没必要用高保真的..
.
来，但是因为如果这几个突变恰好在第一二个cycle，你就哭了...
我现在已经忘了当时用的是什么酶了，但是应该不是高保真的酶，因为我们平常做
genotype就用那个，没有新买，而且我记得我老板还特别说过一句没必要用高保真的..
.
Y*o
19 楼
If there are not that many Eb3 upgraded to EB2 first, it shouldn't take 5
years for Eb2 to be greened (it was 2-3 years before, given the same amount
of H1B every year)
years for Eb2 to be greened (it was 2-3 years before, given the same amount
of H1B every year)
w*A
20 楼
请教LZ你是最近这两天升级的3.1.3吗？3.1.3固件已经被关了，现在好象任何iphone都
无法升级，恢复和降级到3.1.3固件。就是为了强迫大家用ios4固件，让越狱解锁的
iphone重新变itouch。如果你是这两天升的，你还真是牛人，我很想知道现在升级3.1.
3的技巧，请站内回复，谢谢
无法升级，恢复和降级到3.1.3固件。就是为了强迫大家用ios4固件，让越狱解锁的
iphone重新变itouch。如果你是这两天升的，你还真是牛人，我很想知道现在升级3.1.
3的技巧，请站内回复，谢谢
D*a
21 楼
也许可以把10个cycle的和35个cycle的一起跑胶，照着旁边那个的位置切？
sanger
【在 D*a 的大作中提到】
: PCR永远不会纯，如果是sanger测序法，你一条500的，和一条250的，都会形成sanger
: 测序的产物。最好你酶切完了跑完胶之后，再nest pcr一下，这样你的酶切断的DNA就
: 不会形成带，终产物就纯了。而且你没发现pcr都会形成一条亮带么，那就是乱七八糟
: 的扩增出来的东西。
: 不过，如果你要用这种方法，不要用35 cycles的终产物稀释n倍，用十来个cycle的产
: 物，不要跑胶，直接拿去切，切完了直接nest pcr，然后跑胶纯化nest pcr的产物。这
: 样是为了防止你的pcr造成几个突变分子，而你稀释太多倍就很可能恰好碰到那几个突
: 变分子。
: 我们做过类似的测序，不过我们没有酶切这一步。所以酶切这一步是我理论上觉得应该
: 是这样，如考虑不全面请指正。但是其他的nest pcr和减少cycle都是我们做过的。
sanger
【在 D*a 的大作中提到】
: PCR永远不会纯，如果是sanger测序法，你一条500的，和一条250的，都会形成sanger
: 测序的产物。最好你酶切完了跑完胶之后，再nest pcr一下，这样你的酶切断的DNA就
: 不会形成带，终产物就纯了。而且你没发现pcr都会形成一条亮带么，那就是乱七八糟
: 的扩增出来的东西。
: 不过，如果你要用这种方法，不要用35 cycles的终产物稀释n倍，用十来个cycle的产
: 物，不要跑胶，直接拿去切，切完了直接nest pcr，然后跑胶纯化nest pcr的产物。这
: 样是为了防止你的pcr造成几个突变分子，而你稀释太多倍就很可能恰好碰到那几个突
: 变分子。
: 我们做过类似的测序，不过我们没有酶切这一步。所以酶切这一步是我理论上觉得应该
: 是这样，如考虑不全面请指正。但是其他的nest pcr和减少cycle都是我们做过的。
l*e
22 楼
贵了！
m*D
23 楼
我是两个都看的。切出来的是mutant, seq也确认了。想的是wt band就一起从胶上回收
，seq就解决了。结果是在mutation区间太多杂峰。：（。
还试最后一次。不行就克隆去。谢谢！
测呗
【在 s******r 的大作中提到】
: 一般设计实验都是让想看的东西切出来，你设计成看不切的话就省不了事
: 不切的band是很可能不纯，直接送测吧，说不定就测出来了，fail的话就cloning才测呗
: 有十几个nt的差别弄两条不一样的pcr引物用pcr鉴定不是更简单直观，还整酶切干吗
，seq就解决了。结果是在mutation区间太多杂峰。：（。
还试最后一次。不行就克隆去。谢谢！
测呗
【在 s******r 的大作中提到】
: 一般设计实验都是让想看的东西切出来，你设计成看不切的话就省不了事
: 不切的band是很可能不纯，直接送测吧，说不定就测出来了，fail的话就cloning才测呗
: 有十几个nt的差别弄两条不一样的pcr引物用pcr鉴定不是更简单直观，还整酶切干吗
k*9
24 楼
iphone 4 都出了 还有人用2 ，我昨天在 cragist 买了个翻新带一年保修的32g 3gs
350 ， 2g 在ebay价格最多200 ，这个价格笑死我了
350 ， 2g 在ebay价格最多200 ，这个价格笑死我了
m*D
25 楼
哦，我这个是template里就有两种：wt/mutant。PCR后产物一起digestion，指望
mutant变成两条带，从gel上纯化回收seq. 没切的band也从gel上回收后送seq。如果酶
