6his-tagged protein purification# Biology - 生物学
s*e
1 楼
想在前院装Vinyl fence
看到lowe's有一种
Homedepot好像没有
不知道还可以在什么地方买到
看到lowe's有一种
Homedepot好像没有
不知道还可以在什么地方买到
h*9
2 楼
什么也看不到，就说we've got sth special in store for you. please check back
soon.
soon.
D*N
3 楼
装了几天了，感觉实在是太好用了！比原来的系统，已经升级后的2.3.5好了不止千倍
啊！！！现在换手机，特别是iphone的想法已经基本消失了。
强烈推荐！！！
啊！！！现在换手机，特别是iphone的想法已经基本消失了。
强烈推荐！！！
m*t
4 楼
我在２９３ 细胞里面表达一蛋白， ６HIS TAG的，用NI 方法提纯，跑胶， COOMASSIE
染色，没看见明显多的BAND，WB 是很明显增多的。 有经验的各位请指教。 PS： 准
备切胶MASS 分析。 谢先
染色，没看见明显多的BAND，WB 是很明显增多的。 有经验的各位请指教。 PS： 准
备切胶MASS 分析。 谢先
p*e
5 楼
homedepot也有，可能有季节性。开春一般都有。
c*n
6 楼
可以打911吗?
【在 D**********N 的大作中提到】
: 装了几天了，感觉实在是太好用了！比原来的系统，已经升级后的2.3.5好了不止千倍
: 啊！！！现在换手机，特别是iphone的想法已经基本消失了。
: 强烈推荐！！！
【在 D**********N 的大作中提到】
: 装了几天了，感觉实在是太好用了！比原来的系统，已经升级后的2.3.5好了不止千倍
: 啊！！！现在换手机，特别是iphone的想法已经基本消失了。
: 强烈推荐！！！
e*s
7 楼
感觉就是量太少了，尽量多上样品看看。
从多少细胞里提取？表达怎么样。
COOMASSIE
【在 m******t 的大作中提到】
: 我在２９３ 细胞里面表达一蛋白， ６HIS TAG的，用NI 方法提纯，跑胶， COOMASSIE
: 染色，没看见明显多的BAND，WB 是很明显增多的。 有经验的各位请指教。 PS： 准
: 备切胶MASS 分析。 谢先
从多少细胞里提取？表达怎么样。
COOMASSIE
【在 m******t 的大作中提到】
: 我在２９３ 细胞里面表达一蛋白， ６HIS TAG的，用NI 方法提纯，跑胶， COOMASSIE
: 染色，没看见明显多的BAND，WB 是很明显增多的。 有经验的各位请指教。 PS： 准
: 备切胶MASS 分析。 谢先
d*0
8 楼
CM10 will be even better
W*n
9 楼
HOW most of us preparing Buffers?
I use 10mM Imadizole in Lysis, 20mM in Wash, 250mM in Elution. But product
not too much.
I use 10mM Imadizole in Lysis, 20mM in Wash, 250mM in Elution. But product
not too much.
D*N
10 楼
没试过，但这个会有问题吗？
【在 c********n 的大作中提到】
: 可以打911吗?
【在 c********n 的大作中提到】
: 可以打911吗?
Z*5
11 楼
可以用哺乳动物细胞系表达纯化蛋白？很少见到啊。表达量应该非常低。貌似真核的用
酵母或者果蝇表达的多一点吧？
酵母或者果蝇表达的多一点吧？
c*n
12 楼
太有问题了，
【在 D**********N 的大作中提到】
: 没试过，但这个会有问题吗？
【在 D**********N 的大作中提到】
: 没试过，但这个会有问题吗？
c*b
13 楼
this buffer cannot be autoclaved. You can only use filter to sterilize it.
【在 W*******n 的大作中提到】
: HOW most of us preparing Buffers?
: I use 10mM Imadizole in Lysis, 20mM in Wash, 250mM in Elution. But product
: not too much.
