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3X repeat 克隆请教

3X repeat 克隆请教# Biology - 生物学

c*r2015-09-30 07:09

1 楼

今天下午错过的，他给我留言了
打算明天打过去
想问问其他面试的情况，和他对我面试意见，合适么？
另外大家还建议问点其他什么？比如还要多长时间？
欢迎任何建议意见，多谢

r*a2015-09-30 07:09

2 楼

各位好，
我有一个500bp的片段，要做3X的重复，作为一个大的1500bp的片段，最后放到一个
vector里面去。采用怎样的策略好呢？
一个一个放到vector里；还是弄一个片段，然后让他们自己连接（这样会不会乱连接）
，然后pcr，长度合适的放vector里啊？
谢谢先了！

q*x2015-09-30 07:09

3 楼

just ask what you want to know.

【在 c********r 的大作中提到】

: 今天下午错过的，他给我留言了
: 打算明天打过去
: 想问问其他面试的情况，和他对我面试意见，合适么？
: 另外大家还建议问点其他什么？比如还要多长时间？
: 欢迎任何建议意见，多谢

D*a2015-09-30 07:09

4 楼

从一篇文章上抄来的：
cDNA encoding 'artificial' SUMO-2 'polymers' was generated by ligating PCR
products encoding DeltaN11–SUMO-2 while simultaneously digesting with
restriction enzymes specific for BamHI (N-terminal site) and BglII (C-
terminal site) in T4 DNA ligase buffer, 150 mM NaCl, 0.1 mg ml- 1 BSA at 22
°C for 5 h (enzymes and buffers from New England Biolabs). This created a
range of cDNAs encoding DeltaN11–SUMO-2 cDNA 'monomers' and 'multimers'
that were separated by agarose gel electrophoresis and individually
extracted into solution. These were then ligated into the BamHI site in pHis
–TEV plasmid27 which had the EcoRI restriction site mutated into a stop
codon. Expression from these plasmids gives N-terminal 6His-tagged proteins
containing one, two, three or four copies of DeltaN11–SUMO-2. Each SUMO-2 '
monomer' is separated from the other by Arg–Ser, which is also present at
the C-terminus before the stop codon.

【在 r**a 的大作中提到】

: 各位好，
: 我有一个500bp的片段，要做3X的重复，作为一个大的1500bp的片段，最后放到一个
: vector里面去。采用怎样的策略好呢？
: 一个一个放到vector里；还是弄一个片段，然后让他们自己连接（这样会不会乱连接）
: ，然后pcr，长度合适的放vector里啊？
: 谢谢先了！