切完全，又没有一条strand是mutant/一条strand是wt的DNA（我想这种DNA酶切不了）
，我就省了好多事呢。结果seq出来，在mutation区间有很多杂峰，就怀疑要么酶切不
完全或一条strand是mutant/一条strand是wt的DNA存在了。
再切一次，不行就只好克隆了。：（。
谢谢！
sanger
【在 D*a 的大作中提到】
: PCR永远不会纯，如果是sanger测序法，你一条500的，和一条250的，都会形成sanger
: 测序的产物。最好你酶切完了跑完胶之后，再nest pcr一下，这样你的酶切断的DNA就
: 不会形成带，终产物就纯了。而且你没发现pcr都会形成一条亮带么，那就是乱七八糟
: 的扩增出来的东西。
: 不过，如果你要用这种方法，不要用35 cycles的终产物稀释n倍，用十来个cycle的产
: 物，不要跑胶，直接拿去切，切完了直接nest pcr，然后跑胶纯化nest pcr的产物。这
: 样是为了防止你的pcr造成几个突变分子，而你稀释太多倍就很可能恰好碰到那几个突
: 变分子。
: 我们做过类似的测序，不过我们没有酶切这一步。所以酶切这一步是我理论上觉得应该
: 是这样，如考虑不全面请指正。但是其他的nest pcr和减少cycle都是我们做过的。
mutant变成两条带，从gel上纯化回收seq. 没切的band也从gel上回收后送seq。如果酶
切完全，又没有一条strand是mutant/一条strand是wt的DNA（我想这种DNA酶切不了）
，我就省了好多事呢。结果seq出来，在mutation区间有很多杂峰，就怀疑要么酶切不
完全或一条strand是mutant/一条strand是wt的DNA存在了。
再切一次，不行就只好克隆了。：（。
谢谢！
sanger
【在 D*a 的大作中提到】
: PCR永远不会纯，如果是sanger测序法，你一条500的，和一条250的，都会形成sanger
: 测序的产物。最好你酶切完了跑完胶之后，再nest pcr一下，这样你的酶切断的DNA就
: 不会形成带，终产物就纯了。而且你没发现pcr都会形成一条亮带么，那就是乱七八糟
: 的扩增出来的东西。
: 不过，如果你要用这种方法，不要用35 cycles的终产物稀释n倍，用十来个cycle的产
: 物，不要跑胶，直接拿去切，切完了直接nest pcr，然后跑胶纯化nest pcr的产物。这
: 样是为了防止你的pcr造成几个突变分子，而你稀释太多倍就很可能恰好碰到那几个突
: 变分子。
: 我们做过类似的测序，不过我们没有酶切这一步。所以酶切这一步是我理论上觉得应该
: 是这样，如考虑不全面请指正。但是其他的nest pcr和减少cycle都是我们做过的。
D*y
26 楼
慢慢笑吧，我卖完收摊回家了。有人青睐朝鲜雏，有人钟爱美国鸡，各有所爱喽
【在 k********9 的大作中提到】
: iphone 4 都出了 还有人用2 ，我昨天在 cragist 买了个翻新带一年保修的32g 3gs
: 350 ， 2g 在ebay价格最多200 ，这个价格笑死我了
【在 k********9 的大作中提到】
: iphone 4 都出了 还有人用2 ，我昨天在 cragist 买了个翻新带一年保修的32g 3gs
: 350 ， 2g 在ebay价格最多200 ，这个价格笑死我了
D*a
27 楼
我说的就是这个啊，就是因为你pcr分离不可能纯，所以只能靠nest pcr解决，这样让
第二次的pcr产物只有一种，来解决跑胶分离不完全的问题。
【在 m*********D 的大作中提到】
: 哦，我这个是template里就有两种：wt/mutant。PCR后产物一起digestion，指望
: mutant变成两条带，从gel上纯化回收seq. 没切的band也从gel上回收后送seq。如果酶
: 切完全，又没有一条strand是mutant/一条strand是wt的DNA（我想这种DNA酶切不了）
: ，我就省了好多事呢。结果seq出来，在mutation区间有很多杂峰，就怀疑要么酶切不
: 完全或一条strand是mutant/一条strand是wt的DNA存在了。
: 再切一次，不行就只好克隆了。：（。
: 谢谢！
:
: sanger
第二次的pcr产物只有一种，来解决跑胶分离不完全的问题。
【在 m*********D 的大作中提到】
: 哦，我这个是template里就有两种：wt/mutant。PCR后产物一起digestion，指望
: mutant变成两条带，从gel上纯化回收seq. 没切的band也从gel上回收后送seq。如果酶
: 切完全，又没有一条strand是mutant/一条strand是wt的DNA（我想这种DNA酶切不了）
: ，我就省了好多事呢。结果seq出来，在mutation区间有很多杂峰，就怀疑要么酶切不
: 完全或一条strand是mutant/一条strand是wt的DNA存在了。
: 再切一次，不行就只好克隆了。：（。
: 谢谢！
:
: sanger
m*D
28 楼
我不知道你说的“不纯”是指那种情况：1。PCR产生的non-specific product,大小也
和specific产物一样；2。就是我说的那种一个DNA分子的两条链不match,一条是mutant
, 一条是wt。