【在 W*******n 的大作中提到】
: HOW most of us preparing Buffers?
: I use 10mM Imadizole in Lysis, 20mM in Wash, 250mM in Elution. But product
: not too much.
c*y
14 楼
怎么试？
打过去，跟警察说测试一下手机？
【在 c********n 的大作中提到】
: 太有问题了，
打过去，跟警察说测试一下手机？
【在 c********n 的大作中提到】
: 太有问题了，
l*u
15 楼
你是transient transfection 还是stable cell line ？很多蛋白表达量低的我都会收
一个月media 一起纯化，产量才能够用
COOMASSIE
【在 m******t 的大作中提到】
: 我在２９３ 细胞里面表达一蛋白， ６HIS TAG的，用NI 方法提纯，跑胶， COOMASSIE
: 染色，没看见明显多的BAND，WB 是很明显增多的。 有经验的各位请指教。 PS： 准
: 备切胶MASS 分析。 谢先
一个月media 一起纯化，产量才能够用
COOMASSIE
【在 m******t 的大作中提到】
: 我在２９３ 细胞里面表达一蛋白， ６HIS TAG的，用NI 方法提纯，跑胶， COOMASSIE
: 染色，没看见明显多的BAND，WB 是很明显增多的。 有经验的各位请指教。 PS： 准
: 备切胶MASS 分析。 谢先
f*a
16 楼
试试aokp，功能比cm9更强大。
如果是单身，911还是很重要的，有ld的就靠ld的911了。
如果是单身，911还是很重要的，有ld的就靠ld的911了。
s*y
17 楼
Mammalian cell 里面很多蛋白本身就有 4xHis, 会被Ni-NTA resin 一起
纯化拉下来。所以你的蛋白不能在如此多的背景蛋白中被看到。
如果你真的要用这个方法纯化蛋白的话，我的建议是：
1。用大量Hela 细胞，悬浮培养。
2。用high glucose medium.
3. 在你的蛋白上再加一个tag, 进行双重纯化。如果实在不能再加一个tag的话，也必
须至少在NTA-NI resin之后进一步用ion-exchange column + size exclusion column
进行再纯化。
COOMASSIE
【在 m******t 的大作中提到】
: 我在２９３ 细胞里面表达一蛋白， ６HIS TAG的，用NI 方法提纯，跑胶， COOMASSIE
: 染色，没看见明显多的BAND，WB 是很明显增多的。 有经验的各位请指教。 PS： 准
: 备切胶MASS 分析。 谢先
纯化拉下来。所以你的蛋白不能在如此多的背景蛋白中被看到。
如果你真的要用这个方法纯化蛋白的话，我的建议是：
1。用大量Hela 细胞，悬浮培养。
2。用high glucose medium.
3. 在你的蛋白上再加一个tag, 进行双重纯化。如果实在不能再加一个tag的话，也必
须至少在NTA-NI resin之后进一步用ion-exchange column + size exclusion column
进行再纯化。
COOMASSIE
【在 m******t 的大作中提到】
: 我在２９３ 细胞里面表达一蛋白， ６HIS TAG的，用NI 方法提纯，跑胶， COOMASSIE
: 染色，没看见明显多的BAND，WB 是很明显增多的。 有经验的各位请指教。 PS： 准
: 备切胶MASS 分析。 谢先
h*r
18 楼
非常流畅
【在 D**********N 的大作中提到】
: 装了几天了，感觉实在是太好用了！比原来的系统，已经升级后的2.3.5好了不止千倍
: 啊！！！现在换手机，特别是iphone的想法已经基本消失了。
: 强烈推荐！！！
【在 D**********N 的大作中提到】
: 装了几天了，感觉实在是太好用了！比原来的系统，已经升级后的2.3.5好了不止千倍
: 啊！！！现在换手机，特别是iphone的想法已经基本消失了。
: 强烈推荐！！！
W*n
19 楼
sunnyday, How about HEK 293 cell? I have one Protein secreted from this line
, 6-His taged, but expression low.
