m*p
2 楼
最近在做利用lentivirus表达sgRNA KO一个基因，转染第一步就出现问题。
针对两个位点病毒是sigma定制的，寄给我的滴度是5*10^6/ml和1*10^6/ml，我用它们
转了两个细胞（12孔板，每个孔10微升病毒），该病毒正常应该有GFP及puro抗性基因
表达的，我在转染24小时和48小时居然没有看到任何荧光。
我原来用过santa cruze的shRNA病毒，转染后用puromycin筛选，转染效果还是可以的
，最后也筛选出了我要的单克隆细胞。
有人遇到过我现在这个情况吗？怎么解决？
谢啦
针对两个位点病毒是sigma定制的，寄给我的滴度是5*10^6/ml和1*10^6/ml，我用它们
转了两个细胞（12孔板，每个孔10微升病毒），该病毒正常应该有GFP及puro抗性基因
表达的，我在转染24小时和48小时居然没有看到任何荧光。
我原来用过santa cruze的shRNA病毒，转染后用puromycin筛选，转染效果还是可以的
，最后也筛选出了我要的单克隆细胞。
有人遇到过我现在这个情况吗？怎么解决？
谢啦
c*o
3 楼
不就是传说中阿布的商业表情么
【在 c*******7 的大作中提到】
: 哦也
【在 c*******7 的大作中提到】
: 哦也
b*s
4 楼
你看看这个promoter是否在该细胞内能有效表达后面的GFP
f*k
5 楼
我有点疑惑，你说你拿到的是病毒，怎么还转染（transfection）？你是说转导（
transduction）吗？
你的细胞是不是感染效率不高呢？可以尝试spin infection外加用polybrene （4ug/ml
)。在我手里用spin infection和polybrene一起的话可以把在B细胞的感染效率提到90%
甚至95%以上。
不过我都是自己克隆sgRNA进lentiviral vector，然后转染293细胞做病毒。如果是
sigma做的病毒有问题，你没办法知道。
transduction）吗？
你的细胞是不是感染效率不高呢？可以尝试spin infection外加用polybrene （4ug/ml
)。在我手里用spin infection和polybrene一起的话可以把在B细胞的感染效率提到90%
甚至95%以上。
不过我都是自己克隆sgRNA进lentiviral vector，然后转染293细胞做病毒。如果是
sigma做的病毒有问题，你没办法知道。
相关阅读
大家写文章时画图都用哪个软件？加州做胚胎干细胞的大牛有哪些啊？hepatocyte isolationGood article on drug discovery询问关于tufts 大学附近有哪些大学？三哥保护其国民利益的能力和技巧，是土鳖的模范。 (转载)你是否对作千老的生活已经厌倦？请推荐一个胞质marker找去日本参加Arabidopsis conference的会友及问个问题谁科普下美国这边的tenure制度做metastasis的都有哪些大牛呀？Amy Bishop前途无量啊借人气问一下生物统计到底和统计有什么区别？ 那个好找工作2个小offer，大家给建议选哪一个？关于microRNA的问题请教: 请推荐一个highly metastatic lung cancer cell lineHelp on two articles, thanks!有能将DNA降解成单个nucleotide的DNase吗谈谈克隆Mt Sinai有多牛b呀？