前者有strategy可以对付：另用一个specific的sequence primer，而不用PCR里用的两
个primers之一。你说的Nested PCR思维上基本差不多，也可以，就多一步PCR。
后者是我担心的，nested PCR不能解决我的问题。我的mutant和wt用同一个非PCR的
specific sequencing primer。
【在 D*a 的大作中提到】
: 我说的就是这个啊，就是因为你pcr分离不可能纯，所以只能靠nest pcr解决，这样让
: 第二次的pcr产物只有一种，来解决跑胶分离不完全的问题。
和specific产物一样；2。就是我说的那种一个DNA分子的两条链不match,一条是mutant
, 一条是wt。
前者有strategy可以对付：另用一个specific的sequence primer，而不用PCR里用的两
个primers之一。你说的Nested PCR思维上基本差不多，也可以，就多一步PCR。
后者是我担心的，nested PCR不能解决我的问题。我的mutant和wt用同一个非PCR的
specific sequencing primer。
【在 D*a 的大作中提到】
: 我说的就是这个啊，就是因为你pcr分离不可能纯，所以只能靠nest pcr解决，这样让
: 第二次的pcr产物只有一种，来解决跑胶分离不完全的问题。
D*a
29 楼
就是你的产物，里面不是说对着500bp的就都是500bp的，其实有很多其他的不是500的
，被trap到里面，最优势的带当然就是你切碎了的了。
都是双链的，而不是说杂合链。
mutant
【在 m*********D 的大作中提到】
: 我不知道你说的“不纯”是指那种情况：1。PCR产生的non-specific product,大小也
: 和specific产物一样；2。就是我说的那种一个DNA分子的两条链不match,一条是mutant
: , 一条是wt。
: 前者有strategy可以对付：另用一个specific的sequence primer，而不用PCR里用的两
: 个primers之一。你说的Nested PCR思维上基本差不多，也可以，就多一步PCR。
: 后者是我担心的，nested PCR不能解决我的问题。我的mutant和wt用同一个非PCR的
: specific sequencing primer。
，被trap到里面，最优势的带当然就是你切碎了的了。
都是双链的，而不是说杂合链。
mutant
【在 m*********D 的大作中提到】
: 我不知道你说的“不纯”是指那种情况：1。PCR产生的non-specific product,大小也
: 和specific产物一样；2。就是我说的那种一个DNA分子的两条链不match,一条是mutant
: , 一条是wt。
: 前者有strategy可以对付：另用一个specific的sequence primer，而不用PCR里用的两
: 个primers之一。你说的Nested PCR思维上基本差不多，也可以，就多一步PCR。
: 后者是我担心的，nested PCR不能解决我的问题。我的mutant和wt用同一个非PCR的
: specific sequencing primer。
m*D
30 楼
理论上讲，gel就是按分子大小来分离DNA的呀。你这种一条链少了几百个bases的，应
该在gel上分开呀。
样品送出去了，这是最后一次。再不成功就换方法。这次的样品是上次酶切gel回收的
样品，再酶切在gel。倒是奇怪，gel上有一条细小的大分子量的条带。希望这是酶bind
上去后切不开，就一直结合在DNA上的，象gel-sift Assay出现的情况，把我担心的那
种一条是mutant，一条是wt的DNA分离出去了。
谢谢讨论！
【在 D*a 的大作中提到】
: 就是你的产物，里面不是说对着500bp的就都是500bp的，其实有很多其他的不是500的
: ，被trap到里面，最优势的带当然就是你切碎了的了。
: 都是双链的，而不是说杂合链。
:
: mutant
该在gel上分开呀。
样品送出去了，这是最后一次。再不成功就换方法。这次的样品是上次酶切gel回收的
样品，再酶切在gel。倒是奇怪，gel上有一条细小的大分子量的条带。希望这是酶bind
上去后切不开，就一直结合在DNA上的，象gel-sift Assay出现的情况，把我担心的那
种一条是mutant，一条是wt的DNA分离出去了。
谢谢讨论！
【在 D*a 的大作中提到】
: 就是你的产物，里面不是说对着500bp的就都是500bp的，其实有很多其他的不是500的
: ，被trap到里面，最优势的带当然就是你切碎了的了。
: 都是双链的，而不是说杂合链。
:
: mutant
D*a
31 楼
用t7 endonuclease切一下？
m*D
32 楼
Good idea! 等结果，不行可以试试你这个。这个不match的在中间，切了应该可以在
gel上分离出去。
【在 D***a 的大作中提到】
: 用t7 endonuclease切一下？
gel上分离出去。
【在 D***a 的大作中提到】
: 用t7 endonuclease切一下？
D*a
33 楼
我这不是给你说实际上不是这样的吗？
晕...