, 6-His taged, but expression low.
a*s
20 楼
不是说速度比cm7.2 stable 要慢么？怎么样？速度上慢的明显么？
i*e
21 楼
I have the same problem, though used 293-F cells.
line
【在 W*******n 的大作中提到】
: sunnyday, How about HEK 293 cell? I have one Protein secreted from this line
: , 6-His taged, but expression low.
line
【在 W*******n 的大作中提到】
: sunnyday, How about HEK 293 cell? I have one Protein secreted from this line
: , 6-His taged, but expression low.
D*N
22 楼
在手机上没试过CM7.2，但是在Touchpad上装过。Touchpad上装CM9后，LD想买ipad2的
想法就没了。
总之感觉CM9比CM7有不少的改进，而且使用流畅度和稳定性的提高非常大。在
captivate上的CM9给我的感觉就是，在也不用担心卡了。
【在 a******s 的大作中提到】
: 不是说速度比cm7.2 stable 要慢么？怎么样？速度上慢的明显么？
想法就没了。
总之感觉CM9比CM7有不少的改进，而且使用流畅度和稳定性的提高非常大。在
captivate上的CM9给我的感觉就是，在也不用担心卡了。
【在 a******s 的大作中提到】
: 不是说速度比cm7.2 stable 要慢么？怎么样？速度上慢的明显么？
s*y
23 楼
我没有亲自用过HEK 293 cells suspension culture, 但是应该也是可行的
http://hek293.com/hek293_cell_culture.html
line
【在 W*******n 的大作中提到】
: sunnyday, How about HEK 293 cell? I have one Protein secreted from this line
: , 6-His taged, but expression low.
http://hek293.com/hek293_cell_culture.html
line
【在 W*******n 的大作中提到】
: sunnyday, How about HEK 293 cell? I have one Protein secreted from this line
: , 6-His taged, but expression low.
D*N
24 楼
CM9都是experimental的版本，等CM10还得有一段时间啊，先上CM9了。。。而且不知道
CM10对硬件得要求是否会太高，毕竟captivate是两年前得老机器啊。
【在 d*****0 的大作中提到】
: CM10 will be even better
CM10对硬件得要求是否会太高，毕竟captivate是两年前得老机器啊。
【在 d*****0 的大作中提到】
: CM10 will be even better
i*8
25 楼
4.1的改动不是很大，将得到升级的nexus s和captivate 一样的配置，而且CM10的出来
的速度会比CM9快很多，基本CM9稳定版出来，CM10就不远了
【在 D**********N 的大作中提到】
: CM9都是experimental的版本，等CM10还得有一段时间啊，先上CM9了。。。而且不知道
: CM10对硬件得要求是否会太高，毕竟captivate是两年前得老机器啊。
的速度会比CM9快很多，基本CM9稳定版出来，CM10就不远了
【在 D**********N 的大作中提到】
: CM9都是experimental的版本，等CM10还得有一段时间啊，先上CM9了。。。而且不知道
: CM10对硬件得要求是否会太高，毕竟captivate是两年前得老机器啊。
D*N
26 楼
到时候肯定升级4.1的一个相对稳定的版本。现在用4.0.4已经很爽了。当初这个
captivate是免费拿到的，在垃圾的2.1和2.3.5系统煎熬快两年后，终于用上比较舒服
的4.0.4了。有4.1肯定上。
【在 i*********8 的大作中提到】
: 4.1的改动不是很大，将得到升级的nexus s和captivate 一样的配置，而且CM10的出来
: 的速度会比CM9快很多，基本CM9稳定版出来，CM10就不远了
captivate是免费拿到的，在垃圾的2.1和2.3.5系统煎熬快两年后，终于用上比较舒服
的4.0.4了。有4.1肯定上。
【在 i*********8 的大作中提到】
: 4.1的改动不是很大，将得到升级的nexus s和captivate 一样的配置，而且CM10的出来
: 的速度会比CM9快很多，基本CM9稳定版出来，CM10就不远了
h*a
27 楼
选的哪个版本？XDA上版本太多。
【在 D**********N 的大作中提到】
: 装了几天了，感觉实在是太好用了！比原来的系统，已经升级后的2.3.5好了不止千倍
: 啊！！！现在换手机，特别是iphone的想法已经基本消失了。
: 强烈推荐！！！
【在 D**********N 的大作中提到】
