g*n
2 楼
我最近在比较C. elegans不同的突变体里的两个蛋白表达量的变化,结果总是重复性不
好。
1:我预测蛋白A在某个突变体里表达量增加,用了两组biological repeats,都很明显
。但因为actin量不一样(mutant比wt 的actin少5倍,但蛋白A的量反而还高一些),
我就重新调整了上样量想做个好看的图(technical repeats),结果调整了之后反而A的
增加没有那么明显了,只是略微增高。
2:蛋白B我预测也是在突变体里增加,做了一遍WB很明显,然后做了两个不同的
biological repeats,结果变成了几乎没有变化。
我现在纠结的是到底是我WB的技术环节出了问题,还是由于其他什么原因?我觉得1和2
很可能属于不同的原因。
PS:我用来做比较的WB条带没有饱和。
谢谢大家
好。
1:我预测蛋白A在某个突变体里表达量增加,用了两组biological repeats,都很明显
。但因为actin量不一样(mutant比wt 的actin少5倍,但蛋白A的量反而还高一些),
我就重新调整了上样量想做个好看的图(technical repeats),结果调整了之后反而A的
增加没有那么明显了,只是略微增高。
2:蛋白B我预测也是在突变体里增加,做了一遍WB很明显,然后做了两个不同的
biological repeats,结果变成了几乎没有变化。
我现在纠结的是到底是我WB的技术环节出了问题,还是由于其他什么原因?我觉得1和2
很可能属于不同的原因。
PS:我用来做比较的WB条带没有饱和。
谢谢大家
z*i
4 楼
同样的样品上,2ul 4ul 6ul 8ul,看你能否看到差别。
o*4
5 楼
1。有可能A降解了,有可能沉淀了(嗯,sds解不了所有的沉淀)。2.biological
repeat不出来很正常,多repeat几次看个SEM
repeat不出来很正常,多repeat几次看个SEM
g*n
6 楼
谢谢回复和建议。
另外有没有可能反复的加热和冰冻造成DTT失活?
另外有没有可能反复的加热和冰冻造成DTT失活?
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