【在 m*********D 的大作中提到】
: 理论上讲，gel就是按分子大小来分离DNA的呀。你这种一条链少了几百个bases的，应
: 该在gel上分开呀。
: 样品送出去了，这是最后一次。再不成功就换方法。这次的样品是上次酶切gel回收的
: 样品，再酶切在gel。倒是奇怪，gel上有一条细小的大分子量的条带。希望这是酶bind
: 上去后切不开，就一直结合在DNA上的，象gel-sift Assay出现的情况，把我担心的那
: 种一条是mutant，一条是wt的DNA分离出去了。
: 谢谢讨论！
晕...
【在 m*********D 的大作中提到】
: 理论上讲，gel就是按分子大小来分离DNA的呀。你这种一条链少了几百个bases的，应
: 该在gel上分开呀。
: 样品送出去了，这是最后一次。再不成功就换方法。这次的样品是上次酶切gel回收的
: 样品，再酶切在gel。倒是奇怪，gel上有一条细小的大分子量的条带。希望这是酶bind
: 上去后切不开，就一直结合在DNA上的，象gel-sift Assay出现的情况，把我担心的那
: 种一条是mutant，一条是wt的DNA分离出去了。
: 谢谢讨论！
m*D
34 楼
塞，我也是委婉地说你这个说法没有理论根据呀。：（。
【在 D*a 的大作中提到】
: 我这不是给你说实际上不是这样的吗？
: 晕...
【在 D*a 的大作中提到】
: 我这不是给你说实际上不是这样的吗？
: 晕...
D*a
35 楼
你不信就算了呗...
反正我老板亲自做转基因老鼠的时候是这么做的...
你自己觉得wt/mt杂一起挺稳定也就罢了，你说说一条DNA中间鼓起一块来还能跑得赶上
wt/wt的带的理论依据又是啥？
【在 m*********D 的大作中提到】
: 塞，我也是委婉地说你这个说法没有理论根据呀。：（。
反正我老板亲自做转基因老鼠的时候是这么做的...
你自己觉得wt/mt杂一起挺稳定也就罢了，你说说一条DNA中间鼓起一块来还能跑得赶上
wt/wt的带的理论依据又是啥？
【在 m*********D 的大作中提到】
: 塞，我也是委婉地说你这个说法没有理论根据呀。：（。
m*D
36 楼
这这这。。。怎么听起来象小伙伴打架，打不过了就找爹爹一样。。。。：）。你老板
要是新的AP,bench上的你可以听听。拿到tenure后你就随便听听。我老板和学生讨论
bench上的tech,都市线咨询我的。
我的理论依据就是gel按DNA size来分的。单链DNA跑胶的快慢会和二级结构有关，只能
用denatured gel,但双链基本是按size来分的。我这个wt和mutant是九百多个Nt里面中
间有十来个nt变化，应该基本上是维持双链。我还每看有没有G：T配呢，要有几个GT配
，那就差别更小了。
【在 D*a 的大作中提到】
: 你不信就算了呗...
: 反正我老板亲自做转基因老鼠的时候是这么做的...
: 你自己觉得wt/mt杂一起挺稳定也就罢了，你说说一条DNA中间鼓起一块来还能跑得赶上
: wt/wt的带的理论依据又是啥？
要是新的AP,bench上的你可以听听。拿到tenure后你就随便听听。我老板和学生讨论
bench上的tech,都市线咨询我的。
我的理论依据就是gel按DNA size来分的。单链DNA跑胶的快慢会和二级结构有关，只能
用denatured gel,但双链基本是按size来分的。我这个wt和mutant是九百多个Nt里面中
间有十来个nt变化，应该基本上是维持双链。我还每看有没有G：T配呢，要有几个GT配
，那就差别更小了。
【在 D*a 的大作中提到】
: 你不信就算了呗...
: 反正我老板亲自做转基因老鼠的时候是这么做的...
: 你自己觉得wt/mt杂一起挺稳定也就罢了，你说说一条DNA中间鼓起一块来还能跑得赶上
: wt/wt的带的理论依据又是啥？
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