: 装了几天了，感觉实在是太好用了！比原来的系统，已经升级后的2.3.5好了不止千倍
: 啊！！！现在换手机，特别是iphone的想法已经基本消失了。
: 强烈推荐！！！
D*N
28 楼
我用的是7月7号发布得那个。
【在 h****a 的大作中提到】
: 选的哪个版本？XDA上版本太多。
【在 h****a 的大作中提到】
: 选的哪个版本？XDA上版本太多。
h*a
29 楼
http://forum.xda-developers.com/showthread.php?t=1522881
http://forum.xda-developers.com/showthread.php?t=1362092
这两个哪个好用？
【在 D**********N 的大作中提到】
: 我用的是7月7号发布得那个。
http://forum.xda-developers.com/showthread.php?t=1362092
这两个哪个好用？
【在 D**********N 的大作中提到】
: 我用的是7月7号发布得那个。
b*r
30 楼
can you provide a link?
thanks,
【在 D**********N 的大作中提到】
: 我用的是7月7号发布得那个。
thanks,
【在 D**********N 的大作中提到】
: 我用的是7月7号发布得那个。
D*N
31 楼
我是在7号从这里下的CM9：
http://download.cyanogenmod.com/?type=nightly&device=captivatem
follow他们的instruction去装就可以了：
http://wiki.cyanogenmod.com/wiki/Samsung_Captivate:_Full_Update
【在 b*****r 的大作中提到】
: can you provide a link?
: thanks,
http://download.cyanogenmod.com/?type=nightly&device=captivatem
follow他们的instruction去装就可以了：
http://wiki.cyanogenmod.com/wiki/Samsung_Captivate:_Full_Update
【在 b*****r 的大作中提到】
: can you provide a link?
: thanks,
e*n
32 楼
running CM9 on captivate too, very fast and smooth. but sometimes it freeze
and need to take the battery out, although less often than latest tstock rom
.
Highly recommend CM9! Android 4.0 is a huge improvement
and need to take the battery out, although less often than latest tstock rom
.
Highly recommend CM9! Android 4.0 is a huge improvement
h*a
33 楼
现在装了第一个，选了个回复最多的，呵呵，好像耗电大一些，原来可以一冲两天现在
只能一天。
CM9耗电如何？
【在 h****a 的大作中提到】
: http://forum.xda-developers.com/showthread.php?t=1522881
: http://forum.xda-developers.com/showthread.php?t=1362092
: 这两个哪个好用？
只能一天。
CM9耗电如何？
【在 h****a 的大作中提到】
: http://forum.xda-developers.com/showthread.php?t=1522881
: http://forum.xda-developers.com/showthread.php?t=1362092
: 这两个哪个好用？
h*r
34 楼
直接从rom manager里下载，和安装 cm9。非常方便。
h*a
35 楼
耗电量如何？
freeze
rom
【在 e**n 的大作中提到】
: running CM9 on captivate too, very fast and smooth. but sometimes it freeze
: and need to take the battery out, although less often than latest tstock rom
: .
: Highly recommend CM9! Android 4.0 is a huge improvement
freeze
rom
【在 e**n 的大作中提到】
: running CM9 on captivate too, very fast and smooth. but sometimes it freeze
: and need to take the battery out, although less often than latest tstock rom
: .
: Highly recommend CM9! Android 4.0 is a huge improvement
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